臍血tau蛋白、激活素A聯合檢測對新生兒腦損傷的診斷價值

李力敏,辛素芳，劉 佩，王 艷，馮 卿，曲 凡

(1.河北醫科大學第四醫院，河北 石家莊 050035；2.河北省胸科醫院，河北 石家莊 050041；3.石家莊醫學高等專科學校，河北 石家莊 050500)

臍血tau蛋白、激活素A聯合檢測對新生兒腦損傷的診斷價值

李力敏1,辛素芳1，劉 佩1，王 艷2，馮 卿3，曲 凡1

(1.河北醫科大學第四醫院，河北 石家莊 050035；2.河北省胸科醫院，河北 石家莊 050041；3.石家莊醫學高等專科學校，河北 石家莊 050500)

目的 探討臍血tau蛋白、激活素A聯合檢測在新生兒腦損傷中的診斷價值。方法 將60例患絨毛膜羊膜炎的母親所生新生兒納入實驗組，并根據其出生后神經系統表現、腦影像學檢查分為腦損傷組26例和非腦損傷組34例；同時選取20例健康母親所生新生兒作為對照組。采用酶聯免疫吸附法檢測3組新生兒臍血tau蛋白、激活素A的水平。結果腦損傷組臍血tau蛋白、激活素A水平明顯高于非腦損傷組和對照組(P均<0.05)；且隨著腦損傷程度的加重，tau蛋白、激活素A水平進一步增高。結論 臍血tau蛋白、激活素A對具有宮內感染風險的新生兒腦損傷早期診斷有一定意義。

臍血；tau蛋白；激活素A；新生兒腦損傷

圍生期感染是導致腦癱發生的主要危險因素之一,母親患絨毛膜羊膜炎可使新生兒以后發展為腦癱的危險性增加4倍[1]。而對宮內感染致新生兒腦損傷的早期預測及正確處理，可降低其病死率，提高其遠期生活質量。目前新生兒腦損傷的診斷和預后評估主要的依據是神經系統臨床表現、影像學、電生理檢查等，這些手段存在著診斷滯后性，使得許多腦損傷患兒錯過最佳治療的時間窗，遺留不同程度的神經系統后遺癥如腦性癱瘓、精神發育遲滯等。tau蛋白是一種反映神經細胞損傷程度的標志物[2]，其與顱腦損傷關系的研究逐年增多，但在新生兒腦損傷中的研究報道尚少。激活素A具有抗炎活性，在中樞神經系統炎癥過程中廣泛表達,能有效抑制腦損傷后因缺血再灌注導致的過度炎癥反應[3]。tau蛋白與激活素A聯合檢測炎癥反應對新生兒腦損傷的影響目前尚少見報道。本研究通過測定具有宮內感染風險的新生兒臍血tau蛋白、激活素A的表達，并結合其出生后神經系統臨床表現、腦影像學檢查及新生兒神經行為(NBNA)評分，探討臍血tau蛋白、激活素A的表達與新生兒腦損傷的關系，旨在為早期干預提供有力的依據。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2012年8月—2013年12月在河北醫科大學第四醫院出生母親患絨毛膜羊膜炎的新生兒60例作為實驗組，均符合絨毛膜羊膜炎的診斷[4]，至少出現下述一項表現：母親心率≥100次/min，胎兒心率≥160次/min，母親發熱≥38℃，子宮激惹，羊水惡臭，母親白細胞計數≥15×109L-1，中性粒細胞≥90%。排除母親有妊娠期并發癥如妊高征子癇前期、妊娠期糖尿病、妊娠期合并心臟病、胎盤早剝、妊娠期合并甲狀腺功能減低癥等患者，圍生期窒息缺氧的新生兒，有遺傳代謝性疾病、神經系統畸形及其他系統嚴重畸形者。對所有入選的早產兒在出生后48～72h內進行腦B超檢查，B超發現有彌漫性腦水腫、顱內出血、缺氧缺血灶者診斷為早產兒腦損傷。對于早期懷疑有彌散性腦室周圍白質軟化，腦B超檢查陰性的部分病例，在新生兒早期行腦MRI檢查協助診斷，發生基質-腦室內出血、 腦室周圍出血及梗死及腦室周圍白質軟化，其他的部位損傷如蛛網膜下腔、小腦出血，基底核及橋腦的變性或壞死等改變之一者進入腦損傷組。足月兒生后72h行NBNA評分，NBNA≤35分[4]為腦損傷，其中NBNA評分>32～35分為輕度腦損傷，NBNA評分28～32分為重度腦損傷。實驗組新生兒根據上述標準分為2組：腦損傷組26例，男15例，女11例； 足月兒8例，早產兒18例；早產兒胎齡(33.23±3.77)周；出生體質量(1.8±0.65)kg；剖宮產10例，自然分娩16例。輕度腦損傷17例，NBNA評分(31.5±3.5)分；重度腦損傷9例，NBNA評分(28.3±3.0)分。非腦損傷組34例,男19例，女15例；足月兒21例，早產兒13例；胎齡(33.46±1.86)周；出生體質量(2.02±0.43)kg；剖宮產10例，自然分娩24例。隨機收集同期健康母親所生新生兒20例作為對照組,男11例，女9例；足月兒12例，早產兒8例；早產兒胎齡(33.31±2.91)周；出生體質量(2.0±0.44)kg；剖宮產7例，自然分娩13例，矯正胎齡40周時行NBNA 評分均>35分。3組新生兒生產方式、性別、胎齡、出生體質量比較差異均無統計學意義(P均>0.05)，具有可比性。

1.2 方法 在新生兒娩出且第1聲哭聲前用注射器抽取臍動脈血2mL裝入不加抗凝劑的試管中，室溫放置，0.5h內放入離心機4000r/min離心15min，留取上清液，置于-80℃冰箱保存待測。血清tau蛋白及激活素A水平檢測采用酶聯免疫分析(ELISA)法，試劑盒由上海原生物工程研究所提供，操作步驟嚴格按說明書由專人完成。

2 結 果

2.1 3組臍血中tau蛋白及激活素A水平比較 腦損傷組臍血中tau蛋白及激活素A水平明顯高于非腦損傷組及對照組(P均<0.05)，非腦損傷組與對照組組間比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。見表1。

表1 3組臍血中tau蛋白及激活素A水平比較

注：①與腦損傷組比較，P<0.05。

2.2 腦損傷組不同損傷程度患兒臍血tau蛋白、激活素A水平比較 重度腦損傷患兒臍血tau蛋白及激活素A水平高于輕度腦損傷患兒(P均<0.05)。見表2。

表2 腦損傷組不同損傷程度患兒臍血tau蛋白及激活素A水平比較

注：①與輕度腦損傷比較，P<0.05。

2.3 腦損傷組臍血tau蛋白、激活素A水平及NBNA評分相關性分析 經Pearson直線相關分析，腦損傷組新生兒臍血tau蛋白與激活素A水平呈顯著正相關(r=0.520，P<0.05)，而新生兒臍血tau蛋白與激活素A水平均與NBNA評分呈負相關(r=-0.696，-0.641，P<0.05)。

3 討 論

新生兒腦損傷的發生受圍生期多種因素的影響, 其中宮內感染所導致的新生兒腦損傷是目前研究的熱點之一。多種動物實驗研究證明，非特異性炎癥甚至在無病原體存在時，細胞因子的釋放也可能導致胎兒腦損傷的發生[5]。母體宮內感染所導致的胎兒炎癥反應綜合征(FIRS)是腦室內出血、腦室周圍白質軟化的重要因素，可引起新生兒腦損傷如腦癱的發生。Romero等[6]研究結果顯示，羊水中炎癥細胞因子(IL-6和IL-1β)水平的增高與早產兒發生腦白質損傷存在著密切關系，也與遠期腦癱的發生存在著較高的相關性。

tau蛋白是腦內神經元細胞支架蛋白之一，主要分布在大腦的額葉、顳葉、海馬和內嗅區神經元以及外周神經的軸突內。其正常的功能是維持微管的穩定性，也是神經元極性形成和軸突生長發育不可缺少的因素之一。tau蛋白在神經元變性疾病的腦脊液中含量明顯增多，可作為一種神經元和軸突損傷的潛在標志物[7]。tau蛋白還是一種含磷的糖蛋白，神經元的可塑性與其磷酸化程度有關，許多因素可引發tau蛋白過度磷酸化，如Ab、thrombin、LPA、TNF-α、IL-1等可以通過多種信號轉導通路改變激酶或磷酸酯酶的活性。tau蛋白的過度磷酸化降低tau蛋白與微管的親和力，使游離tau蛋白濃度升高，為進一步聚集形成螺旋絲提供了條件，導致tau蛋白從微管上解離，引起微管功能紊亂，進而導致神經細胞死亡[7]。臨床研究證明，血清tau蛋白濃度與腦梗死面積及腦缺血患者的神經功能缺損程度呈顯著正相關[8]。趙子艾等[9]研究發現，在創傷性腦損傷后6h內，血漿中tau蛋白及其降解產物的含量與傷情的嚴重程度有關。腦損傷后，tau蛋白從神經細胞釋放到腦脊液中，再通過血腦屏障滲漏到外周血液中，因此，外周血及腦脊液中tau蛋白濃度可反映腦損傷程度[10]。本研究結果顯示，腦損傷組臍血tau蛋白水平較非腦損傷組及對照組明顯升高，推測隨著宮內感染程度加重，腦損傷程度進一步加重，釋放入血的tau蛋白增加，表明腦損傷程度與tau蛋白水平呈正相關。tau蛋白含量的增高提示神經細胞的繼發損害，進一步證明tau蛋白是一種反映神經細胞損傷程度的指示物。

激活素A是一種多功能細胞因子，具有抗炎活性，在組織損傷及炎癥修復中具有重要作用。Jones等[11]研究發現，激活素A在參與全身炎性反應的過程中，首先與TNF-a共同被調控釋放，再進一步誘導單核巨噬細胞分泌卵泡抑素及IL-6，是炎性反應啟動階段的關鍵性的炎性調節遞質之一。激活素A作為前炎性細胞因子參與其他炎性遞質調控，具有抑制炎性反應及誘發炎癥效應的雙重作用，有利于防止機體由免疫反應過度所造成的損害[12]。有研究資料發現，由圍生期宮內感染所致早產者，孕婦在分娩前，循環中激活素A水平在其他急性期細胞因子如TNF-α及ILs出現前即增高，外周血中的激活素A水平亦增加[13]。當宮內感染發生后，通過Toll蛋白樣受體病原體經多種途徑促進激活素A的產生和釋放，激活素A進一步促進幾種關鍵性的炎性遞質如IL-1β、TNF-α、IL-6等釋放產生，促進炎癥反應的啟動，IL-1β、TNF-α、IL-6等也反過來促進激活素A的分泌，形成了一個正反饋環[14]。IL-1β、TNF-α、IL-6等細胞因子對少突膠質細胞前體細胞、星形膠質細胞和成髓少突膠質細胞等有直接損傷作用，可誘導神經細胞凋亡的發生，導致遲發性神經細胞死亡[15]。相關研究證明，腦損傷患者發病后血清激活素A水平在短時間內升高，腦損傷程度愈重，其水平愈高，可用于評價腦損傷患者的嚴重程度及預后[3]。本研究發現臨床患絨毛膜羊膜炎的母親所生新生兒臍血激活素A水平較對照組明顯增高，且腦損傷組臍血激活素A水平較非腦損傷組顯著增高，且與病情呈正相關。提示臍血激活素A參與炎癥反應過程，炎癥反應引起FIRS，進而引起新生兒腦損傷。說明激活素A可作為一項判斷腦損傷病情的指標，對新生兒腦損傷的早期診斷有重要價值。

綜上所述，激活素A參與炎癥反應過程，tau蛋白與神經細胞損傷程度呈正相關，二者聯合檢測可更為準確地預測宮內感染致腦損傷的發生,從而指導臨床對新生兒腦損傷早期發現、早期干預、早期治療，降低新生兒神經系統后遺癥的發生率，提高人口素質。且該方法對新生兒無創，檢測方便，值得研究探討。

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Diagnostic value of determination of tau protein and activin A in cord blood for neonatal brain injury

LI Limin1, XIN Sufang1, LIU Pei1, WANG Yan2, FENG Qing3，QYU Fan1

(1.The Fourth Hospital of Hebei University, Shijiazhuang 050035, Hebei, China; 2.Chest Hospital of Hebei Province, Shijiazhuang 050041, Hebei, China; 3.Shijiazhuang Medical College, Shijiazhuang 050500, Hebei, China)

Objective It is to explore the diagnostic value of determination of tau protein and activin A in cord blood for neonatal brain injury.Methods The neonates mothered by 60women with amniotic membrane inflammation were selected as experimental group, and divided into brain injury group (26cases) and non-brain injury group according to their performance of nervous system and brain imaging after birth.At the same time, the neonates of 20cases of healthy mothers were selected as healthy control group.ELISA was used to detect the levels of tau protein and activin A in cord blood.Results The levels of tau protein, activin A in cord blood in brain injury group were obviously higher than that in non-bran injury group and control group (P<0.05); Along with the degree of brain injury aggravated the tau protein and activin A levels increased further.Conclusion Tau protein, activin A in cord blood has some significance for the early diagnosis of brain injury in the neonates with risk of fetal intrauterine infection.

cord blood; tau protein；activin A；brain injury

李力敏，女，主治醫師，主要從事兒科臨床工作。

河北省科技廳資助項目(12277742)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.14.003

R0651.15

A

1008-8849(2015)14-1489-03

2014-12-18