罌粟殼成分快速檢測方法在食品監(jiān)督中的應(yīng)用

朱振華，朱士新，陳 璐，朱佳嫻

(昆山市衛(wèi)生監(jiān)督所，江蘇昆山 215300)

近年來，不法商販為招攬生意，在鹵制品、火鍋底料、燒烤調(diào)味料等中摻用罌粟果殼，使人吃幾次后上癮，極大地危害人民群身體健康［1］。罌粟殼為罌粟科植物罌粟的干燥成熟果殼，具有斂肺、澀腸、止痛等功效［2］。同時它也是一種毒品，其果實中含嗎啡(Morphine，5.6%～83%)、可待因(Codeine，0.63%～2.13%)、罌粟堿(Paefine)等20 多種生物堿。國家衛(wèi)生部、工商總局早在2005年就發(fā)布了《關(guān)于加強(qiáng)罌粟籽食品監(jiān)督管理工作的通知》，規(guī)定罌粟籽僅允許用于榨取食用油脂，不得在市場上銷售或用于加工其它調(diào)味品。

目前檢測罌粟堿的方法［3］主要有薄層層析法［4-6］、高效液相色譜法 (HPLC)［7-10］、比色法［11，12］、極譜法［13，14］、氣相色譜法［15］等，但這些方法存在操作繁瑣、干擾因素多、靈敏度低、儀器昂貴、不易推廣等不足。衛(wèi)生部曾于1991年推薦使用薄層層析法和高效液相色譜法，但是，前者操作繁瑣、費時、干擾嚴(yán)重，后者因儀器昂貴，不易推廣［16］。本試驗旨在通過液相色譜—質(zhì)譜法和競爭抑制免疫層析法對樣品進(jìn)行比對檢驗，驗證競爭抑制免疫層析法在食品中罌粟殼的快速檢測方法的可靠性，為其在食品監(jiān)督執(zhí)法中應(yīng)用推廣提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料來源

樣品來源于餐飲食品安全監(jiān)督和食品刑事案件偵辦過程的抽檢樣品，抽檢品種包括:鹵湯、火鍋底料、調(diào)料湯等共20 份。

1.2 儀器與試劑

高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測、罌粟殼快速檢測卡，無錫中德伯爾生物技術(shù)有限公司。

1.3 檢測原理

高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測:樣品用水或鹽酸溶液分散均勻、乙腈提取后，經(jīng)鹽析分層，乙腈提取液用鍵合硅固相萃取吸附凈化，離心，液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，罌粟堿、那可丁和蒂巴因采用外標(biāo)法定量，嗎啡和可待因采用內(nèi)標(biāo)法定量。

罌粟殼快速檢測卡:應(yīng)用競爭抑制免疫層析的原理，樣品中的罌粟殼成分在流動的過程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合，抑制了抗體和NC 膜檢測線上抗原偶聯(lián)物的結(jié)合，如果加入樣本后檢測線不顯色，結(jié)果為陽性，反之，檢測線顯紅色，結(jié)果為陰性。

1.4 檢測項目

對罌粟堿、那可丁、蒂巴因、嗎啡和可待因等5 種罌粟殼主要成分進(jìn)行檢測。

1.5 統(tǒng)計方法

采用Epi Data 3.1 軟件建立數(shù)據(jù)庫，數(shù)據(jù)實行雙錄入;利用SPSS16.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，使用卡方檢驗進(jìn)行比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 競爭抑制免疫層析法檢測結(jié)果

對監(jiān)督抽檢的20 份樣品應(yīng)用競爭抑制免疫層析法進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示18 份陰性、2 份陽性，陽性檢出率為10%，合格率為90%。

2.2 高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法檢測結(jié)果

對應(yīng)用競爭抑制免疫層析法進(jìn)行檢測的2 份陽性樣品再應(yīng)用高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行驗證檢測，樣品1 檢測結(jié)果呈陽性，嗎啡檢測值為292μg/kg、可待因檢測值為54μg/kg、那可丁檢測值為13μg/kg、罌粟堿檢測值為17μg/kg、蒂巴因未檢出;樣品2 檢測結(jié)果也呈陽性，嗎啡檢測值為242μg/kg、可待因檢測值為57μg/kg、那可丁檢測值為16μg/kg、罌粟堿檢測值為19μg/kg、蒂巴因未檢出。

2.3 競爭抑制免疫層析法與高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法符合率

對監(jiān)督抽檢的20 份樣品應(yīng)用競爭抑制免疫層析法進(jìn)行檢測的2 份陽性樣品進(jìn)行驗證檢測，結(jié)果高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法檢測結(jié)果與競爭抑制免疫層析法一致，確認(rèn)2 份陽性樣品的陽性。兩種檢測方法的符合率為100.0%。

3 討論

因受限于每種方法各有缺點，目前食品中罌粟殼的檢測方法尚無國家標(biāo)準(zhǔn)。分光光度法(UV-Vis)簡單快速，但因嗎啡含量受多因素影響，只能定性和半定量測定;薄層色譜法(LC)靈敏準(zhǔn)確，不需特殊設(shè)備，操作簡單，是目前研究最多，最普遍采用的方法;示波極譜法(oscillopolarography)因必須進(jìn)行樣品處理，目前該法只限于嗎啡定量測定;氣相色譜法(GC)可同時定量測定罌粟殼中可待因、嗎啡、蒂巴因、罌粟堿和那可因的含量，但干擾物質(zhì)較多;高效液相色譜法(HPLC)可以同時檢出罌粟堿、嗎啡、可待因、那可因和蒂巴因等5 種組分;液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)通過液相色譜與質(zhì)譜法聯(lián)用，優(yōu)化了罌粟殼的檢測，使嗎啡、可待因、罌粟堿、那可因獲得較高的檢測靈敏度，檢出定量限 (LOQ)分別是0.24、0.08、0.01、0.003μg/L，該方法不僅可以對罌粟殼食物中生物堿的殘留進(jìn)行準(zhǔn)確定性，而且檢出限低，適用范圍廣，隨著研究的深入和儀器的普及，可望成為檢測食品中罌粟殼殘留的重要方法。

本試驗將目前應(yīng)用效果較好的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法作為罌粟殼競爭抑制免疫層析法的對照方法，該方法目前是上海市食品安全地方標(biāo)準(zhǔn)，有較好的檢測可靠性。試驗中共檢測20 份樣品，競爭抑制免疫層析法檢測2份陽性樣品，再次通過高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行驗證，結(jié)果仍呈陽性，說明競爭抑制免疫層析法雖然只是半定量的檢測方法，但是因為其檢測方法簡便、檢測限低、經(jīng)濟(jì)有效等優(yōu)點，同時，該方法屬于特異性反應(yīng)，不易受其它成分干擾，含有醬油、香料、蛋白質(zhì)成分的液體可直接測定，適合在日常的食品安全現(xiàn)場監(jiān)督中應(yīng)用，為食品的日常監(jiān)管提供技術(shù)支持，在現(xiàn)場及實驗室對摻入食品中罌粟殼進(jìn)行快速初篩定性具有重大意義。

［1］張靖.食品中罌粟堿、嗎啡、可待因含量的液相色譜檢測法研究［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2007，1(6):72-73.

［2］國家藥典委員會編.中國藥典2010 (一部)［M］.北京:北京工業(yè)出版社，2010:347.

［3］陸茂林，趙春城，等.罌粟堿測定方法研究進(jìn)展［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2002，4:504-505.

［4］衛(wèi)生部.食品中阿片生物堿成分測定方法 (暫行)，1992.

［5］中華人民共和國藥典(一部)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1900:330-331.

［6］姜典鎮(zhèn).薄層色譜法測定食品中阿片生物堿［J］.河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，1997，8(3):149-151.

［7］董南，等.高教液相色普法檢測食品中多種香料共存時的罌粟殼［J］.色譜，2000，18(6):378-381.

［8］Landis W，et al.High-performance liquid chromatographic separation of alkaloids from Papaver somniferum on a Zorbax NH2 analytical column ［J］.Journal of Chromatography A，1982，253:120.

［9］Ayyangar NR，et al.Simultaneous separation of the principal alkaloids in gum opium by isocratic，reversed-phase high-performance liquid chromatography ［J］.Journal of Chromatography A，1986，366:435.

［10］Ayyangar NR，et al.Separation of eight alkaloids and meconic acid and quantitation of five principal alkaloids in gum opium by gradient reversed-phase high-performanceliquid chromatography ［J］.Journal of Chromatography A，1988，436:455.

［11］涂志強(qiáng).罌粟殼中生物堿類化合物的含量測定［J］.中成藥，1998，20(3):42-43.

［12］吳功柱.敏感膜電極檢測火鍋湯中罌粟殼方法研究［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，1999，9(4):245-247.

［13］余兆樓.毛細(xì)管電泳分離檢測常見的鴉片毒品［J］.分析化學(xué)，1996，24(4):444-446.

［14］季申，等.GC 法測定中藥罄粟殼中嗎啡、可待因和罌粟堿的含量［J］.中草藥，1998，29(8):535-528.

［15］李永芳.氣相色譜法測定食品中罌粟殼殘留的研究與應(yīng)用［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2002，10(1):38-40.

［16］崔裕敏，楚建華.湯料中罌粟殼測定方法的探討［J］.職業(yè)與健康，2002，1(18):46-47.