UPLC-MS/MS檢測中藥中非法添加的抗病毒化學成分

★　張若良　許江紅　黃偉波　(贛州市食品藥品檢驗所　江西 贛州 341000)

UPLC-MS/MS檢測中藥中非法添加的抗病毒化學成分

★張若良許江紅黃偉波(贛州市食品藥品檢驗所江西 贛州 341000)

摘要：目的：建立UPLC-MS/MS方法檢查中藥制劑中非法添加抗病毒化學成分阿昔洛韋、金剛烷胺及利巴韋林。方法：色譜柱為ACQUITY UPLC BEH-C18(2.1mm×50mm，1.7μm)，梯度洗脫：流動相A為10mmol/L的乙酸銨溶液，流動相B為甲醇，流速為0.3 mL/min。正離子掃描，掃描方式采用全掃描一級質譜、全掃描二級質譜，質荷比范圍50～500。結果：發現一種中藥摻有阿昔洛韋。結論：本法簡便、快速、準確，可用靈敏的檢出中藥中添加阿昔洛韋、金剛烷胺及利巴韋林等化學成分。

關鍵詞：UPLC-MS/MS；中藥；非法添加；抗病毒化學成分

阿昔洛韋、利巴韋林、金剛烷胺是臨床常用抗病毒化學制劑，具有療效好，價格低等特點，近年檢測中發現有部分中藥中違法添加上述成分的情況，患者在不知情的情況下長期服用可能對身體造成極大危害。筆者在工作中發現很少相關方法對上述非法添加成分進行檢驗，為此，建立UPLC-MS/MS方法，快速的對添加成分進行質譜定性。

1儀器與試藥

Waters XEVO TQD液質色譜-三重四極桿質譜聯用儀(配有ESI離子源)；XS205DU型電子天平；阿昔洛韋對照品(批號140630-200602、金剛烷胺對照品(批號100426-201002)、利巴韋林對照品(批號140629-200202)均購自中國藥品生物制品檢定研究院；樣品A、B均為監督抽驗樣品；甲醇為色譜純，水為一級水，醋酸銨為分析純。

2方法與結果

2.1液相色譜條件色譜柱：ACQUITY UPLC BEH-C18(2.1mm×50mm，1.7μm)，流動相A為10mmol/L的乙酸銨溶液，流動相B為甲醇，流量0.3 mL/min；柱溫40℃；進樣量5μL；梯度洗脫見表1。

2.2質譜條件電噴霧離子源(ESI)；毛細管電壓：4kv；離子源溫度：350℃；脫溶劑流量：650L/H；錐孔電壓：阿昔洛韋(28V)、利巴韋林(18V)、金剛烷胺(42V)，碰撞能量：阿昔洛韋(28V)、利巴韋林(20V)、金剛烷胺(30V)；正離子檢測，掃描方式采用全掃描一級質譜、全掃描二級質譜，質量數范圍：50-500。

表1　梯度洗脫程序

2.3溶液的制備

2.3.1對照品溶液制備精密稱取阿昔洛韋對照品10.01mg、利巴韋林對照品10.12mg與金剛烷胺對照品10.28mg，同置50mL量瓶中，加溶劑[流動相A-流動相B(90:10)，下同]溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL置50mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過濾，即得。

2.3.2供試品溶液制備取一次服用量樣品(固體樣品研細)，置50mL量瓶中，加溶劑適量，超聲15min，放冷，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液5mL置50mL量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.22μm濾膜過濾，即得。

2.4樣品檢查結果取上述對照品溶液和供試品溶液，分別進樣5μL，記錄色譜圖、一級質譜和二級質譜，結果樣品A中檢出阿昔洛韋，樣品B未檢出三種成分，見圖1～4。

圖1　提取離子色譜圖

圖2　利巴韋林質譜圖及裂解示意圖

2.5質譜分析及定性檢測采用正離子檢測方式對混合對照溶液及供試品溶液進行一級質譜全掃描、二級質譜全掃描，得到各對照品的一級質譜和二級質譜，再提取供試品溶液中與對照溶液相同保留時間峰的質譜信息，與對照品溶液相應的質譜圖比較定性，相同保留時間處一級質譜、二級質譜相同的為檢出，相同保留時間無色譜峰或一級質譜、二級質譜任一不同為未檢出。

圖3　阿昔洛韋質譜圖及裂解示意圖

質譜參考圖譜及裂解機制如下。

圖4　金剛烷胺質譜圖及裂解示意圖

3討論

3.1 本法所建立的3種抗病毒化學成分為臨床常用的口服化學藥，口服劑量較大，所以本文未做檢出限的研究，本文方法通過LC-MS/MS對添加的上述三種化學成分進行保留時間、一級質譜及二級質譜三重定性，專屬性高。

3.2試驗中，發現上述三種成分均容易加氫形成[M+H]+離子峰，且在二級質譜中可形成較豐富的碎片離子，所以本文選擇正離子檢測方式進行測定。

3.3在常規的HPLC-UV中，因利巴韋林屬弱保留成分，在色譜中很難與其它成分有效分離，且需要

使用專用的色譜柱進行測定；而金剛烷胺紫外無吸收，在復雜的中藥基底中利用化學分析方法測定含量很難實現。筆者在進行定性研究中，同時對定量方法做了進一步的研究，方法如下：液相條件同2.1項下，質譜條件采用多反應監測模式(MRM)，離子對及碰撞能量分別為：利巴韋林：245→96(36V)、245→113(6V)，阿昔洛韋：226→152(12V)、226→135(28V)，金剛烷胺：152→79(30V)、152→93(30V)。所用方法的專屬性、精密度、線性、重現性及準確度滿足方法學要求，需要定量時可根據樣品的含量選擇外標曲線法或外標一點法測定。

參考文獻

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Determination of Antiviral Chemical Composition Illegally Added into Chinese Patent Medicine By UPLC-MS/MS

ZHANG Ruo-liang，XU Jiang-hong，HUANG Wei-bo

GanzhouProvincialInstituteforFoodandDrugContral,Ganzhou341000,China.

Abstract:Objective: A UPLC-MS/MS method is established for the determination of illegally added antiviral commonly used chemical compounds aciclovir,amantadin and ribavirin in Traditional Chinese Medicine Preparation. Method: A ACQUITY UPLC BEH-C18(2.1mm×50mm, 1.7μm) column was used with the gradient elution of 10 mmol/L ammonium acetate and methol as the mobile phase and the flow rate was 0.3 mL/min. The electrospray ionization source in positive ion mode was used for multiple reaction monitoring mode with m/z 50～500. Results:Aciclovir were found in one kind of a traditional drug with the method.Conclusion:The method was convenient, sensitive and accurate,it could be used for quality control in illegally added aciclovir，amantadin and ribavirin.

Key words:UPLC-MS/MS;Chinese Patent Medicine;Illegally Added;Antiviral Chemical Composition

收稿日期：(2015-06-06)編輯：翟興英

中圖分類號：R284.1

文獻標識碼：B