壯骨止痛方無水乙醇提取A部位對去勢雌鼠骨質疏松模型的療效分析

劉長明 張征

（承德市食品藥品檢驗檢測中心，河北 承德 067000）

壯骨止痛方無水乙醇提取A部位對去勢雌鼠骨質疏松模型的療效分析

劉長明 張征

（承德市食品藥品檢驗檢測中心，河北 承德 067000）

目的：通過建立去卵巢雌鼠骨質疏松模型，研究壯骨止痛方無水乙醇提取A部位對骨質疏松癥的療效。方法：選取250 g左右的SD雌性大鼠60只，按體質量隨機分為正常組、假手術組、模型組、壯骨止痛方組與壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組。各組均于5 d拆線后給藥，連續13周。從骨密度、骨生物力學、血清雌激素（E2）、甲狀旁腺激素（PTH）、降鈣素（CT）、骨鈣素（BGP）水平及光鏡下骨小梁形態方面對其療效進行評價。結果：壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組大鼠的股骨密度與腰椎骨密度顯著高于模型組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組大鼠的脛骨最大應力與脛骨最大抗彎強度較模型組顯著增強，差異具有統計學意義（P＜ 0.05）。與模型組大鼠相比，壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組的血清E2有顯著增高的趨勢，而PTH，CT，BGP顯著下降，差異具有統計學意義（P＜ 0.05）。結論：壯骨止痛方無水乙醇提取A部位可有效改善骨韌性，提高骨骼抵抗外力沖擊的能力，對于骨質疏松癥具有較好療效。

壯骨止痛方無水乙醇提取A部位；骨質疏松；療效

骨質疏松癥（osteoporosis，OP）是指以骨量減少、骨組織微細結構破壞為主要特征，骨礦物質和骨基質比例減少，導致骨骼脆性增加的一種全身性疾病。臨床主要表現為腰背疼痛、易發生骨折等[1]。據統計我國目前女性原發性骨質疏松癥的發病率已高達90.48%，尤其多發于絕經后婦女。因此找到一種有效預防及治療女性骨質疏松癥的途徑，已成為當前亟需解決的課題[2]。壯骨止痛方為傳統方劑，具有補腎氣、溫腎陽、壯骨止痛的功效[3]。本研究對壯骨止痛方中無水乙醇提取A部位對去勢雌鼠骨質疏松模型的骨質影響進行實驗分析，以探討后者對于骨質疏松癥治療中的臨床價值。現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

3月齡SD雌性大鼠60只，體質量均在250 g左右，由××省醫學實驗動物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 適應性飼養1 w，隨機分出空白組和假手術組各15只，模型組、壯骨止痛方組、壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組各10只。除空白組外，其余大鼠均用2%的戊巴比妥鈉麻醉，假手術組僅在卵巢周圍切除相應質量的脂肪，其余摘除雙側卵巢，縫合傷口。術后連續3 d肌注青霉素（4萬U/d）。飼養室溫為23～ 25℃，相對濕度為50%～70%。

1.2.2 給藥方法 各組均于5 d拆線后給藥，ig，qd，連續13 w。假手術組、空白組和模型組相應體積冷開水和植物油ig，qd；其余各組相應藥物（水相6 m L/kg；油相4 m L/kg）ig，qd。壯骨止痛方相當于生藥13.2 g/kg，ig，qd，無水乙醇提取A部位0.12 g/kg，ig，qd。

1.2.3 檢測指標及方法 ①13 w后所有大鼠均腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉。取右側股骨、第2～ 4腰椎，以Unigamma骨密度儀檢測骨密度。②取左側脛骨作骨生物力學檢測，包括骨最大彈性應力、最大抗彎強度等指標。③腹部切口，分離腹主動脈，用負壓采血管采血，離心取血清，采用放射免疫法檢測雌激素（E2），甲狀旁腺激素（PTH），降鈣素（CT），骨鈣素（BGP）等。④光鏡下觀察左側股骨骨小梁形態學變化。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 骨密度檢測比較

股骨密度檢測結果顯示，空白組與模型組比較，t=19.96，P＜0.001；假手術組與模型組比較，t=9.69，P＜0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=14.11，P＜0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=10.27，P＜0.001。腰椎骨密度檢測結果顯示，空白組與模型組比較，t=11.70，P＜0.001；假手術組與模型組比較，t= 15.54，P＜ 0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t= 10.13，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=9.56，P＜ 0.001。壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組大鼠的股骨密度與腰椎骨密度顯著高于模型組，差異具有統計學意義（P＜ 0.05）；空白組與模型組比較，差異具有統計學意義（P＜ 0.05）。見表1。

2.2 骨生物力學檢測比較

脛骨最大應力檢測結果顯示，空白組與模型組比較，t=9.19，P＜ 0.001；假手術組與模型組比較，t=9.44，P＜0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=13.77，P＜0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取 A部位組與模型組比較，t=13.32，P＜0.001。脛骨最大抗彎強度檢測結果顯示，空白組與模型組比較，t=7.84，P＜0.001；假手術組與模型組比較，t=6.25，P＜0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=7.39，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=9.86，P＜0.001。壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組大鼠的脛骨最大應力與脛骨最大抗彎強度較模型組顯著增強，差異具有統計學意義（P＜ 0.05）。空白組與模型組比較差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表1 骨密度檢測比較

表2 骨生物力學檢測比較

2.3 血清E2，PTH，CT，BGP水平比較

血清E2檢測結果顯示，空白組與模型組比較，t=12.77，P＜ 0.001；假手術組與模型組比較，t=20.61，P＜0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=8.57，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=5.67，P＜ 0.001。PTH檢測結果顯示，空白組與模型組比較，t=7.58，P＜0.001；假手術組與模型組比較，t= 8.82，P＜0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=7.20，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=4.13，P＜ 0.001。CT檢測結果顯示，空白組與模型組比較，t=4.78，P＜ 0.001；假手術組與模型組比較，t=2.36，P=0.028；壯骨止痛方組與模型組比較，t=4.93，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=6.19，P＜0.001。BGP檢測結果顯示空白組與模型組比較，t=5.17，P＜ 0.001；假手術組與模型組比較，t=4.59，P＜ 0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=3.65，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t= 3.26，P=0.004。與模型組大鼠相比，壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組的血清E2增高，而PTH，CT，BGP顯著下降，差異具有統計學意義（P＜0.05）。空白組與模型組比較，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 血清E2，PTH，CT，BGP水平比較

3 討論

骨質疏松癥最突出的臨床表現即為骨脆性增加導致骨折風險增高[4]。女性在絕經后由于雌激素水平低下，大量骨礦物質丟失，發生骨小梁變細、穿孔甚至消失等退行性改變，骨體積下降[5-7]。同時骨礦物含量的減少也造成了骨小梁本身材料性能的改變，骨小梁正常的生物力學結構和性能遭到破壞，強度下降，特定的承載部位如股骨頸等無法承受正常載荷，輕微外力作用即可發生骨折[8-10]。

壯骨止痛方無水乙醇提取A部位為補骨脂和女貞子的提取物。補骨脂具有較強的雌激素作用[11]。有文獻報道，補骨脂95%乙醇提取物具有增強成骨細胞的增殖以及堿性磷酸酶（ALP）活性的作用，可明顯增進成骨細胞的生長以及ALP的分泌，從而發揮有效的防治骨質疏松的作用[12-13]。此外女貞子具有促成骨細胞增殖作用[14]。研究發現，女貞子在促成骨細胞增殖方面作用比淫羊藿更強，提示以女貞子為代表的補腎陰類藥物對骨質疏松癥同樣有較好的治療作用[15]。

本實驗中所采用的由雌鼠去勢造成絕經后骨質疏松癥模型的方法已被國內外所公認。實驗結果顯示，與空白組和假手術組相比，模型組大鼠的股骨和腰椎骨密度顯著下降（P＜ 0.05），血清學檢測血清E2水平亦較正常組與假手術組顯著降低（P＜ 0.05），說明絕經后骨質疏松癥病理模型造模成功。給藥后，與模型組比較，壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組的骨密度顯著增加（P＜0.05），同時脛骨最大應力與脛骨最大抗彎強度顯著增強（P＜ 0.05），說明壯骨止痛方無水乙醇提取A部位增加了大鼠的骨量，提高了骨的機械性能，增強了骨的承載能力，提高了骨的生物力學性能和骨強度。此外與模型組大鼠相比，壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組的血清E2有顯著增高的趨勢，而PTH，CT，BGP顯著下降，提示壯骨止痛方無水乙醇提取A部位具有促進骨形成，降低骨轉換，抑制骨吸收的作用。

光鏡下顯示，正常組與假手術組大鼠骨小梁分布均勻，梁髓比正常；模型組骨小梁稀疏，骨髓腔擴大，梁髓比明顯下降。壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組骨小梁密度分布比較均勻，梁髓比基本正常，鏡下可見成骨細胞，提示壯骨止痛方無水乙醇提取A部位能有效逆轉骨質疏松模型雌大鼠的骨組織病理改變。

總之，壯骨止痛方無水乙醇提取A部位可有效增加骨密度和骨強度，其作用機制或許在于發揮雌激素樣作用，可在一定程度上改善由于雌激素缺乏所造成的激素代謝紊亂現象，通過調節細胞因子起到降低轉換，促進骨形成的作用，從而增加去卵巢骨質疏松大鼠的骨密度和骨強度。文獻報道指出[16]，無水乙醇提取 A部位已被證實為是壯骨止痛方的主要藥效部位，除此之外，壯骨止痛方還含有無水乙醇提取B部位、石油醚提取A部位、水提A部位、水提B部位、乙酸乙酯提取A部位等有效部位。

綜上所述，證實壯骨止痛方無水乙醇提取A部位可有效改善骨韌性，提高骨骼抵抗外力沖擊的能力，對于骨質疏松癥具有較好療效。

[1] 楊軍，張小莉，莫新民.基于蛋白質組學壯骨止痛方治療骨質疏松癥的作用機理研究[J].北京中醫藥大學學報，2013，36（12）：817-820.

[2] 甘國興，莫新民，李勁平，等.壯骨止痛方藥效部位的篩選及其對骨質疏松雌鼠骨代謝相關激素的影響[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（15）：126-130.

[3] 李勁平，曾英，雷曉明，等.壯骨止痛膠囊抗實驗性絕經后骨質疏松作用的三維組學分析[J].中國中藥雜志，2014，39（16）：3203-3207.

[4] 甘國興，莫新民，李勁平，等.壯骨止痛方無水乙醇提取A部位對去勢雌鼠骨質疏松的療效及機制研究[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（17）：147-150.

[5] 李勁平，林清，王小靜，等.壯骨止痛膠囊A部分抗骨質疏松有效成分研究[J].時珍國醫國藥，2013，24（5）：1049-1051.

[6] 章才干.壯骨止痛膠囊治療骨質疏松癥40例[J].中醫雜志，2013，54（16）：1417-1418.

[7] 楊軍，張小莉，莫新民.從蛋白質組學研究壯骨止痛方治療骨質疏松癥作用機理[J].遼寧中醫藥大學學報，2013，15（11）：35-37.

[8] 張小君.壯骨止痛方Ⅱ對實驗性骨質疏松癥的療效及作用機理研究[D].湖南：湖南中醫藥大學，2013.

[9] 栗會敏.壯骨止痛膠囊B部分無水乙醇部位抗骨質疏松活性成分研究[D].湖南：中南大學，2012.

[10] 林清.壯骨止痛膠囊A部分石油醚部位抗骨質疏松活性成分研究[D].湖南：中南大學，2012.

[11] 李素萍.骨質疏松動物模型的研究現狀[J].中國組織工程研究與臨床康復，2011，15（20）：3767-3770.

[12] 劉仕杰.壯骨止痛方抗骨質疏松癥有效成分篩選及初步機理研究[D].湖南：湖南中醫藥大學，2012.

[13] 王春嶺，馮申啟，孫立明，等.椎體成形術并補腎壯骨湯對骨質疏松性椎體壓縮骨折立線及穩定性的影響[J].中國醫藥科學，2012，2（5）：93，114.

[14] 楊軍，張小莉，劉仕杰，等.齊墩果酸對去卵巢骨質疏松癥雌鼠的療效及機理研究[J].時珍國醫國藥，2013，24（7）：1564-1565.

[15] 李勁平，林清，莫新民，等.柚皮苷對絕經后骨質疏松癥大鼠骨生物力學和骨密度的影響[J].現代醫藥衛生，2012，28（5）：683-684.

[16] 張國民.壯骨止痛方醇提A部位對去勢雌鼠骨質疏松癥雌激素相關因子的調節作用[D].湖南：湖南中醫藥大學，2011.

Curative Effects Analysis of Zhuangguzhitong Formula Anhydrous Ethanol Extract A Position on Osteoporosis M odel of Ovariectom ized Female Rats

Liu Changm ing，Zhang Zheng （Chengde Food and Drug Inspection and Testing Center,Hebei Chengde 067000, China）

Objective:To study the curative effects of osteoporosis by zhuangguzhitong formula anhydrous ethanol extract A position through building an osteoporosis model of ovariectom ized female rats.Methods:Sixty SD female rats about 250 g each were selected and divided into normal group,control group,model group,zhuangguzhitong formula group,and zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A group based on the rat weights.All groups were given medicines 5 days later after taking out stitches and lasted for 13 weeks.The curative effects were evaluated from bone m ineral density,bone biomechanics,serum levels of estrogen （E2）,parathyroid hormone（PTH）,calcitonin（CT）,osteocalcin（BGP）levels,and trabecular bone morphology.Results:The bone mineral density of zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A group was significantly higher than those of model group,w ith statistically significant difference （P＜ 0.05）.The maximum stress and bending resistance of the shinbone of zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A group was significantly stronger than those of model group,w ith statistically significant difference （P＜ 0.05）.Compared w ith the modelgroup,E2of zhuangguzhitong and anhydrous ethanol extract A group was significantly higher,while PTH,CT,and BGP were significantly lower,w ith statistically significant difference （P＜ 0.05）.Conclusion:Zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A position can effectively improve the bone toughness,improve the ability of bone to resist external shocks and proved a good curative effect on osteoporosis.

Zhuangguzhitong Formula Anhydrous Ethanol Extract A Position；Osteoporosis；Curative Effect

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.07.007

2015-03-17）

劉長明，女，主管藥師。研究方向：藥理藥效學。E-mail：cdliuchangm ing@126.com