真菌性角膜潰瘍的臨床實驗診斷

王著玲455000河南安陽市眼科醫院

真菌性角膜潰瘍的臨床實驗診斷

王著玲
455000河南安陽市眼科醫院

目的：提高臨床上對于真菌性角膜潰瘍的認識，做好鑒別診斷。方法：進行角膜刮片做10％KOH濕片直接鏡檢，再做沙氏瓊脂平板培養后，根據菌落的生長特點，培養后濕片鏡檢，“回形針”法小培養特征，藥敏紙片瓊脂擴散法結果及抑菌環大小等進行分析。結果：鐮刀菌最多46％，曲霉菌22％，青霉菌13％，鏈互隔菌10％，還有不常見的頭孢子菌、無孢菌，不同菌種其藥敏試驗結果不相同。結論：真菌性角膜潰瘍的早期確診、正確用藥對治療至關重要。

真菌性角膜潰瘍；濕片鏡檢；藥敏試驗

真菌性角膜潰瘍是一種由致病真菌引起的致盲率極高的感染性角膜病變。近幾年發病率逐漸增加，有的國家，真菌性角膜潰瘍占感染性角膜病的近50％[1]。到目前還沒有一種廣譜抗真菌藥物能有效治療所有真菌性角膜病變，有效的治療依賴于真菌菌種的準確鑒別[2-3]。對60例真菌性角膜潰瘍患者進行實驗室檢查，現報告如下。

資料與方法

2012年10月-2014年10月收治真菌性角膜潰瘍患者60例（60眼），均經10％ KOH濕片直接鏡檢及培養后確診，其中男45例，女15例，年齡18～65歲。其中植物性外傷46例，沙石異物及化學燒傷6例，佩戴隱形眼鏡2例，無明確原因及外傷史6例，41例患者均有使用抗生素及激素等的病史。對所有患者進行角膜刮片做10％KOH濕片直接鏡檢，再用角膜潰瘍刮取物行沙氏瓊脂平板28℃培養2～7d后有明顯的菌落，顯微鏡下濕片鏡檢確認真菌菌絲及孢子，根據菌落的生長特點，培養后濕片鏡檢，“回形針”法小培養特征，藥敏紙片瓊脂擴散法結果及抑菌環大小等進行分析。

結果

60例真菌性角膜潰瘍的患者中鐮刀菌28例（46％），曲霉菌13例（22％），青霉菌8例（13％），鏈互隔菌6例（10％），還有不常見的頭孢子菌、無孢菌等，濕片直接鏡檢均找到菌絲。鐮刀菌生長迅速，初呈白色絲狀，菌落呈放射狀生長，逐漸長滿整個平板呈棉絮狀，因菌株不同，背面可呈現黃色、玫瑰紅色或紫色，濕片鏡檢可見到大量鐮刀狀多分隔的大分生孢子。藥敏試驗：對那他霉素、龍膽紫、制霉菌素敏感，對二性霉素、碘伏、新潔爾滅中度敏感，對磺胺、氟康唑、酮康唑、三唑粉、達克寧、克霉唑耐藥。曲霉菌生長快，初呈白色絲狀，2d后于蓬松的菌落表面漸呈黑色（黑曲霉）或黃色（黃曲霉）細小顆粒狀，鏡檢實為菊花狀分生孢子頭，平板背面常不著色。濕片直接鏡檢可見有隔菌絲和珠狀孢子，曲霉菌特有的菊花狀分生孢子頭常清晰可見。藥敏試驗：黑曲霉對那他霉素、酮康唑、龍膽紫、三唑粉、制霉菌素敏感、兩性霉素、新潔爾滅敏感，對磺胺、氟康唑、碘伏、達克寧耐藥，黃曲霉對酮康唑、龍膽紫、那他霉素、三唑粉、制霉菌素、達克寧敏感，對氟康唑、克霉唑、碘伏、新潔爾滅、二性霉素耐藥。青霉菌生長迅速，初呈白色絲狀，約2d后菌落表面漸成青綠色、藍綠色或葡萄酒色、鐵銹色粉末狀，平板背面常呈黃色或與正面相同的顏色。濕片鏡檢可見有隔菌絲及大量散落的珠狀孢子和青霉菌特有的掃帚狀、樹枝狀、畫筆狀結構。藥敏試驗：對酮康唑、那他霉素、龍膽紫、二性霉素、制霉菌素、三唑粉敏感，對磺胺、氟康唑、克霉唑、碘伏、新潔爾滅、達克寧耐藥。鏈互隔菌生長很快，初呈淡黃色，然后轉變為黃褐色，菌落表面呈光滑、平整的絨狀，邊緣不整齊，背面常呈現正面顏色，培養后期常呈現棕黑色地毯狀菌落，作濕片鏡檢可見到磚墻形大分生孢子及孢子間連接。藥敏試驗：對制霉菌素、二性霉素、龍膽紫敏感，對酮康唑、三唑粉、氟康唑、達克寧中度敏感，對碘伏耐藥。頭孢子菌生長快，菌落表面常呈現煙灰色或灰褐色絨毛狀，邊緣不整齊，背面常呈現正面顏色，濕片鏡檢可見有隔菌絲和較大卵圓形雞蛋樣分生孢子。藥敏試驗：對龍膽紫、酮康唑、那他霉素、制霉菌素、達克寧、三唑粉、新潔爾滅敏感，對氟康唑、二性霉素、碘伏耐藥。無孢菌生長很快，白色氣生菌絲呈棉花樣或絨毛樣生長，常在3～5d后充滿整個平板空間，作濕片鏡檢可見有隔菌絲交織在一起，無孢子、菌絲中間常呈現許多圓形膨大。對二性霉素敏感，對氟康唑、酮康唑、三唑粉耐藥。

討論

我國是一個農業大國，農業人口占較大比例，植物性外傷較多見，真菌性角膜潰瘍患者逐年增多，已成為導致角膜盲的常見原因[4]。相對于細菌感染的病例，真菌感染更難治療，由于臨床表現較復雜，起病及病程較緩慢，早期刺激癥狀較輕，未能引起重視，容易引起前房積膿、角膜穿孔、眼內炎等，一般抗菌藥物治療無效時才用抗真菌藥物，給臨床治療帶來很大困難，給患者造成身體和心理上的極大痛苦。因此，真菌感染需要盡早診斷治療，臨床資料顯示若抗真菌治療較晚，致病菌擴散范圍較大，深度較廣，潰瘍灶不斷擴大時，真菌生長繁殖速度很快，藥物治療效果不明顯，而且即使較大的潰瘍灶得到了抑制，患者的視力也不一定能提高。目前，真菌性角膜潰瘍的藥物治療不令人滿意，不同的真菌菌屬，其形態結構、生長繁殖、變異及抵抗力、致病及在組織內生長浸潤方式，對抗真菌藥物的敏感性等均有所不同。臨床上我們常常收到很多在私人診所治療無效的角膜潰瘍患者，由于未能及時確診而使用了大量抗生素甚至合并激素治療造成病情進一步加重，最后被迫進行角膜移植甚至摘除眼球，給患者的身心和經濟都帶來沉重負擔。因此，盡早鑒定真菌的菌屬對臨床的治療和用藥具有重要的指導意義，應該引起臨床醫生的重視。

[1]SahaS,BanerjeeD,KhetanA,etal.EpidemiologicalprofileoffungalKeratitisinurban populationofWestBengal,India.OmanJ Ophthalmol,2009,（2）：114-118.

[2]FerrerC,AlioJl.Evaluationofmoleculardiagnosisinfungalkeratitis.Tenyearsofexperience.JOphthalmicInfammInfect,2011,（1）：15-22.

[3]張進,韓敏杰,駱駿.真菌性角膜炎的實驗室診斷[J].長江大學學報（自然科學版）醫學卷,2010,7（1）：270-273.

[4]羅知衛,李建南,李曦.真菌性角膜炎流行病學分析[J].世界中西醫結合雜志,2010,（5）：778-779.

Clinicallaboratorydiagnosisoffungalcornealulcer

WangZhuling
OphthalmologicHospitalofAnyangCity,HenanProvince455000

Objective：Toimprovetheclinicalunderstandingoffungalcornealulcer,doagoodjobindifferentialdiagnosis.Methods：Do10％KOHwetfilmdirectmicroscopicexaminationwithcornealscrapings,andthendotheSabouraudagarplate culture,wetsheetmicroscopyafterincubationaccordingtothegrowthcharacteristicsofthecolonies,“Paperclip”methodof smallculturecharacteristics,theresultsofsusceptibilitydiskdiffusionmethodandbacteriostaticringsizewereanalyzed.Results：Fusariumoccupies46％ofthetotal,22％Aspergillus,Penicillium13％,alternariafunguschain10％,therewereuncommon bacteriagenussuchascephalosporium,non-sporulatingmycelia,thedrugsensitivetestresultofdifferentstrainsarenotthesame.Conclusion：Earlydiagnosisoffungalcornealulcerandpropermedicationareessentialforthetreatment.

Fungalcornealulcer；Wetsheetmicroscopy；Drugsensitivitytest

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.13.71