直腸癌組織MRP的表達及臨床意義

吳偉宏　王豐平　費勝琪　陳貴平

直腸癌組織MRP的表達及臨床意義

吳偉宏王豐平費勝琪陳貴平

目的 探討直腸癌組織中多藥耐藥相關蛋白（MRP）的表達情況與臨床病理資料、生存情況的相關性。方法 應用免疫組化方法檢測直腸癌組織中MRP的表達情況，并分析MRP表達與患者臨床病理參數及預后之間的關系。結果 在194例直腸癌術后組織標本中，有86例（44.3%）存在MRP的高表達，與腫瘤組織分化程度（P=0.029）顯著相關，而未發現其與直腸癌患者年齡、性別、生長方式、TNM分期等因素的相關性。生存分析發現MRP高表達的患者遠期生存時間明顯長于低表達組（P=0.014）。結論 直腸癌組織中MRP的表達情況與腫瘤分化程度存在關聯，并影響患者的預后。

直腸癌 多藥耐藥相關蛋白 免疫組化

多藥耐藥相關蛋白（MRP）是多種惡性腫瘤產生化療耐藥的物質基礎，近年來對其生理功能、轉運調控等機制進行了較多研究和探討，但是在具體臨床應用中的研究不多。為此，本觀察應用免疫組化方法檢測直腸癌組織中MRP的表達情況，并結合臨床探討其與病理特征及預后之間的關系。報道如下。

1　臨床資料

1.1一般資料 收集長興縣人民醫院2007年11月至2012年9月194例直腸癌患者的術后組織標本，病理均證實為直腸腺癌，患者之前均未被診斷為其他惡性腫瘤，未行放化療等抗腫瘤治療。本組中男118例，女76例；年齡17～82歲，平均（56.8±11.5）歲。浸潤深度：T1 2例、T2 46例、T3 141例、T4 4例。淋巴結轉移：N0 87例、N1 53例、N2 108例。遠處轉移：陰性183例、陽性11例。病理分期：Ⅰ期28例、Ⅱ期46例、Ⅲ期109例、Ⅳ期11例。

1.2試劑與方法 MRP一抗試劑盒購自福州邁新生物工程技術公司。免疫組化：所有標本經10%甲醛固定，石蠟包埋，制成4μm連續切片；用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作陰性對照，已知表達陽性的腫瘤組織作陽性對照。結果判斷在光學顯微鏡下觀察，以細胞結構中存在粗細一致的棕黃色顆粒為陽性，無著色或陽性細胞比例＜10%為（-），陽性細胞在10%～25%為（+），25%～75%為（++），＞75%為（+++）。參考既往文獻，將其分成兩組：（-）和（+）合并成低表達組；（++）和（+++）合并成高表達組。

1.3隨訪 隨訪方式為門診+電話隨訪，記錄完整的隨訪資料。定義終點事件為死亡，自確診日期開始計算總生存期（OS），末次隨訪時間為2013年12月10日，失訪者以最近一次有效隨訪日期作為截尾值處理。

1.4統計學方法 采用SPSS 18.0統計軟件。采用Pearson卡方檢驗進行MRP表達與各項臨床病理資料之間的分析。采用乘積極限法進行單因素生存分析，繪制生存曲線，用對數秩檢驗進行生存曲線比較。采用COX回歸進行多因素生存分析，顯著性檢驗采用Wald檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1直腸癌組織MRP表達狀態 在194例直腸癌術后標本中，表達（-）者40例，表達（+）者68例，表達（++）者50例，表達（+++）者36例，MRP高表達組占44.3%（86/194）。

2.2MRP表達與直腸癌患者臨床病理特征 MRP表達與腫瘤組織分化程度（P=0.029）相關，與患者性別，年齡，腫瘤局部浸潤程度、淋巴結轉移、遠處轉移、病理分期等情況均不存在統計學上的相關性（P＞0.05）。

2.3MRP表達與直腸癌患者預后 108例MRP低表達的患者中有33例在隨訪期內死亡，5年生存率為63.3%，而86例陰性表達的患者只有13例死亡，5年生存率為80.3%，兩者之間差異顯著（χ2=6.309，P=0.012）。Kaplan-Meier單因素生存分析發現：患者的總生存期（OS）在T分期（χ2=9.768，P=0.020）、N分期（χ2=14.129，P=0.001）、M分期（χ2=34.872，P=0.000）、病理分期（χ2=41.325，P=0.000）、MRP表達（χ2=6.046，P=0.014）中差異均有統計學意義，提示病理分期晚、MRP低表達等因素致患者總生存期縮短，而在性別、年齡、腫瘤大小，生長方式、分化程度等因素上無差異。患者總生存期（OS）的Cox多因素回歸分析結果為T分期（P=0.033）、N分期（P=0.018）、M分期（P=0.000）、MRP表達（P=0.023）進入方程，其中MRP表達的相對危險度（relative risk，RR）為0.460（95%CI：0.236～0.899），即MRP高表達組在隨訪期間死亡的風險是低表達組的0.460倍。

3　討論

MRP是一種由1531個氨基酸組成的膜磷蛋白，結構序列分析提示其屬于轉運系統的ABC超家族的成員，自1992年被Cole等［1］在非P-gp介導的MDR小細胞肺癌細胞株上發現報道后，大部分研究都是在其產生腫瘤耐藥的機制方面進行。近年來的臨床研究均認為MRP高表達會降低化療療效［2，3］，但患者的生存是否獲益，則根據腫瘤類型及研究方法的不同，存在意見不一的情況［4，5］。

本資料用免疫組化方法對194例直腸癌術后組織中MRP的表達情況進行檢測，發現直腸癌組織中MRP的高表達率為44.3%（86/194）。將MRP表達與患者臨床資料進行分析，發現與腫瘤組織分化程度相關，該現象在其它腫瘤中亦有類似報道。Koshiyama等［6］在卵巢癌的研究中發現93% 的G1中存在MRP高表達，高于G2/G3的44%（P＜0.05），提示MRP在直腸癌的組織分化過程中發揮一定作用，其表達水平高可使組織分化較好。

在預后方面，患者的OS在MRP低表達組明顯長于高表達組（P=0.014），這提示直腸癌術后患者的預后和MRP表達相關。這與很多研究認為MRP高表達會降低患者生存率的結論相反，從既往已知的機制解釋，MRP主要是通過減少細胞內化療藥物聚集濃度而發生耐藥［7，8］，進而導致存在腫瘤負荷的患者無法獲得有效的化療，腫瘤不能得到有效控制，生存時間也就相應變短。但不同于這些研究，本資料的入選人群均為術后患者，腫瘤負荷已基本消除，不存在原發腫瘤對化療耐藥的情況，而在此種狀態下MRP的高表達能使患者的生存獲益，這提示MRP的作用機制可能存在另外一種未知的途徑，值得進一步研究。

1 Cole SP，Bhardwaj G，Gerlach JH，et al. Overexpression of a transporter gene in a multidrug-resistant human lung cancer cell line. Science， 1992，258：1650～1654.

2 Morrow CS， Peklak-Scott C， Bishwokarma B， et al. Multidrug resistance protein 1 （MRP1， ABCC1） mediates resistance to mitoxantrone via glutathione-dependent drug efflux. Mol Pharmacol， 2006， 69（4）：1499～1505.

3 魏學明，顧國利，任力，等.多藥耐藥基因產物在大腸癌組織中的表達及臨床意義. 世界華人消化雜志，2009，17（24）：463～2468.

4 Xu Y， Wang L， Zheng X， et al. Positive expression of p53， c-erbB2 and MRP proteins is correlated with survival rates of NSCLC patients. Mol Clin Oncol， 2013，1（3）：487-492.

5 Yu Z， Peng S， Hong-Ming P， et al. Expression of multi-drug resistancerelated genes MDR3 and MRP as prognostic factors in clinical liver cancer patients. Hepatogastroenterology， 2012，59（117）：1556～1559.

6 Koshiyama M， Fujii H， Kinezaki M， et al. Immunohistochemical expression of topoisomerase IIalpha （Topo IIalpha） and multidrug resistance-associated protein （MRP）， plus chemosensitivity testing，as chemotherapeutic indices of ovarian and endometrial carcinomas. Anticancer Res， 2001，21：2925～2932.

7 Zaman GJR， Flens MJ， van Leusden MR， et al. The human multidrug resistance-associated protein MRP is a plasma membrane drug-efflux pump. Proc Natl Acad Sci USA 1994， 91（19）： 8822～8826.

8 Breuninger LM， Paul S， Gaughan K， et al. Expression of multidrug resistance-associated protein in NIH/3T3 cells confers multidrug resistance associated with increased drug efflux and altered intracellular drug distribution. Cancer Res. 1995， 55 （11）： 5342～5347.

313100 浙江省長興縣人民醫院外科（吳偉宏 王豐平費勝琪）

310022浙江省腫瘤醫院大腸科（陳貴平）