中國大鯢主要傳染病病原研究進展

樊汶樵，孫志芳，楊 帆，姜玉松，李曉英，孫翰昌，徐敬明

（重慶文理學院林學與生命科學學院 重慶珍稀瀕危水產資源保護與開發研究中心，重慶 永川402168）

中國大鯢（Andrias davidianus），俗名“娃娃 魚”，屬國家二級保護動物，是個體最大的兩棲動物，也是我國珍稀名貴特產，已被列入CITES 公約附錄I 中[1]。自20 世紀80 年代后，由于環境人為破壞、過度捕撈等原因，大鯢棲息地范圍嚴重縮小，自然資源數量急劇減少[2]。隨著中國大鯢人工繁育技術的發展，其養殖規模逐漸擴大，2006年中國大鯢的繁殖數量超過20 萬尾，專業養殖中國大鯢的單位已超過500 家。由于養殖密度的不斷增加和生活環境的人為改變，大鯢的病害日益增多；感染中國大鯢的傳染性疾病主要包括了細菌病、病毒病、寄生蟲病以及其他一些疾病，給生產上造成巨大的經濟損失，嚴重制約了大鯢人工養殖業的發展。本文旨在介紹中國大鯢常見傳染病病原的研究現狀，對進一步的預防與控制相關疾病提供參考。

1 病毒性病原

目前報道的感染中國大鯢的病毒只有一種；盡管命名上尚未統一，有中國大鯢病毒（Chinese giant salamander virus，CGSV），大鯢虹彩病毒（Andrias davidianus iridovirus，ADIV），中國大鯢虹彩病毒（Chinese giant salamander iridovirus，GSIV）和大鯢蛙病毒（Andrias davidianus ranavirus，ADRV）等提法，所指的都是蛙病毒科的虹彩病毒。

1.1 流行特征 從2009 年起，陸續出現了病毒性疾病暴發的報道。Geng 等[3]在甘肅與陜西、Dong等[4]在陜西、四川和河南，江育林等[5]在陜西，Meng等[6]在湖北、湖南、四川、陜西和浙江等地均分離到了感染中國大鯢的病毒。感染該病毒后以皮膚出現白點、出血斑、潰瘍, 四肢腫脹, 潰爛和頭部腫脹為主要癥狀，死亡率極高。該病毒主要在肝、脾和腎中繁殖，在部分傳代細胞系上也能很好的復制。針對蛙病毒主要衣殼蛋白（MCP）基因設計引物測序后，發現該病毒MCP 基因與其他幾種蛙病毒屬成員的相似性至少在96%以上。

1.2 分子生物學特性 Wang 等[7]率先對感染中國大鯢的虹彩病毒進行了全基因序列的測定，發現該病毒全長為106 719個bp，G-C含量為55.04%，有101個ORF（開放閱讀框）。從進化關系上來看，感染中國大鯢的虹彩病毒與蛙病毒屬的蛙病毒3（FV3）相似性最高。Chen 等[8]發現了幾個涉及病毒毒力及宿主感染性的關鍵基因發生了顯著變化；這些有明顯變化的基因可能在削弱或改變宿主抗病力、增強病毒致病性以及跨種間傳播中起關鍵作用。

1.3 生物學特性 Ma 等[9]探討了中國大鯢虹彩病毒在鯉魚上皮瘤細胞（EPC）上的超微結構變化。高正勇等[10]發現該病毒對熱處理敏感，經酸、堿、氯仿、乙醚以及胰蛋白酶處理，病毒滴度（TCID）下降極大；凍融次數對病毒滴度的影響不顯著。該病毒可在鯉魚上皮瘤細胞系（Epithelioma papilloma eyprini，EPC）、斑點叉尾鮰腎臟細胞系（Channel catfish kidney，CCK）、虹鱒魚性腺細胞系（Rainbow trout gonadal，RTG-2）等 細 胞 中 增殖。孫建濱等[11]證實了該病毒經終濃度為0.1%的β-丙內酯（BPL）40 ℃滅活處理72 h 后可達到完全滅活的效果。

1.4 診斷方法 周勇等[12]針對中國大鯢病毒MCP基因率先建立了TaqMan 實時熒光定量PCR 方法。隨著環介導等溫擴增（LAMP）技術的發展，Zhang 等[13]和Meng 等[14]都建立了基于LAMP 技術的中國大鯢虹彩病毒檢測方法，該方法在提取病毒核酸后僅需在63 ℃下作用60 min 即可觀察結果，利用該方法可以檢測100 個拷貝的DNA 樣品，肉眼即可判定結果。

由上述研究可知，目前報道的感染中國大鯢的病毒僅有虹彩病毒一種，針對該病毒的基本特性方面的研究已經逐漸鋪開。但是，預防和控制該病的研究鮮有報道；作為預防病毒性疾病的關鍵，特異性疫苗的研制和應用尚需很長的時間去完成；對患病中國大鯢的治療也應該成為下一步研究的重點。

2 細菌性病原

中國大鯢的細菌性疾病鮮見國外報道，但是國內學者一直在廣泛研究。從目前情況來看，感染中國大鯢的細菌大多來自氣單胞菌屬，以嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）為甚。

2.1 嗜水氣單胞菌 孟彥等[15]最早從浙江某養殖場患“腹水病”的中國大鯢腹水和腸道分離并鑒定了嗜水氣單胞菌。鐘蕾等[16]在湖南患病中國大鯢的體表病灶和體內器官中分離到細菌，通過人工感染、細菌形態觀察和生理生化試驗，確定了引起大鯢發病的病原為嗜水氣單胞菌。徐景峨等從皮膚潰爛、口腔黏膜彌漫性出血以及肝臟腫大為臨床病理特征的貴州某養殖場分離鑒定了一株致病力極強的嗜水氣單胞菌；針對該菌的滅活乳化疫苗免疫保護試驗表明，免疫后的平均保護率達83.33%[17]。

2.2 其他單胞菌 王旭等[18]在患“腐皮病”的中國大鯢上分離到一株維氏氣單胞菌（Aeromonas veronii），該菌對供試大鯢、斑點叉尾鮰和小鼠均有較強的致病作用。隨后對該菌自然感染中國大鯢的肌肉、肝、腎、肺、腸道等器官的組織病理學變化進行了觀察，發現該菌能使中國大鯢的組織器官出現嚴重的病理變化而導致死亡[19]。王玉等和楊星等分別分離鑒定了致病的溫和氣單胞菌（Aeromonas sobria）和類志賀鄰單胞菌（plesiomonas-shigelloides）。杜宗君等還曾在四川患病中國大鯢肝、腎中分離到一株熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）。

2.3 其他致病菌 吳中明等分離鑒定了一株引起中國大鯢足部潰爛的遲鈍愛德華菌（Edwardsiella tarda）；該菌對中國大鯢可能是一種機會致病菌，病菌感染大鯢需要合適的入侵途徑和數量，感染后細菌分布于皮下、血液、肝、脾、胃等器官。高正勇等[20]分離到一株導致中國大鯢死亡的弗氏檸檬酸桿菌（Citrobacter freundii），該致病菌對健康鯽魚也有致病性，表明感染中國大鯢的致病菌往往能夠垮種間傳播。

根據前期關于中國大鯢細菌性疾病的研究，可以發現細菌性疾病在養殖中國大鯢的各個省份都有不同程度的發生，發病大多伴隨體表潰爛和部分內臟器官出血、壞死。氣單胞菌科的細菌是感染中國大鯢并導致發病的最重要原因，該類細菌的致病性主要是由于氣胞溶素所致，感染后容易導致體表潰爛、內臟器官特別是消化器官出血、壞死。在細菌性疾病分離鑒定的相關報道中大多進行了藥物敏感試驗以便于臨床治療藥物的篩選，對于該類疾病的控制有一定作用；特異性疫苗的研制仍是防控細菌性疾病的重點。

3 寄生蟲病原

近年來關于感染中國大鯢的寄生蟲疾病報道相對較少。陳云祥和蒲德成等分別報道了毛細線蟲感染中國大鯢的病例；Li 等[21]則從湖北野生中國大鯢上分離到2 種纖毛原蟲。

4 傳染性病原的混合感染

由于中國大鯢生活的環境復雜，養殖條件參差不齊，感染中國大鯢的病原往往不止一種。于喆等[22]對貴州發生“細菌性感染綜合征”病鯢的組織器官進行細菌的形態結構、生理生化特性鑒定和人工感染試驗，證實嗜水氣單胞菌、布拉克枸櫞酸桿菌（Citrobacter braakii）和洛菲不動桿菌（Acinetobacter lwoffi）等3 種細菌是主要致病菌。余波等[23]在患“細菌性敗血癥”的中國大鯢體內分離到了致病的嗜水氣單胞菌、弗式檸檬酸桿菌和柱狀黃桿菌（Flavobacterium cloumnare）；還在貴州省診斷出了一例虹彩病毒和嗜水氣單胞菌的混合感染，該病例以大鯢體表和四肢多處潰爛、內臟器官出現充血、出血為特征[25]。謝輝等[24]對感染中國大鯢的“水霉病”進行研究，發現該病大多為車輪蟲病繼發感染水霉菌所致。

5 結語與展望

中國大鯢是由水生脊椎動物向陸生脊椎動物過渡的類群；感染中國大鯢的病原往往會在其他物種中進行傳播[20]。所以，這類病原的感染進程、與機體的相互作用機制具有極大的研究意義。目前已有不少關于中國大鯢傳染性疾病的報道，但是與其他動物相比，針對其病原體的研究仍然存在很大不足；傳染性病原的生物學特性研究還比較粗淺，而如何利用特異性疫苗遏制傳染性疾病的流行，快速準確的診斷，發病后的對癥治療還需要繼續探索。

目前已有的報道中，中國大鯢傳染性疾病的混合感染既有不同致病細菌的參與，也有細菌與寄生蟲、真菌、病毒的共同作用；我們在臨床診斷中一定要注意對癥狀的觀察，實驗室分離病原的時候要針對不同病原進行測試，以期更加準確的確定病原，減少誤診對中國大鯢養殖帶來的危害。

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