HPLC測(cè)定紫丁香葉中紫丁香苷的含量

章春宇莊程商量

（1長(zhǎng)春市健康教育中心，吉林 長(zhǎng)春130021；2長(zhǎng)春市朝陽(yáng)區(qū)衛(wèi)生局衛(wèi)生監(jiān)督所；3吉林省腫瘤醫(yī)院）

HPLC測(cè)定紫丁香葉中紫丁香苷的含量

章春宇1莊程2商量3

（1長(zhǎng)春市健康教育中心，吉林 長(zhǎng)春130021；2長(zhǎng)春市朝陽(yáng)區(qū)衛(wèi)生局衛(wèi)生監(jiān)督所；3吉林省腫瘤醫(yī)院）

目的：建立紫丁香葉中紫丁香苷含量的高效液相檢測(cè)方法。方法：采用Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-水（15∶85）；檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm；柱溫：30℃；流速：0.8 m L/m in。結(jié)果：紫丁香苷進(jìn)樣量在0.144 48～0.722 4μg/mL范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 99），平均加樣回收率為100.00%，RSD=1.14%（n=6）。結(jié)論：該方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好，可用于紫丁香葉的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；紫丁香苷；紫丁香葉；含量測(cè)定

紫丁香葉是可藥用的丁香葉中的一種，為木犀科植物紫丁香（Syringa oblata Lindl.）的干燥葉。東北地區(qū)分布極廣，主要用其葉，丁香葉的藥效已得到肯定，是一種理想的廣譜抗菌藥，以其為原料生產(chǎn)的炎立消片劑和炎立消膠囊劑被《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》[1-2]所收載，主要治療痢疾、急性黃疸型肝炎等，該藥材的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《黑龍江省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》（2001年版），由于歷史原因，該標(biāo)準(zhǔn)只有簡(jiǎn)單的顯微鑒別及薄層色譜鑒別（TLC），尚無(wú)含量測(cè)定，為進(jìn)一步提高藥材的質(zhì)量控制水平，本研究參考了有關(guān)文獻(xiàn)[3-5]，以紫丁香苷為指標(biāo)，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定其含量，為丁香葉藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高積累實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 儀器與試藥

島津LC-2010A高效液相色譜儀；試劑：甲醇為色譜純，水為純化水，鑒別所用試劑均為分析純，紫丁香苷對(duì)照品（批號(hào)：111574-200201，購(gòu)自原中國(guó)藥品生物制品檢定所）。紫丁香葉（收集于吉林省通化市，經(jīng)吉林省藥檢所鑒定為紫丁香葉）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件

色譜柱：Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；甲醇-水（15∶85）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm；柱溫：30℃；流速：0.8 m L/m in。理論塔板數(shù)以紫丁香苷峰計(jì)算，應(yīng)不得低于3 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精密稱取紫丁香苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 m L含40μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液取本品，粉碎，過(guò)3號(hào)篩，混勻，取10 g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷50 m L，回流提取至無(wú)色，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，置具塞錐形瓶中，加入70%甲醇溶液50 m L，回流提取2小時(shí)，濾過(guò)，濾渣用70%甲醇溶液20 m L洗滌，合并濾液與洗液，蒸干，殘?jiān)铀?0 m L使溶解，通過(guò)處理好的大孔吸附樹(shù)脂柱（內(nèi)徑1.5 cm，高15 cm）用水200 m L洗脫，棄去水液，再用20%乙醇洗脫150 m L，棄去20%乙醇洗脫液，繼用70%乙醇洗脫，收集洗脫液100m L，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移至10 m L量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。

2.3 溶劑色譜峰干擾試驗(yàn)

精密吸取甲醇10μL，注入液相色譜儀，在與紫丁香苷色譜峰相應(yīng)保留時(shí)間處，溶劑色譜峰無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

取紫丁香苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 m L含0.072 24 mg/m L的溶液。精密吸取上述溶液2，4，6，8，10μL，分別注入液相色譜儀。以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)得回歸方程為：

Y=3 169 624.2X－5 533.7（r=0.999 9）；

表明紫丁香苷進(jìn)樣量在0.144 48～0.722 4μg/m L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液（序號(hào) 1）10μL，分別在0，8，13，26，31 h，照2.2方法測(cè)定，按紫丁香苷峰面積計(jì)算，RSD為2.75%，結(jié)果未發(fā)生明顯變化，表明供試品溶液穩(wěn)定。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一供試品溶液（序號(hào)1），連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積積分值RSD為0.32%，結(jié)果表明，本方法所用儀器精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品（序號(hào)1）6份，依法獨(dú)立測(cè)定，結(jié)果紫丁香苷平均含量為0.003 7%，RSD為1.38%。

2.8 回收率試驗(yàn)

取經(jīng)同法測(cè)定的已知含量的樣品（序號(hào)1）6份，每份5 g，精密稱定，精密加入紫丁香苷對(duì)照品適量，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表2 紫丁香葉回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定樣品3批，含量分別為0.003 6%，0.004 4%，0.003 2%。

3 討論

3.1 測(cè)定成分選擇

丁香屬植物主要含有環(huán)烯醚萜、苯丙素酚、黃酮、苯乙醇和生物堿類等成分，紫丁香苷和丁香苦苷為其代表性成分，丁香苦苷含量高于紫丁香苷，但丁香苦苷國(guó)家無(wú)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，故以紫丁香苷為指標(biāo)，采用HPLC測(cè)定其含量。

3.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇通過(guò)紫外掃描及二極管陣列檢測(cè)器（DAD）檢測(cè)，紫丁香苷在220 nm和265 nm處有最大吸收，由于220 nm處測(cè)定有干擾，故選擇265 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 色譜柱的選擇

本試驗(yàn)考察了Kromasil C18（4.6mm×250mm，5μm)柱；Agilent-Tc C18（4.6 mm×250 mm，5μm)柱；Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5μm）柱，只有Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5μm）柱峰形正態(tài)，分離良好，說(shuō)明該物質(zhì)對(duì)色譜柱有一定選擇性。

3.4 提取溶劑的選擇

本試驗(yàn)考察了甲醇和70%甲醇兩種溶劑，結(jié)果70%甲醇含量較高，故選擇70%甲醇作溶劑。

本試驗(yàn)中各項(xiàng)測(cè)定結(jié)果說(shuō)明建立的紫丁香葉中紫丁香苷的HPLC測(cè)定方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性良好，可用于紫丁香葉的質(zhì)量控制。

[1] 衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[M].中藥成方制劑第九冊(cè).北京：人民衛(wèi)生出版社，1990.

[2] 衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)[M].中藥成方制劑第二十冊(cè).北京：人民衛(wèi)生出版社，1990.

[3] 張蓮秀.丁香葉的研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2009，21（6）：20-23.

[4] 楊紅.刺五加膠囊中紫丁香苷含量的HPLC測(cè)定[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013，24（2）：404-405.

[5] 張崇禧，張瑩瑩，田芯，等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地刺五加中紫丁香苷的含量[J].中成藥，2008，30（11）：1648-1651.

Content Determ ination of Syringin in Lilac Leaves by HPLC

Zhang Chunyu1，Zhuang Cheng2，Shang Liang3（1 Health Education Institute of Changchun City，Jilin Changchun 130021，China；2 Agency for Public Health Inspection of Chaoyang Health Bureau of Changchun City；3 Tumor Hospital of Jilin Province）

Objective：To develop a method to determ ine the content of syringin in lilac leaves by HPLC.Methods：Apollo C18（250 mm×4.6 mm，5μm）was adopted w ith mobile phase of methanol-water（15∶85），the detection wavelength was at 265 nm，the column temperature was at 30℃ and the flow rate was 0.8 mL/min.Results：A good linear correlation of syringin was observed w ithin the range of 0.144 48～ 0.722 4μg/m L （r= 0.999 99）and the average recovery was 100.00%w ith RSD 1.14% （n=6）.Conclusion：The method is convenient，sensitive and accurate.It can be used for the quality control of lilac leaves.

HPLC；Syringin；Lilac Leaves；Content Determ ination

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.03.007

2014-12-29）

章春宇，女，副主任藥師。研究方向：藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail：526416900@qq.com