新生兒細菌性肺炎和輪狀病毒感染T淋巴細胞亞群及細胞因子的變化分析

董　焱

(上海交通大學醫學院附屬第三人民醫院 兒科, 上海, 201999)

新生兒細菌性肺炎和輪狀病毒感染T淋巴細胞亞群及細胞因子的變化分析

董焱

(上海交通大學醫學院附屬第三人民醫院 兒科, 上海, 201999)

摘要:目的分析新生兒感染細菌性肺炎與感染輪狀病毒后機體T淋巴細胞亞群以及細胞因子的變化。方法感染細菌性肺炎新生兒25例作為細菌組，感染輪狀病毒新生兒25例作為感染組，單純高膽紅素血癥新生兒25例作為對照組。檢測外周血CD4+淋巴因子及相關淋巴細胞亞群水平。結果與對照組相比，細菌組與病毒組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較低(P<0.05), CD9+水平細菌組與病毒組顯著高于對照組(P<0.01); IL-4水平細菌組最高，對照組最低，差異有統計學意義(P<0.05); 3組IFN-水平比較基本無差異(P>0.05); 3組IL-17水平比較無顯著差異(P>0.05); NK細胞水平進行比較，病毒組明顯低于細菌組(P<0.05)。結論新生兒被不同病原體感染后，其機體T淋巴細胞亞群水平降低,細胞因子水平也出現變化。

關鍵詞:感染性疾病; 新生兒; T淋巴細胞亞群; 細胞因子; 臨床觀察

新生兒感染性疾病是除新生兒黃疸、新生兒窒息外臨床最常見新生兒疾病之一，雖然今年來其發病率有所下降，但仍是引起新生兒死亡的重要原因[1]。胃腸道感染及呼吸道感染是新生兒感染最常見部位，程度較輕時難以觀察癥狀，隨著病情加重通常患兒會表現出全身性癥狀，例如敗血癥、膿毒血癥以及感染性休克等，嚴重威脅新生兒生命健康，有時還會引起致畸致殘等后遺癥。細菌性肺炎是新生兒感染性疾病中最常見的一種，其臨床癥狀多樣且無典型性，臨床多表現為呼吸困難、體溫不升、進奶量減少等特點，病情發展較為迅速；輪狀病毒感染常會引起新生兒腹瀉，且臨床癥狀較為隱匿不易發現[2]。由于新生兒各組織器官尚未發育完全，機體抵抗力與防御機制不成熟，更易受到疾病侵襲，不利于其健康成長，因此做好新生兒疾病防御及治療工作十分重要[3]。本文觀察新生兒感染細菌性肺炎與感染輪狀病毒后機體T淋巴細胞亞群以及細胞因子的變化,現報告如下。

1資料與方法

1.1　一般資料

本次75例觀察對象全部選自2012年1月—2014年1月本院兒科住院部新生兒，均為足月兒，患兒按照各自情況分成3組。細菌性肺炎患兒25例即為細菌組，其中男16例，女9例，平均出生日齡為(14.7±0.6) d, 平均體質量(3.71±0.32) kg; 輪狀病毒感染患兒25例為病毒組，其中男14例，女11例，平均出生日齡為(14.6±0.5) d, 平均體質量(3.67±0.28) kg; 單純高膽紅素血癥患兒25例為對照組，其中男15例，女10例，平均出生日齡(14.8±0.7) d, 平均體質量(3.58±0.26) kg。細菌性肺炎診斷標準為：臨床具有呼吸道感染表征且胸片結果顯示有肺炎影響特征；存在呼吸道感染接觸病史；臨床表現出鼻塞、嗆奶或吸氣性三凹征等；通過對本組患兒進行吸痰細菌培養，其結果表明17例為金黃色葡萄球菌感染，3例為肺炎鏈球菌感染，3例為銅綠假單胞菌感染，2例為大腸桿菌感染。細菌組患兒中不包含具有先天性疾病患兒，除肺炎診斷標準外其他細菌檢查結果為陰性。輪狀病毒感染診斷標準：采集25例患兒糞便進行膠體金試劑檢查結果全部顯示為陽性，患兒臨床伴有不同程度嘔吐及稀水便；病毒組患兒排除細菌性感染腹瀉疾病患兒以及由于食物不耐受引起腹瀉的患兒。單純高膽紅素血癥診斷標準：以間接膽紅素水平升高為主，總膽紅素值小于300 μmol/L，患兒未出現窒息、感染亦或是肝功能異常情況；父母均為非過敏體質，且無藥物過敏史。對照組、細菌組以及病毒組在性別、出生平均日齡、出生體質量等一般資料比較無顯著差異(P>0.05)。

1.2　方法

全部患兒入院48 h內采集空腹靜脈血2 mL備用，及時(4 h內)對標本進行處理。

1.2.1T淋巴細胞亞群檢測:取200 μL溶血素加入1 800 μL無菌注射用水中配置1份標本所需的溶血素(2 000 μL)備用，取1、2兩個流式細胞儀專用試管，分別取100 mL全血加入試管，并相應加入1試劑與2試劑，低速混勻并置于室溫中避光保存20 min; 向各管中加入1 000 μL所配置的溶血素，同樣采用漩渦器進行低速混勻后與室溫下避光保存約10 min; 隨后進行室溫離心，轉速為1 500 r/min，時間為5 min，留下層殘留液約50 μL，再加入2 mL洗滌液；再次進行離心分離操作，留用50 μL下層液并加入400 μL鞘液，上機檢測。

1.2.2特征性細胞因子檢測: 取流式細胞儀專用試管依次加入500 μL、RPMI 1640; 5 μL、1 μg/mL PMA; 1 μL、1 μg/mL離子霉素; 1 μL、10 μg/mL BFA; 500 μL外周全血；試劑加入完畢后使用渦旋混勻器混勻后置于37 ℃, 5% CO2培養箱中培養5 h, 中間取出重新混勻1次。對試管進行標記，分別為IFN-/IL-4抗體管與對照管; IL-17抗體管及對照組管，孵育5 h后于4個試管中分別加入200 μL全血、1 mL洗滌液，低速混勻后于4 ℃中避光靜置半小時，室溫離心5 min, 取底層留取液50 μL; 再次加入1 mL洗滌液室溫離心5 min后，取用下層100 mL殘留液備用；分別于4試管中加入CD4-APC 5 μL, 并加入相應的10 μL小鼠抗人IFN-/IL-4、單克隆抗體小鼠抗人IL-17A-PE, 低速混勻后于4 ℃中避光靜置半小時，再次進行洗滌，離心后取用下層50 μL殘留液；加入400 μL PBS混勻后即可上機檢測。

1.3　統計學方法

全部數據使用SPSS 16.0軟件進行處理，計量資料由均數標準差表示，采用單因素方差分析方法對數據進行處理，其中P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1　3組特征性細胞因子檢測結果比較表

IL-4水平比較可以看出，細菌組最高，與對照組及病毒組比較具有顯著差異(P<0.05), 其次為病毒組，但其水平與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05); 3組間IFN-水平比較無差異(P>0.05); 3組間IL-17水平比較相接近，細菌組低于病毒組(P>0.05); NK細胞水平進行比較，病毒組明顯低于細菌組(P<0.05), 但2組水平與對照組比較無顯著差異(P>0.05)。見表1。

表1　特征性細胞因子檢測結果比較

2.2　3組T淋巴細胞亞群比較結果

與對照組相比，細菌組與病毒組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較低(P<0.05); CD9+水平細菌組與病毒組顯著高于對照組(P<0.01); 三組新生兒機體CD8+水平相接近，比較無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表2　T淋巴細胞亞群比較

與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.3　3組NK細胞亞群表達比較

細菌組外周血CD3-CD56negCD16bright亞群百分率比對照組低(P<0.01), 總NK及其亞群比較無顯著差異(P>0.05); 病毒組外周血CD3-CD56negCD16bright亞群百分率比對照組低(P<0.01), 總NK及其亞群與細菌組比較差異有統計學意義。見表3。

表3　3組NK細胞亞群表達比較

與對照組比較，*P<0.05; 與細菌組比較，#P<0.05。

3討論

新生兒各項機能尚處于不斷生長過程中，其中樞調節能力較弱，免疫防御機制不成熟，已被細菌、病菌感染引發感染性疾病，其中以肺部感染以及消化系統感染最為常見[4-5]。為保證機體各功能正常運行，必須形成完整的防御系統。機體免疫細胞主要分成兩大類，固有免疫細胞以及適應性免疫細胞，固有細胞的免疫功能具有遺傳性，是天生固有的；適應性免疫細胞是在此基礎上還對某些致病原具有特異針對性[6-8]。機體可以通過T細胞與B細胞間相互作用形成記憶性應答，提供保護防止感染[9]。

3.1　T淋巴細胞亞群的免疫學作用

T淋巴細胞亞群主要包含CD3+、CD4+、CD8+、CD19+等，其在人體免疫調節中具有重要作用[10]。CD3+是外周血成熟T細胞水平代表，其水平與T細胞免疫功能間存在正相關性; CD4+可刺激B細胞產生抗體，其水平與各種淋巴因子的水平具有緊密聯系; CD8+具有抑制B細胞產生抗體的作用，其水平減少代表免疫抑制更能降低；T淋巴細胞各亞群之間相互作用，其中CD4+、CD8+起到相互制約相互調節的作用，兩者處于動態平衡狀態，保證機體免疫功能異常，其實機體免疫系統的核心，其比值與機體免疫功能抑制狀態有很強聯系，一般比值降低代表免疫功能抑制[11-13]。

3.2　特征性細胞因子免疫作用

CD4+中主要包括Th1、Th2、Th17等細胞亞群，其中Th1為炎癥性T細胞，主要分泌IFN-等; Th2主要與機體體液免疫有關，其過度應答會使機體保護性防御機制降低，其分泌的IL-4、IL-6等特定細胞因子與機體免疫狀態有關，機體Th1與Th2維持平衡十分重要[14-15]。Th17是最早參與抗感染應答的效應T細胞，IL-17是其特征細胞因子，在機體許多組織中同時存在。IFN-為前炎癥因子，由活化T細胞與NK細胞產生，可增強機體抗感染能力，同時還具有重要的免疫調節作用[16]。IL-4是唯一能夠誘導B細胞IgE低親和力受體細胞因子，可活化B細胞介導體液免疫應答，其在Th2分化中具有重要意義，還可以減少IFN-生成。IL-17是促炎因子的一種，對上皮細胞、內皮細胞等進行誘導，促進炎癥因子及趨化因子的釋放，動物實驗研究顯示，其在腸道炎癥中起到重要作用，可使小鼠腸道炎癥明顯減輕[17]。

本次觀察結果顯示，與對照組相比，細菌組與病毒組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較低(P<0.05); CD9+水平細菌組與病毒組顯著高于對照組(P<0.01); 3組新生兒機體CD8+水平相接近，比較無顯著差異(P>0.05); IL-4水平比較可以看出，細菌組最高，與對照組及病毒組比較具有統計學差異(P<0.05), 其次為病毒組，但其水平與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05); 3組間IFN-水平比較無顯著差異(P>0.05); 3組間IL-17水平比較相接近，細菌組低于病毒組(P>0.05); NK細胞水平進行比較，病毒組明顯低于細菌組(P<0.05), 但2組水平與對照組比較無顯著差異(P>0.05)，這與國內多位學者研究結果一致。

新生兒被不同病原體感染后，其機體T淋巴細胞亞群以及細胞因子變化不同，機體免疫功能被破壞，出現TH1/TH2失衡情況；機體被感染后顯示出T淋巴細胞亞群水平降低，免疫功能受限情況，其與新生兒已遭受感染以及病程較長且病情隱匿有很大聯系；對患有感染性疾病的新生兒嚴密監測其相關細胞因子水平對確定病情以及治療方案，早日助其恢復健康至關重要。

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Analysis in changes of T lymphocyte subsets and

cytokines in neonates with neonatal bacterial

pneumonia and neonates with rotavirus infection

DONG Yan

(DepartmentofPediatrics,TheThirdPeople′sHospitalAffiliatedtoMedicalCollege

ofShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai, 201999)

ABSTRACT:ObjectiveTo analyze the changes of the T lymphocyte subsets and cytokines in neonates with neonatal bacterial pneumonia and neonates with rotavirus infection. MethodsA total of 25 neonates with neonatal bacterial pneumonia were selected as bacteria group, 25 neonates with neonatal rotavirus infection were selected as infection group and 25 neonates with hyperbilirubinemia were selected as control group. Peripheral blood CD4+ lymphocyte and lymphocyte subpopulations were detected and analyzed. ResultsCompared with the control group, the levels of CD3+, CD4+, CD4+/CD8+ were significantly lower in the bacteria group and the infection group (P<0.05). CD9+ level in the bacteria group and the infection group was significantly higher than that in the control group (P<0.01). The level of IL-4 was the highest in the bacteria group and the lowest in the control group, and there were significant differences among three groups (P<0.05). There was no significant difference of level of IFN-among three groups (P>0.05). There was no significant difference of IL-17 level among three groups (P>0.05). NK levels in cells in the infection group was significantly lower than that in the bacteria group (P<0.05). ConclusionIn the neonates infected by different pathogens, the levels of the T lymphocyte subsets reduce and levels of cytokines change.

KEYWORDS:infectious disease; newborn; T lymphocyte subsets; cytokines; clinical observation

收稿日期:2015-03-11

中圖分類號:R 722.13

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)11-074-04

DOI:10.7619/jcmp.201511022