高效液相色譜法測(cè)定益母顆粒中鹽酸水蘇堿含量

鐘妍

（廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530021）

高效液相色譜法測(cè)定益母顆粒中鹽酸水蘇堿含量

鐘妍

（廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530021）

目的 建立測(cè)定益母顆粒中鹽酸水蘇堿含量的高效液相色譜法。方法 色譜柱采用強(qiáng)陽(yáng)離子交換（SCX100A）柱（250 mm×4．6 mm，5 m），流動(dòng)相為 15 mmol／L磷酸二氫鉀（含0．04%三乙胺，0．15%磷酸），檢測(cè)波長(zhǎng)為192 nm。結(jié)果 鹽酸水蘇堿進(jìn)樣量在0．258～5．160 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r=0．999 8，n=6)，平均加樣回收率為97．45%，RSD=0．81% （n=6)。結(jié)論 該法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性良好，可用于益母顆粒的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；益母顆粒；鹽酸水蘇堿

益母顆粒由益母草、當(dāng)歸、川芎、木香4味中藥材加工提取而 制成，具有活血調(diào)經(jīng)、行氣止痛功效，臨床用于氣滯血瘀、月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、產(chǎn)后瘀血腹痛等癥。方中益母草為君藥，活血化瘀效佳，因此對(duì)益母草藥味進(jìn)行有效的質(zhì)量控制必不可少。其藥品標(biāo)準(zhǔn)目前收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第九冊(cè)）》中，原標(biāo)準(zhǔn)中未建立任何含量測(cè)定方法對(duì)其進(jìn)行定量控制。益母草的質(zhì)量控制手段多采用薄層色譜掃描法[1]和高效液相色譜法測(cè)定鹽酸水蘇堿的含量，其中用高效液相色譜法測(cè)定含量分別采用了氨基柱[2]、C18柱[3]和離子交換色譜柱[4-6]作為色譜柱，另外還有采用蒸發(fā)光檢測(cè)器進(jìn)行分析[7-8]。本試驗(yàn)中采用高效液相色譜法對(duì)處方中益母草主要成分的鹽酸水蘇堿進(jìn)行定量分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

美國(guó) Waters 2695-2487型高效液相色譜儀；Milli-Q型純水發(fā)生器；Mikro 22R型高速冷凍離心機(jī)；德國(guó) Mettler Toledo AB265-S型電子分析天平。鹽酸水蘇堿對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為110712-200508，供含量測(cè)定用）；益母顆粒（三金集團(tuán)桂林三金生物藥業(yè)有限責(zé)任公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[9]

色譜柱：Luna SCX 100A柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：15 mmol／L磷酸二氫鉀(含0．04%三乙胺和0．15%磷酸)；檢測(cè)波長(zhǎng)：192 nm；流速：1．0 mL／min；柱溫：35℃。該色譜條件下，鹽酸水蘇堿保留時(shí)間約為13 min，峰形良好，理論板數(shù)達(dá) 10 000以上，可滿足定量分析要求。色譜圖見圖1。

1．鹽酸水蘇堿A．對(duì)照品溶液 B．供試品溶液 C．陰性對(duì)照品溶液圖1 高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

取五氧化二磷減壓干燥12 h的鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每 1 mL含0．10 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的本品，研細(xì)，取約3．5 g，置具塞三角瓶中，精密稱定，精密加入 50%乙醇 50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流30 min，取出，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，加在中性氧化鋁柱(100～200目，5 g，干法裝柱，柱內(nèi)徑1．5 cm)上，用乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)昧鲃?dòng)相溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方量比例稱取缺益母草的各味藥材，按益母顆粒制備工藝制得陰性樣品，再按供試品溶液制備方法進(jìn)行提取，即得陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn)：取缺益母草陰性對(duì)照品溶液，按擬訂的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果色譜圖中，在鹽酸水蘇堿的位置無色譜峰出現(xiàn)，表明陰性樣品對(duì)測(cè)定無干擾。見圖1。

線性關(guān)系考察：精密稱取鹽酸水蘇堿對(duì)照品 10．32 mg，置20 mL容量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密量取貯備液0．5，1．0，2．0，3．0，5．0，10．0 mL，置10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得系列對(duì)照品溶液。分別精密吸取以上對(duì)照品溶液各 10 μL，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）、被測(cè)組分峰面積為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=2．366 9×105X-1．059 5×104，r=0．999 8(n=6)。結(jié)果表明,鹽酸水蘇堿進(jìn)樣量在 0．258～5．160 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密量取同一份對(duì)照品溶液10 μL，按擬訂的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次。結(jié)果的 RSD=0．67%（n=5），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品，共6份，按供試品溶液制備方法操作，在擬訂色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，分別計(jì)算含量。結(jié)果鹽酸水蘇堿平均含量為每袋 8．30 mg，RSD=1．78%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD=0．96%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：稱取已知含量的樣品（鹽酸水蘇堿含量為0．59 mg／g）1．75 g，置具塞三角瓶中，精密稱定，共6份，分別按樣品鹽酸水蘇堿含量的50%，100%，150%精密加入對(duì)照品溶液，按供試品溶液制備方法提取、測(cè)定，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸水蘇堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2．4 樣品含量測(cè)定[10]

取不同批號(hào)的樣品，按擬訂方法測(cè)定，計(jì)算鹽酸水蘇堿的含量。結(jié)果批號(hào)為090401，090402，090403的樣品中鹽酸水蘇堿含量分別為每袋9．20，9．45，9．38 mg。

3 討論

色譜柱的選擇：曾使用 PC HILIC色譜柱、C18柱和氨基柱進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果PC HILIC親水性色譜柱和C18柱無法良好地分離被測(cè)成分與雜質(zhì)，氨基柱測(cè)得色譜峰峰形不佳。故選擇 Luna SCX 100A柱。

流動(dòng)相的選擇：色譜柱為離子柱，流動(dòng)相的離子濃度對(duì)測(cè)定影響較大，因此使用磷酸二氫鉀緩沖液，平衡離子交換。分別在流動(dòng)相pH為3．3，2．8，2．4下測(cè)定鹽酸水蘇堿，結(jié)果發(fā)現(xiàn)pH越大，保留時(shí)間越提前，分離度越小，甚至pH為3．3時(shí)，被測(cè)成分峰與雜質(zhì)峰合并。因此，通過添加一定比例的磷酸和三乙胺調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH為2．2。

提取除雜方式的選擇：在考察提取方式過程中，曾使用732型陽(yáng)離子交換樹脂柱、大孔樹脂D101柱、氧化鋁柱進(jìn)行除雜質(zhì)。結(jié)果以732型陽(yáng)離子交換樹脂柱、氧化鋁柱分離除雜效果較好。但732型陽(yáng)離子交換樹脂柱原理與液相所采用色譜柱分離原理相同，且操作步驟煩瑣，綜合考慮最終選擇采用氧化鋁柱進(jìn)行除雜。

[1]梁惠珍，李先榮，王瑞民．薄層掃描法測(cè)定復(fù)方腦清膠囊中鹽酸水蘇堿的含量[J]．中國(guó)藥事，2009，23(6)：575-576．

[2]李政海，蘇作林，廖展葦，等．HPLC法測(cè)定益母草顆粒（無蔗糖型）中鹽酸水蘇堿的含量[J]．中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，26(8)：70-72．

[3]楊曉云， 雪濤，張?jiān)汽悾婺竿柚宣}酸水蘇堿成分分析方法 [J]．中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2008，25（1）：69-70．

[4]程立方，崔秀君．產(chǎn)舒康顆粒中鹽酸水蘇堿的高效液相色譜法定量[J]．中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2007，24（6）：496-498．

[5]洪 梅，施 法．HPLC法測(cè)定加味八珍益母顆粒中鹽酸水蘇堿的含量[J]．中國(guó)藥事，2009，23（11）：1 113-1 114．

[6]姜衛(wèi)東，賀亞玲，何世芬，等．HPLC測(cè)定益母草注射液中鹽酸水蘇堿含量[J]．中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2007，8（5）：40-42．

[7]馮 旭，杜成智，梁臣艷，等．HPLC-ELSD測(cè)定益母顆粒中鹽酸水蘇堿的含量[J]．中成藥，2008，30（5）：附2-附3．

[8]林冬杰，張會(huì)球．HPLC-ELSD法測(cè)定益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿的含量[J]．亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5（2）：45-46．

[9]高曉波，張小勇，黃春清．HPLC測(cè)定益母草中鹽酸水蘇堿含量的色譜條件研究[J]．中醫(yī)藥信息，2009，26（4）：25-27．

[10]童 紅，何 斌．高效液相色譜法測(cè)定抗宮炎軟膠囊中鹽酸水蘇堿含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2007，16（14）：40-41．

Determination of Stachydrine Hydrochloride Content in Yimu Granules by HPLC

Zhong Yan
(Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute for Food and Drug Control,Nanning,Guangxi,China 530021)

Objective To establish a HPLC method for the determination of the stachydrine hydrochloride content in Yimu Granules．M ethods The strong cation exchange(SCX)column(250 mm×4．6 mm,5 μm)was used as the chromatographic column．The mobile phase was 15 mmol／L potassium dihydrogen phosphate (containing 0．04% triethylamine and 0．15% phosphoric acid)．The detection wavelength was 192 nm．Results The sample size of stachydrine hydrochloride within 0．258-5．160 μg showed good linearity(r= 0．999 8,n=6);the average recover rate was 97．45%,RSD=0．81%(n=6)．Conclusion This method is simple,accurate,strongly specific and better repeatable,and can be used for the quality control of Yimu Granules．

HPLC;Yimu Granules;stachydrine hydrochloride

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)05-0032-03

2014-07-12)