可吸收防粘連液對大鼠實驗性腹壁粘連的抑制作用*

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可吸收防粘連液對大鼠實驗性腹壁粘連的抑制作用*

網絡出版時間：2015-03-19網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150319.1030.032.html

付凌云1,2, 劉小紅1,2, 文波1,2, 肖可3, 徐旖旎1, 沈祥春1,2**

(1.貴陽醫學院 天然藥物資源優效利用重點實驗室， 貴州 貴陽550004； 2.貴陽醫學院 中藥藥理教研室， 貴州 貴陽550004； 3.貴州金玖生物技術有限公司, 貴州 貴陽550005)

[摘要]目的： 觀察可吸收防粘連液對大鼠實驗性腹壁粘連的抑制作用。方法： 60只SD大鼠隨機分為生理鹽水組(A組)、醫用透明質酸鈉凝膠組(B組)、可吸收防粘連液組(C組)3組，每組20只，制作大鼠腹壁缺損/盲腸刮傷模型，在造模后第7和第14天處死大鼠，觀察粘連分級積分、解剖學、病理組織學改變。結果： 可吸收防粘連液顯著抑制大鼠實驗性腹壁粘連，降低粘連分級積分；減少炎細胞浸潤和炎性肉芽組織增生，漿膜層組織變性較輕。結論： 可吸收防粘連液在一定程度抑制術后粘連。

[關鍵詞]可吸收防粘連液； 大鼠, Sprague-Dawley； 模型,動物； 粘連； 腹壁； 病理學

腹部手術后約93%的患者發生腹腔粘連，可導致小腸梗阻、慢性腹痛、不孕不育等并發癥，嚴重影響了患者的生活質量【1-2】。改善術后粘連成為當前醫學研究的焦點之一。防術后粘連的藥物主要是通過減少炎癥反應，建立相鄰創面的屏障來達到預防粘連的作用。可吸收防粘連液是從植物中分離制備的防止術后粘連的制劑，本研究通過復制大鼠腹壁粘連模型，觀察可吸收防粘連液防手術后粘連的療效，為臨床應用提供方法和實驗基礎。

1材料與方法

1.1　實驗動物與分組

(Sprague-Dawley)SD大鼠60只，體質量180～220 g，雌雄各半，Ⅱ級實驗動物，由貴陽醫學院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK(黔)2012-001。按體質量隨機均分為生理鹽水組(A組)、醫用透明質酸鈉凝膠(B組)、可吸收防粘連液組(C組)，每組20只大鼠。

1.2　藥品與試劑

可吸收防粘連液由貴州金玖生物技術有限公司提供，生產日期20130701，批號2130701，4 ℃保存。醫用透明質酸鈉凝膠由上海昊海生物科技股份有限公司生產，生產日期20120811，批號120817，特性粘數≥1 600 cm3/g，儲存條件為避光密封25 ℃保存。水合氯醛由國藥集團化學試劑有限公司，批號20090724。

1.3　模型復制及給藥

大鼠(手術前禁食12 h)腹腔內注射水合氯醛300 mg/kg 麻醉，中下腹正中縱行切口，長4 cm，距切口約1 cm處銳性切除腹膜及大部分肌層，造成面積約2 cm×1 cm 的腹壁缺損，15 號手術刀片在盲腸對系膜側漿膜上單向輕刮60次，使盲腸漿膜下出現瘀斑，刮傷盲腸面積約2 cm×1 cm，將刮傷盲腸與腹壁缺損處兩者相對放置，使其相互接觸，按分組將不同藥物涂布于腹壁缺損及盲腸刮傷面。A組為1.5 mL生理鹽水，B組為1.5 mL醫用透明質酸鈉凝膠，根據臨床使用劑量C組按照大鼠體質量1 mL/100 g用量給予可吸收防粘連液。分別于手術后第7 和第14天各組選取10只動物用水合氯醛麻醉處死，倒(U)型切口掀起腹壁，觀察腹膜粘連情況。

1.4　檢測指標

參考文獻根據進行粘連程度分級，完全無粘連為0級，計0分；內臟間或內臟與腹壁間1條粘連帶為Ⅰ級，計1分；內臟間或臟與腹壁間2條粘連帶為Ⅱ級，計2分；多于2條粘連帶而內臟未直接粘連至腹壁為Ⅲ級，計3分；內臟直接粘連到腹壁，不管粘連帶多少為Ⅳ級，計4分。分別取3組處死大鼠的腹腔內粘連部位組織(盲腸和腹膜粘連的組織處)，無粘連大鼠取受損腹壁及盲腸壁組織， 10%福爾馬林液固定，石蠟包埋切片后常規蘇木精-伊紅染色，進行病理組織學檢查。 4

1.5　統計學方法

采用SPSS統計軟件包進行數據分析，樣本兩兩比較采用Wilcoxon秩和檢驗(Wilcoxon rank sum test)。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1　粘連程度分級

術后第7天A組粘連以III～IV級為主，B組粘連以0～I級為主，C組粘連以I～II級為主，C、B兩組與A組比較，差異有統計學意義(P<0.05)。手術后第14天A組粘連以III～IV級為主，B組粘連以0～I級為主，C組粘連以0～I級為主。C、B兩組與A組比較，差異有統計學意義(P<0.05)。見表1和圖1。

表1　各組大鼠術后第7天和第14天粘連程度分級

2.2　病理組織學檢查

病理組織學檢查結果示，術后第7天，A組肌層組織可見明顯變性、壞死，大量炎細胞浸潤，漿膜層組織可見重度變性、壞死，大量炎性肉芽組織增生、炎細胞浸潤及膿腫形成，可見少量纖維組織增生；術后第14天，A組可見肌層組織輕度變性、壞死，少量炎細胞浸潤，漿膜層組織中度變性、壞死，大量炎性肉芽組織增生及較多炎細胞浸潤，大量纖維組織增生并玻璃樣變性。B、C組與A組相比，可見肌層組織輕度變性，少量炎細胞浸潤；漿膜層組織輕度變性，少量炎性肉芽組織增生及少量炎細胞浸潤，少量纖維組織增生。從第7天~第14天，C組較A組黏膜層有明顯的脈管擴張，且A組黏膜下層水腫、炎細胞浸潤較其他三組明顯嚴重。提示 C組具有預防組織粘連的作用。見圖2。

A組箭頭所指處發生粘連，B、C組箭頭所指處未發生粘連圖1　手術第7和14 天時大鼠腹壁解剖學觀察Fig.1　Gross anatomy observation of rats' abdominal wall in the 7th and 14th day after operation

3討論

a、c、e為術后第7天時A、B、C組，b、d、f為術后第14天時A、B、C組圖2　大鼠術后腹壁粘連病理組織學檢查(HE，×100)Fig.2　Histological examination of abdominal adhesions of rats in the 7th and 14th day after operation

粘連是臨床腹盆腔手術后的常見并發癥。腹腔粘連是腹腔內創傷、炎癥、感染、異物刺激等形成并相伴機體組織愈合的必然過程，是腹膜和臟器受到損傷之后，所發生的炎癥反應[2,6]。可能與細胞之間的作用有關[7-8]。本研究制作腹腔手術粘連大鼠模型，術后第7和第14天結果生理鹽水組動物腹壁100%發生粘連，提示生理鹽水沒有防術后粘連的作用，B、C組與A組相比均對術后防粘連起到了一定的抑制作用，臨床可通過提高手術技巧減少組織損傷、應用生物屏障物質等都可以防治腹壁粘連。本次研究結果發現，A組有明顯的粘連情況，盲腸與腹壁粘連嚴重，甚至與其他內臟產生粘連； B、C組結果提示透明質酸鈉凝膠和可吸收防粘連液在一定程度上均有助于粘連的改善。HE染色結果顯示，術后第14天與第7天生理鹽水組粘連組織炎癥反應由強到弱，組織壞死，變性，炎細胞浸潤情況逐漸減弱，炎性肉芽組織增生逐漸減少、膿腫情況改善。在C組觀察到損傷粘連處與A組比較，炎細胞浸潤少，炎性肉芽組織增生少，壞死、變性減少。可以推測C組可能通過減少炎癥反應，減少成纖維細胞增生來預防術后粘連的形成。提示可吸收防粘連液可以減少炎細胞滲出和損傷局部組織的炎癥反應，進一步減少損傷局部組織在修復過程中的纖維肉芽組織的增生，抑制粘連纖維帶的形成，到達預防粘連的效果。

可吸收防粘連液含有從植物纖維中提取純化的纖維素多糖，分子中含有較多的親水基團，使可吸收防粘連液具有可溶性，通過分子變性技術使其具有降解功能，可被機體吸收[10-11]。可吸收纖維素多糖與凝血因子、纖維蛋白原能夠均勻的有機結合，具有止血作用[12]。可吸收防粘連液是具有自主知識產權的新型的止血、防粘連系列產品，通過本實驗進一步證明其具有止血和防粘連作用，它能有效控制組織之間產生滲出，在臨床最容易形成粘連的時間內，阻止粘連的形成。具有良好的術后防粘連作用，是一種組織相容性良好的新型制劑。

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(2014-12-25收稿，2015-01-28修回)

中文編輯： 吳昌學； 英文編輯： 周凌

Inhibitory Effect of Absorbable Anti-adhesion Fluid on

Experimental Abdominal Adhesions in Rats

FU Lingyun1,2, LIU Xiaohong1,2, WEN Bo1,2, XIAO Ke3, XU Yini1, SHEN Xiangchun1,2

(1.KeyLaboratoryofOptimalUtilizationofNaturalMedicineResources,GuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,Guizhou,

China; 2.DepartmentofPharmacologyofTraditionalChineseMedicine,GuiyangMedicalCollege,Guiyang550004,

Guizhou,China; 3.GuizhouJinjiuBiologicalTechnologyLimitedCompany,Guiyang550005,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To investigate the inhibitory effect of absorbable anti-adhesion fluid on experimental abdominal adhesion in rats. Methods: Sixty SD rats were randomly divided into 3 groups as following: normal saline group (group A), medical sodium hyaluronate gel group (group B), and absorbable anti-adhesion fluid group (group C). The abdominal wall defect and cecal abrasion model was establiehsed. After 7 d and 14 d of operation, the rats were sacrificed and the following indexes including adhesion classification, gross anatomy observation, and histopathologic examination were checked. Results: The adhesion classification was significant decreased in group C, there were significant differences compared to group A (P<0.05). Histopathological examination confirmed that absorbable anti-adhesion fluid could attenuate inflammatory cell infiltration, granulation tissue proliferation, and serosal tissue degeneration.Conclusions: Absorbable anti-adhesion fluid can inhibit adhesion after operation.

[Key words]absorbable anti-adhesion fluid; rat, Sprague-Dawley; model, animal; adhesions; abdominal wall; pathology

[中圖分類號]R285 ;R619.9

[文獻標識碼]A

[文章編號]1000-2707(2015)03-0237-04

通信作者**E-mail:shenxiangchun@126.com

[基金項目]*貴州省工業攻關計劃[黔科合GY字(2010)3063號]