金銀花腋芽快速繁殖體系探討

任 斌

（湖州中等衛(wèi)生專業(yè)學校，浙江長興 313100）

金銀花腋芽快速繁殖體系探討

任 斌

（湖州中等衛(wèi)生專業(yè)學校，浙江長興 313100）

以金銀花試管苗帶腋芽莖段為外植體，應用L16（45）正交試驗設計，優(yōu)選出金銀花腋芽擴繁的培養(yǎng)基。結果表明，金銀花經(jīng)腋芽擴繁的最佳培養(yǎng)基是B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋BA 2.0 mg·L－1＋GA31.0 mg· L－1，繁殖系數(shù)達4.1。

金銀花；腋芽；快速繁殖

文獻著錄格式：任斌.金銀花腋芽快速繁殖體系探討［J］.浙江農業(yè)科學，2015，56（1）：56－57.

DOI 10.16178／j.issn.0528?9017.20150117

金銀花（Lonicera japonica）為我國傳統(tǒng)中藥材，具有清熱解毒、涼散風熱之功效，被譽為中藥中的青霉素，近年來由于我國先后經(jīng)歷了非典型肺炎、禽流感等疫情，防疫形勢嚴峻，金銀花市場需求量越來越大，而傳統(tǒng)的無性繁殖方式已經(jīng)無法滿足金銀花需求量的快速增長。對于金銀花快繁體系的研究，國內外已有一些報道。Suk等［1］以金銀花的合子胚為外植體，利用合子胚衍生的胚性細胞建立了細胞懸浮培養(yǎng)體系，再經(jīng)體細胞發(fā)生途徑再生為植株；宋振巧等［2］對中花1號金銀花進行組培研究，經(jīng)愈傷組織和叢生芽誘導，建立快繁體系；李景剛等［3］以金銀花的嫩枝梢為外植體，經(jīng)愈傷組織和叢生芽誘導建立快速繁殖體系；李軍等［4］以在平邑縣發(fā)現(xiàn)的金銀花自然變異優(yōu)良品種紅河金銀花為材料，建立了腋芽快繁體系。經(jīng)愈傷組織誘導途徑而再生的植株，由于細胞變異等原因，會產生變異植株，在遺傳穩(wěn)定性上不如經(jīng)腋芽再生的植株。已報道的金銀花快繁體系的繁殖系數(shù)也不是很高［5－6］。

正交設計與數(shù)據(jù)分析方法作為選擇最佳試驗方案的有效工具，能同時考察多因素對試驗的影響，常用于植物快繁體系的研究［7－8］，但在金銀花的快速繁殖研究中鮮見報道。本研究旨在建立一個更穩(wěn)定、高效的金銀花快速繁殖體系，應用L16（45）正交試驗，進行金銀花腋芽快速繁殖體系的研究，為金銀花的快速繁育提供參考。現(xiàn)將有關金銀花快速繁育的試驗結果總結和報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

以金銀花為外植體，在B5空白培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d，以所得試管苗作為試驗材料。

1.2 處理設計

通過L16（45）正交試驗設計，研究6?BA，NAA，IAA，GA3不同外源激素對金銀花腋芽擴繁的影響。1－4水平BA因素分別為0.50，1.00，2.00和4.00 mg·L－1；NAA因素分別為0.00，0.05，0.10和0.50 mg·L－1；IAA因素分別為0.00，0.50，1.00和2.00 mg·L－1；GA3因素分別為0.00，0.20，0.50和1.00 mg·L－1。

以金銀花帶腋芽莖段為外植體（去除葉片），每瓶接種5個，每處理接種5瓶。25℃下全光照培養(yǎng)40 d后，測定每瓶的腋芽數(shù)目，求平均值。

2 結果與分析

2.1 腋芽數(shù)

各處理組的每瓶平均腋芽數(shù)統(tǒng)計結果如表1所示。

根據(jù)直觀分析表明，腋芽增殖效果最好的是處理10，達20.6個，即培養(yǎng)40 d后，繁殖系數(shù)達4.1。極差分析表明，4個因素對腋芽擴繁的影響大小依次為NAA＞BA＞GA3＞IAA，其中NAA對繁殖系數(shù)影響最大。

為了更好地反映各處理因子對腋芽繁殖的影響，以便尋求腋芽擴繁的最佳培養(yǎng)基組，對表1試驗結果作進一步方差分析。結果表明，4個因素對腋芽擴繁的影響大小依次為NAA（F＝7.185?）＞BA（F＝5.344）＞GA3（F＝0.898）＞IAA（F＝0.698），其中NAA對腋芽擴繁有顯著影響。腋芽擴繁的最佳培養(yǎng)基為B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋BA 2.0 mg·L－1＋GA31.0 mg·L－1，繁殖系數(shù)達4.1。

2.2 試管苗

獲得的叢生腋芽再在生根培養(yǎng)基B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋IBA 0.4 mg·L－1＋MET 0.5 mg· L－1培養(yǎng)30 d后，即可獲得形態(tài)正常的試管苗。

圖1中a是金銀花單個腋芽在擴繁培養(yǎng)基培養(yǎng)40 d后的生長情況；b是擴繁苗在生根培養(yǎng)基培養(yǎng)40 d后生長情況。由圖可知，試管苗形態(tài)正常，生長旺盛，根系發(fā)達，有利于后期的移栽成活。

3 小結與討論

試驗應用L16（45）正交試驗建立金銀花快繁體系，結果表明，腋芽擴繁的最佳培養(yǎng)基為B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋BA 2.0 mg·L－1＋GA31.0 mg· L－1，繁殖系數(shù)達4.1，獲得叢生腋芽在先前研究建立的生根培養(yǎng)基B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋IBA 0.4 mg·L－1＋MET 0.5 mg·L－1培養(yǎng)30 d后，即可獲得形態(tài)正常的試管苗。以上研究為下一步金銀花多倍體育種和優(yōu)良品種的工廠化育苗打下了基礎。

［1］ Kim S W，Oh S C，In D S，et al.High frequency somatic embryogenesis and plant regeneration in zygotic embryo cultures of Japanese honeysuckle［J］.Plant Cell，Tissue and Organ Culture，2003，72：277－280.

［2］ 宋振巧，陳為序，王建華.金銀花開花與繁育特性研究［J］.山東農業(yè)科學，2012，44（1）：32－34，38.

［3］ 李景剛，孫滿芝.良種金銀花的組培快繁技術研究［J］.山東林業(yè)科技，2004（6）：36－37.

［4］ 李軍，喬元偉.紅河金銀花的組培快繁技術［J］.山東林業(yè)科技，2000（3）：41－42.

［5］ 劉偉，和兆榮，周厚高.金銀花組織培養(yǎng)初報［J］.中國農學通報，2006，22（8）：99－101.

［6］ 王文靜，王鵬，李偉強.紅金銀花組培快繁技術研究［J］.北方園藝，2013（18）：100－102.

［7］ 魏翠華，秦建彬，謝宇，等.應用正交設計法優(yōu)選臺灣金線蓮快繁培養(yǎng)基［J］.中國農學通報，2013，29（4）：114－117.

［8］ 孫周平，褚麗敏，洪仁偉.正交設計在刺五加組織培養(yǎng)中的應用［J］.中國農學通報，2010，26（4）：85－88.

（責任編輯：張瑞麟）

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0528?9017（2015）01?0056?02

2014?10?24

湖州市科技局項目（2013GY31）

任 斌（1981－），男，講師，碩士，從事中藥組織培養(yǎng)及優(yōu)良品種培育研究工作。E?mail：hzwxrb＠126.com。