胃瘍寧丸抗炎鎮(zhèn)痛的藥效研究

黃思明，梁志健，操紅纓，吳清和，黃萍

·藥理毒理·

胃瘍寧丸抗炎鎮(zhèn)痛的藥效研究

黃思明，梁志健，操紅纓，吳清和，黃萍

目的：對胃瘍寧丸的抗炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行全面的藥效學(xué)評價。方法：采用小鼠扭體實(shí)驗(yàn)、甲醛致痛實(shí)驗(yàn)、熱刺激致痛實(shí)驗(yàn)及壓足致痛實(shí)驗(yàn)評價胃瘍寧丸的鎮(zhèn)痛作用；采用小鼠毛細(xì)管通透性實(shí)驗(yàn)、小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)、大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)評價胃瘍寧丸的抗炎作用。結(jié)果：胃瘍寧丸各劑量對醋酸所致小鼠的扭體次數(shù)無明顯影響；胃瘍寧丸高劑量能減少小鼠第二時相中的舔左后足累積時間（P＜0.05）；胃瘍寧丸各劑量組可分別提高各時間點(diǎn)熱刺激及壓足刺激所致的痛閾提高百分率（P＜0.01）；胃瘍寧丸中、高劑量能顯著性降低二甲苯所致小鼠的耳廓腫脹度（P＜0.05～0.01）；各劑量能顯著性降低大鼠肉芽腫系數(shù)（P＜0.01）。結(jié)論：胃瘍寧丸具有良好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，可供臨床選用。

胃瘍寧丸；抗炎；鎮(zhèn)痛

胃瘍寧丸由白術(shù)、烏藥、山藥、白及、青皮、高良姜、赤芍、仙鶴草等藥物組方而成，具有溫中散寒、理氣止痛、制酸止血的功效。用于胃脘脹痛或刺痛，嘔吐發(fā)酸屬于寒凝氣滯者。抗胃潰瘍作用是目前對胃瘍寧丸的一個研究重點(diǎn)。已有實(shí)驗(yàn)證明，胃瘍寧丸可通過減少胃粘膜損傷因子、增加胃粘膜屏障的功能和增強(qiáng)胃粘膜修復(fù)功能，起到抗實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的作用[1～2]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)胃瘍寧丸還具有胃腸解痙、止嘔及抑制胃腸運(yùn)動的作用[3]。胃潰瘍本質(zhì)是炎癥的發(fā)生且多伴有痛疼，而目前，對胃瘍寧丸抗炎鎮(zhèn)痛的研究鮮有報(bào)道。對胃瘍寧丸進(jìn)行系統(tǒng)的、多方面、綜合的抗炎鎮(zhèn)痛研究具有重要意義，這不僅可以為其抗炎鎮(zhèn)痛作用提供客觀、全面的藥效學(xué)評價，也為臨床的選用提供了可靠的理論依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物

胃瘍寧丸（藥粉，不含輔料，2.5 g生藥/g），由廣州陳李濟(jì)藥廠提供（批號：09014）；阿斯匹林，Bayer HealthCare AG（批號：BTA8RR3）；地塞米松，天津力生制藥股份有限公司（批號：110112）。

1.2 劑量設(shè)置

胃瘍寧丸：小鼠和大鼠高、中、低劑量分別為3.16，1.58，0.79 g．kg-1．d-1。

阿司匹林：0.017 g．kg-1．d-1；地塞米松：0.25 g．kg-1．d-1。

1.3 動物

KM小鼠，SD大鼠：許可證號SCXK（粵）2008-0020。

1.4 試劑與儀器

醋酸（廣東醫(yī)藥站化學(xué)公司，批號：090226）；甲醛（丹東市龍海試劑廠，批號：1004280104）；二甲苯（天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心，批號：20081028）。

YLS-6B型智能熱板儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司）；YLS-3E型電子壓痛儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站）；722型分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）。

2 方法

2.1 鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)[4～6]

2.1.1 對醋酸所致小鼠痛疼的影響 取SPF級KM小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，隨機(jī)分為對照組、阿斯匹林組、胃瘍寧丸低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只。動物每天灌胃給藥1次，連續(xù)3天，對照組給予等量蒸餾水。并于末次給藥后1 h腹腔注射0.8%醋酸生理鹽水溶液0.2 mL/只，觀察記錄20 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)，比較各組差異。

2.1.2 對甲醛所致小鼠疼痛的影響 取SPF級KM小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，隨機(jī)分為對照組、阿斯匹林組、胃瘍寧丸低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只。動物每天灌胃給藥1次，連續(xù)3天，對照組給予等量蒸餾水。于末次給藥后1 h，小鼠左后足足跖皮下注射2.5%甲醛生理鹽水溶液0.05 mL/只，立即計(jì)時，記錄0～5 min內(nèi)（第一時相）和20～30 min（第二時相）內(nèi)小鼠舔左后足累積時間，比較各組差異。

2.1.3 對熱刺激所致小鼠疼痛的影響 取SPF級KM小鼠，雌性，體重18～22 g。使用智能熱板儀測定小鼠正常痛閾值兩次，取兩次痛閾平均值作為給藥前的基礎(chǔ)痛閾值，選取基礎(chǔ)痛閾在5～30 s之間的小鼠，隨機(jī)分為對照組、阿司匹林組、胃瘍寧丸低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只。動物每天灌胃給藥1次，連續(xù)3天，對照組給予等量蒸餾水。于末次給藥后30，60，120 min分別測小鼠痛閾值，計(jì)算痛閾提高百分率，比較組間差異。如60 s仍無反應(yīng)，將小鼠取出，以免燙傷，其痛閾值以60 s計(jì)算。

痛閾提高百分率=（給藥后痛閾-基礎(chǔ)痛閾）/基礎(chǔ)痛閾×100%

2.1.4 對小鼠壓足致痛的影響 取SPF級KM小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，隨機(jī)分為對照組、阿司匹林組、胃瘍寧丸低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只。動物每天灌胃給藥1次，連續(xù)3天，對照組給予等量蒸餾水。使用壓痛儀測正常痛閾值兩次，取兩次痛閾平均值作為給藥前的基礎(chǔ)痛閾值，于末次給藥后30，60，120 min測量鼠痛閾值，計(jì)算痛閾提高百分率，比較組間差異。

痛閾提高百分率=（給藥后痛閾-基礎(chǔ)痛閾）/基礎(chǔ)痛閾×100%

2.2 抗炎實(shí)驗(yàn)[7～8]

2.2.1 對醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響 取SPF級KM小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，隨機(jī)分為對照組、阿斯匹林組、胃瘍寧丸低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只。動物每天灌胃給藥1次，連續(xù)3天，對照組給予等量蒸餾水。于末次給藥后1 h由尾靜脈注入2%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液，劑量為0.1 mL/10 g，同時于腹腔注射0.8%醋酸生理鹽水溶液（0.2 mL/只），20 min后放血處死動物，用適量生理鹽水反復(fù)沖洗腹腔，并收集洗出液，濾紙濾過，調(diào)整容積至10 mL，于722型分光光度計(jì)（波長590 nm）測定OD值，比較各組的差異。2.2.2 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響 取SPF級KM小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，隨機(jī)分為對照組、阿斯匹林組、胃瘍寧丸低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只。動物每天灌胃給藥1次，連續(xù)3天，對照組給予等量蒸餾水。末次給藥1 h后將二甲苯50 μL均勻滴于小鼠右耳兩面，左耳不涂作為對照。1.5 h后將小鼠脫頸椎處死，用直徑8 mm打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片，稱重，以左、右耳片重量之差作為腫脹度，比較各組間差異。

2.2.3 對大鼠棉球肉芽腫的影響 取SPF級SD大鼠，體重180～220 g，隨機(jī)分為對照組、地塞米松組、胃瘍寧丸低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組10只。10﹪水合氯醛麻醉，常規(guī)消毒，胸部切開約1 cm，將20 mg的高壓滅菌棉球（青霉素和鏈霉素混合液浸泡后烘干）從切口處植入腋下部皮下，左右各一個，隨即縫合皮膚。從手術(shù)當(dāng)日開始給藥，對照組給予蒸餾水，連續(xù)給藥6天，第7天打開原切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，放干燥箱中60℃烘干，稱重。將稱得的重量減去棉球原重即得肉芽腫重量，并計(jì)算肉芽腫系數(shù)。

肉芽腫凈重（mg）=干燥后棉球肉芽腫重量（mg）－原棉球重量（mg）

肉芽腫系數(shù)（mg/100g）=肉芽腫凈重（mg）/大鼠體重（100g）

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 對醋酸所致小鼠痛疼的影響

如表1所示，胃瘍寧丸各劑量對醋酸所致小鼠的扭體次數(shù)無明顯影響（P＞0.05）。阿斯匹林能顯著減少醋酸所致小鼠的扭體次數(shù)（P＜0.01）。

表1 胃瘍寧丸對醋酸所致小鼠疼痛的影響（±s）

表1 胃瘍寧丸對醋酸所致小鼠疼痛的影響（±s）

注：與對照組比較，1) P＜0.05，2) P＜0.01（下同）

組別 劑量/g．kg-1動物數(shù)/只 扭體次數(shù)/次對照 - 10 35.00 ±5.06阿斯匹林 0.017 10 9.10±2.472)胃瘍寧丸低劑量 0.79 10 31.00±7.67中劑量 1.58 10 32.30±7.39高劑量 3.16 10 31.30±5.96

3.2 對甲醛所致小鼠疼痛的影響

表2結(jié)果提示，第一時相，胃瘍寧丸低、中、高劑量對小鼠的舔左后足累積時間均無明顯影響（P＞0.05），第二時相，胃瘍寧丸高劑量能減少小鼠的舔左后足累積時間（P＜0.05）。阿斯匹林能顯著減少第一、第二時相小鼠的舔左后足累積時間（P＜0.01）。

表2 胃瘍寧丸對甲醛所致小鼠疼痛的影響（±s）

表2 胃瘍寧丸對甲醛所致小鼠疼痛的影響（±s）

動物數(shù)/只組別 劑量/ g．kg-1第一時相/s第二時相/s對照 - 10 76.40±21.54 160.50±23.48阿斯匹林 0.017 10 33.10±19.582)126.20±26.972)胃瘍寧丸低劑量 0.79 10 77.57±18.41 139.40±40.47中劑量 1.58 10 60.70±21.30 159.10±22.65高劑量 3.16 10 63.10±14.25 138.50±18.751

3.3 對熱刺激所致小鼠疼痛的影響

如表3所示，胃瘍寧丸低劑量可明顯增加藥后30，120min痛閾提高百分率（P＜0.01），中、高劑量明顯增加藥后30，60，120 min痛閾提高百分率（P＜0.01）；阿斯匹林亦明顯增加藥后30，60，120 min痛閾提高百分率（P＜0.01）。

表3 胃瘍寧丸對熱刺激所致小鼠疼痛的影響（±s）

表3 胃瘍寧丸對熱刺激所致小鼠疼痛的影響（±s）

痛閾提高百分率/% 30 min 60 min 120 min對照 — 10 5.18±2.67 5.17±3.29 4.11±1.74阿斯匹林 0.017 10 26.42±8.282)10.92±6.972)16.08±7.652)組別 劑量/ g．kg-1動物數(shù)/只

胃瘍寧丸低劑量 0.79 10 17.95±5.852)7.50±4.14 8.92±4.412)中劑量 1.58 10 19.96±9.392)11.40±5.502)14.73±7.432)高劑量 3.16 10 13.50±4.292)16.96±3.822)6.56±1.472)

3.4 對小鼠壓足致痛的影響

如表4所示，胃瘍寧丸低、中、高劑量以及阿斯匹林均可明顯增加藥后30，60，120 min痛閾提高百分率（P＜0.01）。

3.5 對醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響

如表5所示，胃瘍寧丸各劑量組對醋酸所致小鼠毛細(xì)血管通透性增高無明顯的影響（P＞0.05）；阿斯匹林對醋酸所致小鼠毛細(xì)血管通透性增高有抑制作用（P＜0.05）。

?胃瘍寧丸

3.6 對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響

表6結(jié)果提示，胃瘍寧丸中、高劑量明顯降低二甲苯所致小鼠耳腫脹（P＜0.05～0.01），阿斯匹林亦可降低二甲苯所致小鼠耳腫脹（P＜0.05）。

組別 劑量/g．kg-1動物數(shù)/只 腫脹度對照 — 10 14.62±4.95阿斯匹林 0.017 10 10.47±1.881)胃瘍寧丸低劑量 0.79 10 12.20±3.82中劑量 1.58 10 9.50±3.081)高劑量 3.16 10 8.01±2.902)

3.7 對大鼠棉球肉芽腫的影響

表7結(jié)果提示，胃瘍寧丸低、中、高劑量以及地塞米松均能使大鼠棉球肉芽腫的肉芽腫系數(shù)明顯減少（P＜0.01）。

表7 胃瘍寧丸對大鼠棉球肉芽腫的影響（±s）

表7 胃瘍寧丸對大鼠棉球肉芽腫的影響（±s）

?

4 討論

炎癥，是指具有血管系統(tǒng)的活體組織對損傷因子的防御性反應(yīng)，伴有紅、腫、熱、痛的表現(xiàn)。炎癥作為常見而又重要的病理過程，與多種疾病有著密切的聯(lián)系，如肺炎、腎炎、肝炎等。胃瘍寧丸由白術(shù)、烏藥、山藥、白及、青皮、高良姜、赤芍、仙鶴草等藥物組成。方中藥物具有補(bǔ)氣健脾、行氣止痛、降氣止嘔之功，多用于慢性胃炎、消化性潰瘍等多種胃腸性疾病。而胃腸性疾病多與炎癥、痛疼相伴。全面、系統(tǒng)地考察胃瘍寧丸抗炎鎮(zhèn)痛的藥效有助于了解其抗慢性胃炎、抗消化性潰瘍的藥理學(xué)機(jī)制及作用特點(diǎn)，有利于合理地、科學(xué)地選用藥物。本課題著重對胃瘍寧丸抗炎、鎮(zhèn)痛之功進(jìn)行了藥效學(xué)評價，為臨床選用提供科學(xué)依據(jù)。

在鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中多用醋酸扭體法、甲醛致痛法、熱刺激法、壓足致痛法等多種方法，且各種方法特點(diǎn)不一，合理選用多種方法，有助綜合評價藥物的鎮(zhèn)痛功效。甲醛致痛法中第一時相反應(yīng)主要是直接刺激C纖維，第二時相反應(yīng)則有炎癥機(jī)制參與，為慢性疼痛模型[9]。胃瘍寧丸高劑量可顯著降低第二時相中小鼠的舔左后足累積時間，表明胃瘍寧丸具有減輕炎癥所引起慢性疼痛。熱刺激法多用于評價中樞鎮(zhèn)痛藥，胃瘍寧丸各劑量組的痛閾提高百分率與對照組相比具有顯著性的提高。壓足致痛法多用于評價中樞鎮(zhèn)痛藥，且可用于分析藥物的時效關(guān)系。胃瘍寧丸各劑量組的痛閾提高百分率較對照組具有顯著性的提高，且隨時間延長逐漸升高，表明胃瘍寧丸鎮(zhèn)痛作用具有長效、穩(wěn)定的特點(diǎn)。

在抗炎實(shí)驗(yàn)部分，采用小鼠毛細(xì)管通透性實(shí)驗(yàn)、小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)、大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)評價胃瘍寧丸抗急性炎癥、亞急性炎癥的藥效。與對照組相比，胃瘍寧丸中、高劑量能顯著性降低二甲苯所致小鼠的耳廓腫脹度；各劑量能顯著性降低大鼠肉芽腫系數(shù)。結(jié)果表明，胃瘍寧丸可減輕炎癥初期局部組織的腫脹并緩解由此帶來的疼痛，此外還能降低炎癥后期的組織增生。

綜上所述，胃瘍寧丸具有良好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，不僅可以治療炎癥所引的胃腸性疾病，且可以減輕炎癥所引的多種疼痛，減輕患者的因疾病所帶來的不適。本課題只涉及胃瘍寧丸抗炎鎮(zhèn)痛的藥效學(xué)評價，其深入的機(jī)制研究將在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)展開。

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（責(zé)任編輯：陳思敏）

Research on anti-inflammatory and analgesic effects of Weiyangning Pill/

HUANG Si-ming LIANG Zhi-jian, CAO Hong-ying, WU Qing-he, HUANG Ping//(Pharmacy School, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, Guangdong)

Objective:To study the anti-infammatory and analgesic effects of Weiyangning Pill.Method:Mouse writhing induced acetic acid, and pain in mouse caused by methanol, heat or press method were used to value the analgesic effects. Capillaries permeability increase induced by acid, xylene induced mouse ear swelling and cotton pellet induced granuloma formation in rats were used to value the anti-infammatory effects of Weiyangning Pill.Result:All dose had no effect on the mouse writhing induced by acetic acid. The high dose of Weiyangning Pill could reduce the mouse's cumulative time of licking foot in the second phase (P＜0.05). All dose could improve the increment percentage of analgesic threshold induced by heat or press (P＜0.01). The middle and high dose can reverse the increase of ear swelling caused xylene (P＜0.05～0.01). All dose could reduce the degree of rats granuloma (P＜0.01).Conclusion:Weiyangning Pill has good effect of anti-infammatory and analgesic.

Weiyangning Pill; anti-infammatory; analgesic

R 285.5

A

1674-926X(2015)02-018-04

廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006

黃思明，碩士，主要從事中藥藥理研究

Tel:1392957334 Email: huangsiming198@163.com

黃萍，碩士，教授，主要從事中藥藥理研究

Tel:13697436601 Email:hping331@126.com

2014-12-22