熒光光度法在臨床檢驗中的應用

王宇 靳偉東 劉天堯 蘭凱

熒光光度法在臨床檢驗中的應用

王宇 靳偉東 劉天堯 蘭凱

目的探究熒光光度法在臨床檢驗中的應用價值。方法以鋱離子—沙星類藥物作為熒光探針，分析熒光光度法在血清中膽汁酸檢測中的應用情況。結果金屬離子等共存物質在與人體內濃度相近時，膽汁酸與鋱—環丙沙星體系的相互作用并不明顯，采用熒光探針方法測定膽汁酸，可用于測定血清中膽汁酸含量。結論以鋱離子—沙星類藥物作為熒光探針測量血清中膽汁酸具有可行性。

臨床檢驗；熒光光度法；熒光探針

臨床檢驗是臨床醫學的重要組成部分，也是臨床生物化學的重要研究領域，隨著現代醫學的快速發展以及衛生保健水平的提高，對臨床檢驗提出了更高的要求，目前臨床檢驗常用的方法包括色譜分析法、光度分析法等，其中光度分析法具有準確度高、分析速度快、選擇性好等諸多優點，在臨床應用較為廣泛，尤其是熒光光度法，靈敏度較高，現已成為各種制劑中藥物分析的常用方法，如抗生素、抗瘧藥、止痛藥、麻醉藥等，其在臨床檢驗中發揮著越來越重要的作用[1]。本研究以鋱離子—沙星類藥物作為熒光探針，分析熒光光度法在膽汁酸測定中的應用情況，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 實驗資料

所用儀器包括F380型熒光分光光度計（由天津港東科技發展股份有限公司生產）和SevenExcellence酸度計（由梅特勒—托利多國際股份有效公司生產），試劑有膽酸儲備液、諾氟沙星儲備液、環丙沙星儲備液、Tb3+儲備液等，儲備液和工作液均置于生化培養箱內保存，控制溫度為0～4℃。

1.2 實驗方法

將諾氟沙星儲備液和Tb3+儲備液依次置于比色管中，蒸餾水稀釋定容，測定熒光光譜及強度，實驗條件為：NF=1.1×10-6mol/L，Tb3+=7.5×10-5mol/L，pH=9.0，BA=1.0×10-6mol/L，明確酸度、鋱離子、反應時間、加入順序、共存物質對熒光強度的影響，對實驗條件進行優化，線性范圍為5.0×10-7～2.0×10-6mol/L，熒光強度與BA濃度成正比，確立BA測定方法，以血清膽汁酸測定肝功能具有可行性。將環丙沙星儲備液和Tb3+儲備液依次置于比色管中，蒸餾水稀釋定容，振蕩后靜止10 min，測定熒光光譜及強度，實驗條件為：CIP=7.6×10-7mol/L，Tb3+=5.0×10-5mol/L，pH=9.2，BA=1.0×10-6mol/L，分析膽汁酸與鋱—環丙沙星體系的相互作用。

2 結果

2.1 相互作用關系分析

當pH值為9.2時，鋱—環丙沙星體系的熒光強度F值達到最大，此時緩沖溶液加入量為1.5 ml，反應時間為10 min，試劑加入順序依次為CIP、Tb3+、pH、BA；當Tb3+濃度體積在8.0×10-5～1.0×10-4mol/L時，熒光強度達到最大并保持穩定，此時溶液體積在1.6～2.0 ml范圍內，以1.8 ml為準，CIP與Tb3+配比為1：118。測定結果顯示，Zn2+（Cl-）濃度為1.2×10-4mol/L，熒光強度為-1.14%；Ca2+（Cl-）濃度為1.0×10-4mol/L，熒光強度為-3.44%；Fe3+（SO42-）濃度為8.9×10-8mol/L，熒光強度為-5.35%；Mg3+（SO42-）濃度為5.0×10-4mol/L，熒光強度為-0.92%；鳥嘌呤濃度為8.0×10-9mol/L，熒光強度為-8.73；L-組氨酸濃度為1.0×10-4mol/L，熒光強度為-5.84%；葡萄糖濃度為1.0×10-3mol/L，熒光強度為-1.39%。可見金屬離子等共存物質在與人體內濃度相近時，相互之間不會產生影響。

2.2 臨床檢驗應用分析

優化實驗條件后，采用熒光探針方法測定膽汁酸，其檢測限較低，濃度參考值4.8×10-4～4.8×10-3mol/L；取0.4 ml血清置于試管中，加入Al2O3和異丙醇，劑量分別為2.0 g、12.0 ml，在60℃水浴中加熱，超聲振蕩，時間分別為2 min、10 min，取上層離心，轉速為4 000 轉/min，時間為min，置于試管備用，求得血清中膽汁酸濃度，其中血清1樣品含量和膽汁段平均值分別為2.26×10-6mol/L、6.13×10-6mol/L，回收率為97.1%，血清濃度為6.74×10-4mol/L；血清2樣品含量和膽汁段平均值分別為2.10×10-6mol/L、6.03×10-6mol/L，回收率為98.3%，血清濃度為6.24×10-4mol/L；血清3樣品含量和膽汁段平均值分別為1.73×10-6mol/L、5.65×10-6mol/L，回收率為98.0%，血清濃度為5.18×10-4mol/L。

3 討論

熒光光度分析法是臨床檢驗中較為先進的一種手段，具有高靈敏度、寬線性范圍等優勢，在臨床檢驗中的應用十分廣泛，相關報道統計結果顯示，熒光光度分析法現多用于氨芐青霉素、氟羅沙星、甲硝唑、醋酸潑尼松龍、醋酸甲地孕酮、諾氟沙星、氧氟沙星、依諾沙星等藥物測定中，可獲得pH值、線性范圍及檢測限，測定樣品以藥物制劑為主，并拓展到血清中藥物含量的測定中，隨著熒光分析技術的不斷進步，臨床檢驗可供選擇的熒光光度法也越來越多，如同步熒光法、熒光探針法、熒光免疫分析法、光化學熒光法等，這些新方法在臨床檢驗中應用取得的結果較為滿意[2-3]。以第三代喹諾酮藥物和熒光探針為例，諾氟沙星和環丙沙星的抗菌譜廣，是鋱離子的理想配體；因某些金屬離子具有熒光特性，將其作為熒光探針置換生命金屬離子與生物分子配位體相結合，通過測定熒光基本參數，可獲得與生物大分子相關的一些信息[4]。

膽汁酸是膽汁的主要成分，其代謝以肝臟為中心，涉及到膽道系統等途徑，肝膽疾病患者體內血清膽汁酸濃度會發生明顯變化，膽汁酸含量的測定對肝膽疾病的診斷具有重要的臨床意義[5]。本次實驗中，以鋱離子—沙星類藥物作為熒光探針，對實驗條件進行優化，分析熒光光度法在血清中膽汁酸檢測中的應用情況，結果顯示，金屬離子等共存物質在與人體內濃度相近時，膽汁酸與鋱—環丙沙星體系的相互作用并不明顯，采用熒光探針方法測定膽汁酸，其檢測限較低，可用于測定血清中膽汁酸含量，其濃度在正常參考值范圍內，證實以鋱離子—沙星類藥物作為熒光探針測量血清中膽汁酸具有可行性，

綜上所述，熒光探針可成功用于血清中膽汁酸的測定，是一種很有發展前景的肝功能試驗，在一定程度上反映了熒光光度分析法在臨床檢驗中的應用價值，至于該方法在其他方面的應用還有待進一步研究。

[1]王美丹，高燕，趙渤年. 熒光分析法在藥學研究中的應用進展[J].食品與藥品，2013，15（1）：61-64.

[2]陸明，范國榮，汪楊，等. 測量不確定度在藥品檢測領域的研究進展[J]. 中國藥事，2013，27（5）：485-492.

[3]高霞，周凌云，席景磚. 熒光分析法在環境有機污染物檢測中的應用[J]. 光譜實驗室，2011（4）：2008-2016.

[4]吳曉紅，李小華. 熒光光度法在食品檢測中的應用[J]. 食品工業，2012，33（12）：172-175.

[5]徐靜，孫興權，韓慧，等. 熒光法在食品理化檢驗標準中的應用進展[J]. 食品安全質量檢測學報，2015（1）：17-24.

Application of Fluorescence Spectrophotometry in Clinical Examination

WANG Yu JIN Weidong LIU Tianyao LAN Kai, Heilongjiang Provincial Prison Administration Center Hospital, Harbin 150080, China

ObjectiveTo explore the application value of fluorescence spectrophotometry in clinical examination.MethodsWith terbium foxacin as fuorescent probe, analysis on Application of fuorescence method in the detection of serum bile acid.ResultsMetal ions coexisting substances in and are close to the concentration of human body and the interaction of bile acid with terbium ciprofoxacin system is not obvious, determination of bile acids by fluorescence probe technique can be used for the determination of bile acids in serum.ConclusionWith terbium foxacin as fuorescence probe in the measurement of serum bile acids is feasible.

Clinical test, Fluorescence spectrometry, Fluorescence probe

R446.1

A

1674-9308（2015）32-0037-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.32.027

150080哈爾濱，黑龍江省監獄管理局中心醫院