子宮內膜異位癥患者內膜組織中kiss-1及血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達的意義

李 萍，王海波，牛海玲，趙金榮，李秀娟

(解放軍第260醫院，河北 石家莊 050041)

子宮內膜異位癥患者內膜組織中kiss-1及血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達的意義

李 萍，王海波，牛海玲，趙金榮，李秀娟

(解放軍第260醫院，河北 石家莊 050041)

目的 研究子宮內膜異位癥患者內膜組織中kiss-1及血清和腹腔液中血管內皮生長因子可溶性受體(sflt-1)、血管內皮生長因子(VEGF)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、T細胞表達和分泌的調節性激活因子(RANTES)表達的意義。方法 選取子宮內膜異位癥行腹腔鏡手術患者256例作為觀察組，根據病變部位、大小、粘連程度分為Ⅰ～Ⅱ期組76例，Ⅲ～Ⅳ期組180例。選取同期因卵巢良性腫瘤、卵巢系膜囊腫、宮頸病變等入院治療的患者114例作為對照組。采用免疫組化法測定受檢者子宮內膜組織標本kiss-1的表達情況，采用ELISA方法測定受檢者血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達情況。結果 觀察組kiss-1陽性表達率明顯低于對照組(P<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期組kiss-1陽性表達率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期組(P<0.05)。觀察組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達水平明顯高于對照組(P均<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF和RANTES表達水平低于Ⅲ～Ⅳ期組(P<0.05)。結論kiss-1、sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平與子宮內膜異位癥發展密切相關，可能參與了其發病過程，可以作為子宮內膜異位癥的輔助檢測指標。

子宮內膜異位癥；kiss-1；血管內皮生長因子可溶性受體；單核細胞趨化蛋白-1；血管內皮生長因子；T細胞表達和分泌的調節性激活因子

子宮內膜異位癥多發于生育年齡女性，多表現為痛經、持續性下腹痛，經量增多、經期延長及卵巢功能減退和喪失、性交痛和不孕。臨床研究表明，子宮內膜異位癥生物標志物對患者的早期診斷、病情預測、療效評估有重要作用[1]。kiss-1表達減弱可能與子宮內膜異位癥的侵襲過程有關[2]。研究表明，子宮內膜異位癥的發生可能與血管內皮生長因子(VEGF)-VEGFR-sVEGFR系統有關，而血管內皮生長因子可溶性受體(sflt-1)與子宮內膜異位癥的發生呈負相關[3]。單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)能夠參與機體的免疫炎癥調節，而子宮內膜異位癥的發生與患者全身免疫功能異常有關，研究表明，患者內膜組織中MCP-1水平明顯高于正常者，且MCP-1水平在分泌期和增生期也不同[4]。T細胞表達和分泌的調節性激活因子(RANTES)，能夠參與炎性反應并調控細胞的生長分化。本研究進一步探討了子宮內膜異位癥患者子宮內膜組織中kiss-1及血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達的意義，以期為臨床提供更多的參考。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取我院2009年11月—2014年10月收治的子宮內膜異位癥行腹腔鏡手術患者256例作為觀察組，均符合“子宮內膜異位癥的診斷與治療規范”[5]，且經病理證實，年齡15～46(36±9)歲；月經初潮年齡10～16(13±3)歲；月經周期24～30(27±4)d；月經持續時間4～8(7±3)d；孕次0～2(1.0±0.4)次；體質量指數(BMI)(23±4)kg/m2；CA125陽性173例(67.6%)；合并子宮肌瘤68例(26.6%)；痛經142例(55.5%)，非經期下腹痛46例(18.0%)，性交痛8例(3.1%)。觀察組患者再根據病變部位、大小、粘連程度分為2組:Ⅰ～Ⅱ期組76例，年齡16～45(35±10)歲；月經初潮年齡10～15(12±3)歲；月經周期25～29(26±5)d；月經持續時間5～8(7±3)d；孕次0～2(0.9±0.5)次； BMI(22±4)kg/m2；CA125陽性40例(52.6%)；合并子宮肌瘤20例(26.3%)；痛經39例(51.3%)，非經期下腹痛14例(18.4%)，性交痛2例(2.6%)。Ⅲ～Ⅳ期組180例，年齡15～46(37±9)歲；月經初潮年齡10～16(13±4)歲；月經周期26～30(27±5)d；月經持續時間4～8(7±3)d；孕次0～2(1.1±0.4)次； BMI(24±4)kg/m2；CA125陽性133例(73.9%)；合并子宮肌瘤48例(26.7%)；痛經103例(57.2%)，非經期下腹痛32例(17.8%)，性交痛8例(3.3%)。選取同期因卵巢良性腫瘤、卵巢系膜囊腫、宮頸病變等入院治療的患者114例作為對照組，年齡14～50(37±10)歲；月經初潮年齡9～16(12±3)歲；月經周期23～31(28±4)d；月經持續時間4～7(5±2)d；孕次0～2(2.5.±1.0)次；BMI(22±3)kg/m2；CA125陽性20例(17.5%)。3組年齡、月經初潮年齡、月經周期、月經持續時間、孕次、BMI比較差異均無統計學意義(P均>0.05),均排除惡性腫瘤者,服用性激素、免疫抑制劑或非甾體類抗炎藥者,半年內有妊娠或哺乳史者,風濕、類風濕或其他免疫系統疾病者。本研究通過我院臨床試驗倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 kiss-1檢測 取子宮內膜組織標本，包埋、切片備用。采用羊抗人kiss-1metastin多克隆抗體(英國ABCAM提供)，免疫組化試劑盒(北京瑞達醫藥科技有限公司),嚴格按照說明書進行操作。Kiss染色呈棕黃或棕褐色顆粒，定位于細胞質。根據染色強度分為4級：0分為無染色,1分為淡黃色,2分為中度黃色,3分為棕褐色。根據陽性細胞所占比例分為3級：≤10%為1級，10%～50%為2級，>50%為3級。根據陽性細胞的百分比和染色強度分為4個等級：(-)為0～1分,(+)為2～3分,()為4～5分,()為>5分。

1.2.2 血清及腹腔液指標檢測 ①血清：抽取患者空腹肘靜脈血5mL，2500r/min離心15min，取上清液置于-70℃冰箱保存待測。②腹腔液：術中采用負壓吸引，取無血液污染的患者腹腔液5mL，置于無菌離心管中，2500r/min離心15min，取上清置于-70℃冰箱保存待測。③操作：sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES均采用ELISA法進行測定(試劑盒均購自上海信然生物技術有限公司)，使用前將所有試劑充分混勻。加入稀釋好后的標準品、待測樣品50μL于反應孔內,然后立即加入50μL的生物素標記的抗體。蓋上膜板，振蕩混勻，37℃溫育1h,洗板3次。加入親和鏈酶素-HRP 37℃溫育30min。洗板3次。每孔加入底物A、B各50μL，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10min。加入終止液后立即在450nm波長處測定各孔的OD值，根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。

1.3 統計學方法 應用SPSS 17.0統計軟件進行統計處理，計數資料采用2檢驗，計量資料采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 kiss-1在子宮內膜組織中的陽性表達情況 觀察組、Ⅰ～Ⅱ期組、Ⅲ～Ⅳ期組kiss-1陽性表達率明顯低于對照組(P均<0.05)。Ⅰ～Ⅱ期組kiss-1陽性表達率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期組(P<0.05)。見表1。

表1 kiss-1在子宮內膜組織的陽性表達情況 例

注：①與對照組比較，P<0.05；②與Ⅰ～Ⅱ期組比較，P<0.05。

2.2 血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES表達情況比較 觀察組、Ⅰ～Ⅱ期組、Ⅲ～Ⅳ期組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平明顯高于對照組(P均<0.05)。Ⅲ～Ⅳ期組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、和RANTES水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期組(P均<0.05),Ⅰ～Ⅱ期組和Ⅲ～Ⅳ期組血清和腹腔液中MCP-1水平比較差異均無統計學意義(P均 >0.05)。見表2。

3 討 論

子宮內膜異位癥多發于育齡期女性，雖然本病屬于良性疾患，但其具有遠處轉移和種植的惡性特征，可導致患者不孕、慢性疼痛等，嚴重影響其正常生活工作。目前其發病機制不明，有多種學說闡述其發病病因，病理改變為異位內膜組織隨激素水平變化發生周期性出血，同時伴有周圍組織增生和粘連，在病變區可見紫褐色斑點或小泡，最后可發展為紫藍色實質性結節或包塊。研究表明，子宮內膜異位癥的發病與基因、炎性遞質、血供有關[6-8]。

表2 各組血清和腹腔液中sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平比較

注：①與對照組比較，P<0.05；②與Ⅰ～Ⅱ期組比較，P<0.05。

王偉等[9]和錢燕萍等[10]研究表明，kiss-1及其表達產物可以影響機體的神經內分泌系統，其可以促進下丘腦促性腺激素釋放激素分泌，并可以抑制腫瘤細胞的轉移，而子宮內膜異位癥患者多有遠處種植現象。申慶文等[11]研究表明，kiss-1在子宮內膜異位癥的表達降低，同時發現不同臨床分期中kiss-1表達不同，但差異無統計學意義(P>0.05)。但本研究發現子宮內膜異位癥組、Ⅰ～Ⅱ期組、Ⅲ～Ⅳ期組kiss-1陽性表達率明顯低于對照組,Ⅰ～Ⅱ期組kiss-1陽性表達率明顯高于Ⅲ～Ⅳ期組。這一結論與金海鴻等[12]的研究結果一致，可能與患者入選的標準或調查樣本大小有關。

目前，血管形成是子宮內膜異位癥的研究熱點，而VEGF和sflt-1可以促進子宮內膜間質細胞的增殖。王春紅等[13]對34例子宮內膜異位癥患者進行研究發現，VEGF表達在分泌期和增生期失去了正常的周期性變化，均呈現高水平表達。同時，子宮內膜異位癥患者異位組織中微血管密度明顯升高[14]。本研究證實，子宮內膜異位癥組sflt-1和VEGF水平均較對照組高，且Ⅲ～Ⅳ期水平高于Ⅰ～Ⅱ期。說明sflt-1和VEGF可能參與了子宮內膜異位癥的發病過程。

MCP-1的研究較為廣泛，其參與機體多種生理或病理性活動，主要參與機體免疫炎癥調控，同時可以上調VEGF的表達水平，通過誘導內皮細胞遷移，參與到血管生成中[15]。RANTES主要作用是激活T細胞，趨化、激活多種白細胞。研究表明，RANTES與子宮內膜異位癥患者組織炎癥、痛經評分呈正相關(P均<0.05)，說明RANTES可能與子宮內膜碎片逆流進入腹腔后導致的炎癥反應有關[15-16]。本研究表明，子宮內膜異位癥組MCP-1和RANTES水平均高于對照組，且Ⅲ～Ⅳ期組RANTES水平高于Ⅰ～Ⅱ期組，而Ⅰ～Ⅱ期組和Ⅲ～Ⅳ期組MCP-1比較差異無統計學意義。

綜上所述，kiss-1、sflt-1、VEGF、MCP-1、RANTES水平與子宮內膜異位癥發展密切相關，可能參與了其發病過程，可以作為子宮內膜異位癥的輔助檢測指標。

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Significance of the expression of kiss-1in endomentrial tissue and the expression of sflt-1, VEGF,MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid in the patients with endometriois

LI Ping, WANG Haibo, NIU Hailing, ZHAO Jinrong, LI Xiujuan

(The 260th Hospital of the PLA, Shijiazhuang 050041, Hebei, China)

Objective It is to study the significance of the expression of kiss-1in endomentrial tissue and the expression of sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid in the patients with endometriois.Methods 256cases of patients with endometriosis undergoing laparoscopic surgery were selected as observation group, in which according to the lesion, the size of adhesions there were 76cases of stage Ⅰ-Ⅱ (Ⅰ-Ⅱ stage group), Ⅲ-Ⅳ of 180cases (Ⅲ-Ⅳ stage group).114cases of patients admitting to hospital because of ovarian tumor, mesosalpinx cyst, cervical lesions were selected as control group.The expression of kiss-1endomentrial tissue was detected by immunohistochemistry, and the expression of sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid were detected by ELISA.Results The positive rate of the expression of kiss-1in observation group was significantly lower than that in the control group(P<0.05), and the rate in Ⅰ-Ⅱ stage group was significantly higher than that in Ⅲ-Ⅳ stage group(Pall<0.05).The levels of the expression of sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES in serum and peritoneal fluid were significantly higher than those in the control group(P<0.05).The levels in Ⅰ-Ⅱstage group were significantly lower than those in Ⅲ-Ⅳ stage group (Pall<0.05).Conclusion The levels of kiss-1, sflt-1, VEGF, MCP-1, RANTES are closely related with the development of endometriosis, which may be involved in its pathogenesis, and can be used as auxiliary determing indexes of endometriosis.

endometriosis; kiss-1; soluble vascular endothelial growth factor receptor; monocyte chemoattractant protein-1; vascular endothelial growth factor; T cell expressed and secreted regulatory activator

李萍，女，主治醫師，碩士，主要從事子宮內膜異位癥的研究。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.14.007

R473.71

A

1008-8849(2015)14-1501-03

2014-12-14