抑癌基因PTEN在結腸癌中的表達及其臨床意義

劉衛梅

抑癌基因PTEN在結腸癌中的表達及其臨床意義

劉衛梅

目的 觀察抑癌基因PTEN在結腸癌組織中的表達, 探討其與結腸癌發生的關系及其臨床意義。方法 采用免疫組織化學S-P法檢測抑癌基因PTEN在結腸癌組織和正常結腸黏膜中的表達。結果 PTEN在正常結腸黏膜和結腸癌中陽性率分別為100.0%, 64.7%。PTEN表達與結腸癌的分化程度高低、浸潤深度、是否有淋巴結轉移關系密切, 差異均有統計學意義(P＜0.05)。結論 PTEN的異常表達可為結腸癌診斷和預后提供科學依據。

結腸癌；抑癌基因PTEN；表達；免疫組化

結腸癌是較常見的腫瘤, 近年來, 發病率有所增加, 發病年齡40～55歲, 平均年齡49.4歲。多基因異常是腫瘤發生的關鍵所在, 腫瘤的發生、發展過程是各種基因及其表達產物作用及互相影響的結果, 一直以來是腫瘤分子機制研究的熱點。PTEN是人類發現的第一個抑癌基因, 它具有磷酸酶活性, 在保持細胞增生、組織分化和細胞凋亡均衡中發揮重要的作用, 在許多腫瘤中表達缺失、突變。本組研究用免疫組化S-P法檢測PTEN在結腸癌組織中的表達情況, 用以探討它與結腸癌發生的關系及臨床意義?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年12月～2012年9月本院手術切除的結腸癌患者68例, 其中男53例, 女15例, 年齡38～70歲,接受過輔助治療和手術治療后復發的患者, 不在本次研究之列, 取距癌腫邊緣8 cm以上鄰近無增生的正常結腸黏膜30例作對照。

1.2 方法 標本用10%中性福爾馬林固定, 厚度4 μm切片,脫蠟、水洗, 微波爐加熱抗原修復, 蘇木素染色, 封膠, 鼠抗人PTEN單克隆抗體、S-P染色試劑盒、DAB顯色劑均購自武漢博士德生物公司, 以腫瘤陽性切片做陽性對照, 用PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 結果判定標準 陽性：細胞漿有棕黃色顆粒著色為陽性細胞, 陰性：細胞漿無著色。將玻片分為10個區, 在10×40倍顯微鏡視野下, 每個區中連續觀察50個細胞, 計量值以平均個數為準, 根據相關資料, 以陽性細胞數所占比例(5個高倍視野)分為：陰性(-)為著色細胞＜5%；弱陽性(+)為細胞著色數量在5%～20%之間：陽性(++)為細胞著色數量在20%～50%之間：強陽性(+++)為細胞著色數目＞50%。

1.4 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件進行統計分析。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 正常結腸黏膜和結腸癌PTEN表達 正常結腸黏膜和結腸癌組織PTEN的陽性率分別為100.0%(30/30)和64.7%(44/68),正常結腸黏膜顯著高于結腸癌組織, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 結腸癌PTEN表達與結腸癌分化程度及淋巴結轉移的聯系 高、中分化腺癌PTEN表達率84.2%(32/38), 明顯高于低分化腺癌表達率40.0%(12/30), 差異具有統計學意義(P＜0.05)。淋巴結無轉移的PTEN陽性表達率為84.8%(39/46),明顯高于有淋巴結轉移的PTEN陽性表達率18.2(4/22), 差異有統計學意義(P＜0.05)。浸潤深度為黏膜及黏膜下層表達85.7%(36/42), 肌層和漿膜及漿膜外表達26.9%(7/26), 二者之間差異有統計學意義(P＜0.05)。

3 討論

PTEH中文名為：人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因, 為近年來發現的一種抑癌基因［1］, 近來研究顯示, 它在人類腫瘤的發生、發展中起到了重要作用,它定位于10q23染色體, mRNA編碼是5.5kh, 氨基酸共403個,由180個氨基酸的催化區(N端)、165個氨基酸的C2區(中部)和50個氨基酸的尾區(C端)組成棚在N端催化區內有與3, 4-二磷酸磷脂酰肌醇相結合的結構區域, 在C端尾區內含有一個PDZ結構域和兩個可能是PEST的多個位點(磷酸化)和序列, N端與磷酸化酶功能相關, 包括對蛋白質和磷脂的脫磷酸化；C2區與細胞質膜相連接：尾區C端參與穩定性的調節：尾區內的結構區域可以調節與細胞質膜的結合。1997年由Li等［1］3個研究小組發現, 也是迄今為止發現的第一個抑癌基因, 它具有雙特異性磷酸酶活性, 表達主要受miRNA、乙?；?、磷酸化及泛素化等轉錄后調控。大量的實驗證明, 在腫瘤的發生、發展中PTEN基因的缺失起到了非常重要的作用, 它通過影響磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/絲-蘇氨酸激酶(AKT)信號途徑來實現對腫瘤的血管生成過程, 主要過程是：它可以通過其脂質磷酸酶活性, PI3K的磷酸化作用的逆轉, 移除磷脂酰肌醇-3磷酸的磷酸基團, 使成磷脂酰肌醇-2磷酸(PIP2)還原, 維持細胞內低PIP3水平［2］。多種惡性腫瘤組織中均能見到腫瘤抑癌基因PTEN蛋白異常表達, 但在不同腫瘤類型中基因突變率有很大的差別［3,4］,多步驟演變導致多基因突變累積的結果是引起腫瘤的發生,在結腸癌的發生、發展中抑癌基因功能喪失具有十分重要的作用。本研究發現, 結腸癌組織中PTEN的表達總陽性率為64.7%, 顯著低于正常結腸黏膜組織的陽性表達率, PTEN基因的異常表達在結腸癌組織中存在, 提示在結腸癌的發生中PTEN起著非常重要的作用, 同時還發現, PTEN在低分化腺癌的陽性表達率為40.0%, 顯著低于高中分化腺癌的陽性表達率84.8%(P＜0.05), 斷定抑制細胞不正常增殖分裂功能喪失是PTEN蛋白下降或缺失的結果, 因而與結腸癌的變化、發展有關。本實驗研究結果表明, 無淋巴結轉移的PTEN表達率明顯高于有淋巴結轉移的PTEN的陽性表達率, 兩者間差異有統計學意義(P＜0.05)；隨著浸潤深度的加深, 它的陽性表達率逐漸降低, 差異具有統計學意義(P＜0.05), 與文獻報道一致, 腫瘤的發生是一件極其復雜的過程, 人們對它與腫瘤發生及發展的關系仍然存在著許多爭議和未知因素, 轉錄前及轉錄后結腸癌發生、發展的調節機制尚需進一步探討。

總之, 本研究表明, 結腸癌的發生、發展與PTEN表達有關, 它可為結腸癌的早期診斷、判斷預后和指導治療提供新的科學理論依據。

［1］ Li J, Yen C, Liaw D, et al. PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast, and prostate cancer. Science.1997.275(5308):1943-1947.

［2］ Choi JP, Desai R, Zheng Y, et al. Androgen actions via androgen receptor promote PTEN inactivation induced uterine cancer. Endocr Relat Cancer.2015.22(5):687-701.

［3］ Salvesen HB, Stefansson I, Kretzschmar EI, et al. Significance of PTEN alterations in endometrial carcinoma: a populationbased study of mutations, promoter methylation and PTEN protein expression. Int J Oncol.2004.25(6):1615-1623.

［4］ Bu HQ, Cai K, Shen F, et al. Induction of apoptosis by capsaicin in hepatocellular cancer cell line SMMC-7721 is mediated through ROS generation and activation of JNK and p38 MAPK pathways. Neoplasma.2015, 62(4):582-591.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.32.015

2015-06-01］

454001 河南省焦作市第二人民醫院病理科