正交設計法優選黃連總生物堿提取測定方法

趙梓辰，楊麗，李雪蓮，陳鴻平，劉友平

·炮制制劑·

正交設計法優選黃連總生物堿提取測定方法

趙梓辰，楊麗，李雪蓮，陳鴻平，劉友平

目的：考察黃連總生物堿的提取測定方法。方法：采用正交實驗設計法，以總生物堿得率為考察指標，研究甲醇濃度、加醇量、超聲時間3個因素對黃連總生物堿提取的影響。結果：黃連總生物堿的最佳提取方法為加入50倍量的1%鹽酸甲醇液，其中甲醇為75%的甲醇，超聲提取1h。結論：優選的黃連總生物堿提取測定方法穩定可行。

黃連；總生物堿；正交設計

黃連為毛茛科植物黃連Coptis chinensis Franch.、三角葉黃連Coptis deltoidea C.Y. Cheng et Hsiao或云連Coptis teeta Wall.的干燥根莖[1]。具有清熱燥濕，瀉火解毒等功效。黃連的主要有效化學成分為多種生物堿，現已分離出的生物堿有小檗堿、黃連堿、巴馬丁、甲基黃連堿、木藍堿、藥根堿等[2]。黃連中所含生物堿屬于異喹啉類堿，具有抗菌、抗病毒、抗血栓、抗腫瘤、抗胃癌等作用[3]。目前多有文獻報道采用高效液相色譜法測定小檗堿含量，但高效液相色譜法具有操作繁瑣、耗費大等缺點。而采用紫外分光光度法測定黃連總生物堿的文獻報道較少，故本文采用正交設計法優選黃連總生物堿的提取測定方法，為研究和生產提供一定的參考依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UV1100紫外-可見分光光度計（上海天美科學儀器有限公司）；FA2004N電子分析天平（萬分之一，上海民橋精密科學儀器有限公司），電子分析天平BP211D（十萬分之一，德國Sartouris股份有限公司）；SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）；BUG25-12超聲波清洗機（上海必能信公司）

1.2 試藥

黃連藥材購于四川千方中藥飲片有限公司（批號：20140101）；鹽酸小檗堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110713-200609，含量測定用）；所有試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品21.11 mg，置25 mL容量瓶中，加入適量甲醇液溶解，稀釋至刻度，搖勻。精密量取0.7 mL至25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。

2.2 標準曲線的制備

分別精密吸取上述對照品溶液1、2、3、4、5

mL至10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。以甲醇溶液為空白對照，在349 nm波長處測定其吸光度。以對照品濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程為:Y=0.066X-0.0083，r=0.9994。鹽酸小檗堿的濃度在2.364～11.822 μg/mL的范圍內線性關系良好。

2.3 樣品提取測定方法

精密稱取黃連粉末1.0 g，置100 mL錐形瓶中，精密加入1%鹽酸甲醇液50 mL，稱定重量，超聲處理1 h，取出并放冷。再稱定其重量，用1%鹽酸甲醇溶液補足重量，濾過，精密量取續濾液0.1 mL，置25mL容量瓶中， 加甲醇液至刻度，搖勻。以1%鹽酸甲醇溶液為空白對照，在349 nm波長下測定其吸光度，然后根據回歸方程計算出樣品黃連的總生物堿含量。

2.4 正交實驗

根據黃連總生物堿的性質和文獻報道，本實驗選取甲醇濃度(A)、加醇量(B)、超聲時間(C)為考察因素，每個因素取3個水平，按照L9(33)正交表進行正交實驗，以黃連總生物堿含量為評價指標，優選其提取工藝。各因素水平表見表1，結果見表2，總生物堿含量測定結果方差表見表3，效應曲線見圖1。

表1 正交實驗的因素水平

表2 正交實驗設計與結果

表3 正交實驗總生物堿含量測定結果方差表

圖1 效應曲線圖

由直觀分析可知，影響黃連總生物堿提取的各因素順序為B＞A＞C，即加醇量＞甲醇濃度＞超聲時間；經過方差分析可知，甲醇濃度和加醇量對總生物堿的提取效果有顯著性影響，而提取時間對提取效果沒有顯著性影響。結合效應曲線圖，可得黃連總生物堿的提取方法為A2B2C1，即取黃連藥材粉末1.0 g，加入50 mL的1%鹽酸甲醇液，其中甲醇為75%的甲醇，超聲1 h。

3 結果與討論

3.1 本實驗所優選出的黃連總生物堿提取方法適用于實驗室分析研究，不適合于工廠大生產提取黃連總生物堿。

3.2 黃連總生物堿含量隨受熱時間的延長而降低，故提示總生物堿不適宜在高溫條件下長時間提取。

3.3 黃連生物堿多為季銨堿，溶媒中增加水含量有利于生物堿的提出，但50%甲醇的生物堿提取率比75%甲醇的提取率低，原因有待進一步研究。

[1] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:285.

[2] 柳永青.黃連的研究概況[J].中國中醫藥咨詢,2009,1(2):29.

[3] 王瑞瑞,陳倩倩,孫阿惠,等.微波輔助提取黃連生物堿及其含量測定[J].農產品加工業,2011:39.

(責任編輯：李蕓霞)

Optimize the extraction determination of total alkaloids in Huanglian by orthogonal design/

ZHAO Zi-chen, YANG Li, LI Xue-lian, CHEN Hong-ping, LIU You-ping//(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137,China)

Objective:To study the method for determination of extraction and total alkaloid in Huanglian.Method:According to the yield of total alkaloid, the orthogonal experimental design was used to study the effect of extract factors on total alkaloid including methanol concentration, the amount of methanol and ultrasonic time.Result:The optimum condition for the total alkaloid extraction was added 50 times 1% hydrochloric acid in 75% methanol solution and ultrasonic extraction 1h.Conclusion:The preferred method of total alkaloid extraction and determination of Huanglian is stable and feasible.

Huanglian; total alkaloids; orthogonal design

R 284.2

A

1674-926X(2015)02-008-02

國家中醫藥管理局中醫藥行業科研專項(No.201007011)

成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 611137

趙梓辰(1989-)，女，在讀碩士研究生，從事中藥化學成分與質量標準化研究

Tel:15208256409 Email:783562633@qq.com

劉友平，女，研究員，博士生導師，從事中藥質量標準化及藥效物質基礎研究

Tel:028-61800158 Email:lyp@cdutcm.edu.cn

2014-06-19