胃腺癌組織中RhoC、CD105蛋白的表達變化及意義

肖興國

(鄭州大學附屬鄭州中心醫院，鄭州450007)

胃腺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，其發生、發展及確切分子病理機制尚未完全明確。Rho家族屬于小分子G蛋白基因亞家族。文獻表明，Rho家族與腫瘤的發生、發展關系密切。2000年6月～2013年6月，我們觀察了胃腺癌組織中RhoC、CD105蛋白的表達變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院收治的胃腺癌患者108例，男 70例，女38例;年齡 25～78(57.0±11.7)歲。所有患者術前均未接受放化療及免疫治療。其中高、中分化腺癌40例，低分化腺癌68例;TNM分期Ⅰ、Ⅱ期42例，Ⅲ、Ⅳ期66例;有淋巴結轉移者67例，無淋巴結轉移者41例;腫瘤浸潤黏膜及黏膜下層者19例，肌層者42例，漿膜及漿膜外者47例。手術留取胃腺癌組織108例份(胃癌組)、癌旁不典型增生組織40例份(癌旁組)、正常胃黏膜組織30例份(正常組)。

1.2 主要試劑 RhoC蛋白山羊抗多克隆抗體(美國Santa Cruz公司)，即用型SABC試劑盒、DAB顯色試劑盒(武漢博士德公司)，鼠抗人CD105單克隆抗體(北京中杉金橋公司)。

1.3 組織 RhoC、CD105蛋白檢測 所有標本均經40 g/L多聚甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續切片，常規脫蠟，高溫高壓熱抗原修復，嚴格按照免疫組化SABC試劑盒操作步驟進行;DAB顯色，蘇木素復染。以已知RhoC、CD105蛋白陽性胃腺癌組織切片作陽性對照，PBS代替一抗設陰性對照。RhoC染色陽性信號定位于細胞質及細胞核，每例選擇10個不同高倍視野，計算RhoC陽性細胞數占視野中腫瘤細胞總數的百分比，無陽性著色或陽性細胞數＜5%為陰性(－)，陽性細胞數在5% ～50%為陽性(+)，陽性細胞數＞50%為強陽性(++)，陽性與強陽性合計為陽性表達。CD105蛋白標記微血管，計數微血管密度(MVD)，凡呈現棕色單個內皮細胞或內皮細胞簇計為一個血管，但肌層較厚及管腔面積＞8個紅細胞直徑的血管不計數;先在10×10低倍鏡下掃視整張切片，確定微血管最密集的5個視野，然后在高倍鏡(10×40)視野范圍內計數所有染色的微血管，取5個視野計數結果的均數為該切片的微血管數［1］。

1.4 統計學方法 采用SPSS16.0統計軟件。計量資料以±s表示，多組間比較采用方差分析;計數資料比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組RhoC、CD105蛋白表達比較 胃癌組、癌旁組、正常組 RhoC蛋白陽性率分別為86.1%、60.0%、26.7%，胃癌組、癌旁組分別與正常組比較，P 均 ＜0.01;MVD 分別為 32.63 ±3.79、12.03 ±1.32、10.76 ±1.96，胃癌組與癌旁組、正常組比較，P 均 ＜0.01。

2.2 RhoC、CD105蛋白表達與胃腺癌臨床病理參數的關系 結果見表1。由表1可知，RhoC蛋白表達與胃腺癌臨床分期、浸潤程度、淋巴結轉移有關，CD105蛋白與胃腺癌細胞分化程度、臨床分期、浸潤程度、淋巴結轉移有關(P均＜0.05)。

表1 RhoC、CD105蛋白表達與胃腺癌臨床病理參數的關系

2.3 胃腺癌組織中RhoC蛋白與CD105蛋白表達的關系 胃腺癌組織中RhoC蛋白陽性表達組MVD高于 RhoC 蛋白陰性表達組(t=3.584，P ＜0.05)。

3 討論

胃腺癌是臨床上常見的惡性腫瘤，其具有高發病率、高病死率的特點，且腫瘤侵襲轉移嚴重程度直接關系到胃腺癌患者預后質量。目前，臨床上關于胃腺癌發生、發展及浸潤轉移的具體分子機制尚不明確。近年來，關于癌癥組織中RhoC表達及RhoC表達在癌浸潤、淋巴轉移中的作用機制研究較多。何娟等［2］發現，喉癌組織中RhoC表達水平受腫瘤浸潤程度、臨床分期及淋巴結轉移等影響，認為RhoC可能作為喉癌發展進程中的一項重要標志物，在喉癌浸潤、淋巴結轉移中起參與作用;其可能機制為RhoC屬于轉錄調節因子的一種，主要通過對細胞周期依賴性激酶有效調控來改變細胞周期，進而達到調控細胞生長、增殖的目的［3，4］。相關研究［5］表明，RhoC蛋白在眾多組織和細胞中表達。趙志華等［6］發現，食管癌細胞中 RhoC mRNA、蛋白表達高于正常食管黏膜及癌旁組織。本研究亦顯示，胃腺癌組織RhoC陽性率高于癌旁及正常胃黏膜組織。

另外研究發現，RhoC與Rho在調控細胞分裂、生長、增殖等作用機制基本類似，且兩者呈正相關性。為此可以通過Rho研究反映RhoC表達。Rho亞家族蛋白(RhoA、B、C、D、E)屬于 Ras超家族 GTP蛋白酶，Rho蛋白通過其下游靶效應分子，調節細胞骨架的活動，參與調控細胞分裂和增殖。Rho在腫瘤侵襲轉移中起促進作用，其可能機制主要包括:①對磷酸化(與細胞骨架蛋白密切相關)進行調節，以促進肌動蛋白絲、肌球蛋白相互作用，形成收縮性，進而讓腫瘤細胞進一步轉移活動;②該物質能對細胞極性產生破壞，減少細胞的黏附作用，提高細胞運動及重塑(細胞外基質)能力，以促進腫瘤細胞浸潤;③增強癌細胞內血管生成因子水平，新生成腫瘤血管，為腫瘤細胞生長、參與血液循環提供重要途徑，進而促進腫瘤侵襲轉移［7，8］。趙增強等［9］通過對比分析正常胃黏膜組織與胃腺癌組織中RhoC表達，發現正常胃黏膜組織中低表達RhoC，而胃腺癌組織中RhoC陽性表達率高達62.5%，同時通過多因素回歸分析發現RhoC表達與淋巴結轉移、胃腺癌分期有關。這與何娟等［2］報道相似。本研究顯示，RhoC陽性表達與胃腺癌臨床分期、浸潤程度、淋巴結轉移有關。

轉移和浸潤是惡性腫瘤的重要生物學特征，而腫瘤組織中血管生成是腫瘤細胞轉移浸潤的基本前提。CD105作為一種細胞膜糖蛋白，是調節轉化生長因子-β受體復合物的成分之一，其表達與新生血管的內皮細胞密切相關［10，11］。CD105能夠體現內皮細胞的增殖狀態，反映腫瘤新生血管的生長及分布，對于腫瘤的生長、浸潤及轉移有重要意義。文獻［12～15］表明，作為血管標記物，MVD檢測可以作為惡性腫瘤臨床分期、浸潤程度、療效判斷的客觀指標。本文結果顯示，MVD與胃腺癌細胞分化程度、臨床分期、浸潤程度、淋巴結轉移有關。胃腺癌組織中聯合檢測RhoC、CD105蛋白可能有助于提高胃腺癌的陽性檢出率。

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