臍帶間充質干細胞輔助治療難治性類風濕關節炎2例分析

張榮環,趙 菊,楊華強

(1. 湖北省十堰市婦幼保健院, 湖北 十堰 442000；2. 湖北醫藥學院附屬人民醫院，湖北 十堰 442000)

臍帶間充質干細胞輔助治療難治性類風濕關節炎2例分析

張榮環1,趙 菊1,楊華強2

(1. 湖北省十堰市婦幼保健院, 湖北 十堰 442000；2. 湖北醫藥學院附屬人民醫院，湖北 十堰 442000)

目的 觀察臍帶間充質干細胞輔助治療難治性類風濕關節炎的療效和安全性。方法 將細胞總數為(5～7)×107個的臍帶間充質干細胞通過靜脈輸注途徑移植到自愿接受干細胞移植的2例難治性類風濕關節炎患者體內，4次為1個療程，每次間隔1周。治療后隨訪1年定期觀察患者臨床癥狀及各項生化和免疫學指標的變化并進行綜合分析。結果 臍帶間充質干細胞輔助治療后1個月，2例患者的臨床癥狀均明顯改善，28個關節的疾病活動度評分(DAS-28)由3.6分和4.0分別降低為2.2分和2.6分，血沉、C反應蛋白水平和類風濕因子抗體滴度也較治療前明顯降低。隨訪1年未觀察到與治療有關的不良反應，且癥狀持續緩解無復發。結論 臍帶間充質干細胞輔助治療難治性類風濕關節炎可緩解臨床癥狀，且未觀察到與治療有關的不良反應，安全性好。

干細胞移植；難治性類風濕關節炎；臍帶間充質干細胞

類風濕關節炎(RA)是一種以多系統損害為特征的慢性系統性自身免疫病，傳統治療藥物主要包括抗炎藥、糖皮質激素和抗風濕藥。近年來發展的針對細胞因子靶向治療的生物治療方法具有抗炎和防止骨破壞的作用，但生物制劑的使用容易導致注射部位局部的皮疹、感染，并且長期使用可使淋巴系統腫瘤的患病率增加，限制了其在臨床上的廣泛使用。有研究表明來源于臍帶結締組織中的臍帶間充質干細胞(UC-MSC)不僅具有造血支持作用，而且還具有免疫調節作用，在免疫性疾病的臨床治療中顯示出良好的前景[1-3]。我院采用UC-MSC移植輔助治療2例難治性RA患者取得較好效果，現報道如下。

1 臨床資料

1.1病例資料

1.1.1例1 男，60歲，雙腕、掌指、近端指、踝關節腫痛16個月，四肢腫脹、疼痛、行動困難3個月入住十堰市人民醫院。體格檢查：生命體征穩定，心肺聽診未聞及異常，腹軟，肝脾各肋緣下未及，雙手、雙足呈輕度彌漫性腫脹，雙腕及掌指關節、手指近端關節、雙踝關節輕微腫脹伴壓痛。實驗室檢查：血白細胞6.9×109L-1，血紅蛋白106 g/L，血小板291×109L-1；大小便常規無異常；血沉(ESR)為68 mm/h，類風濕因子(RF)57.8 IU/mL，抗鏈球菌溶血素O(ASO)陰性，C反應蛋白(CRP)14.6 mg/L，抗核抗體、ds-DNA和ENA多肽譜陰性，腎功能、肌酶學檢查正常，血清補體C3和C4升高。雙手和雙足X射線檢查：見關節周圍軟組織腫脹，關節間隙狹窄，未見關節面軟骨破壞，其他項目正常，28個關節的疾病活動度評分(DAS-28)為3.6分。臨床診斷為類風濕關節炎。入院以后給予美洛昔康、潑尼松及來氟米特口服及支持對癥治療1個月后癥狀逐漸減輕，但在激素減量過程中上述癥狀又加重，在征得醫院醫學倫理委員會的批準和患者知情同意的基礎上給予每周1次，共4次UC-MSC移植治療。移植后1個月，患者臨床癥狀明顯好轉，飲食、睡眠、體力、疲勞等臨床癥狀也有明顯改善，DAS-28評分降為2.2分，ESR降為15 mm/h末，RF 17.8 IU/mL，CRP 5.6 mg/L。出院后隨訪1年，未觀察與治療相關的不良反應，并且癥狀持續緩解無復發。

1.1.2例2 女，53歲，以不規則低熱伴雙手及雙踝關節疼痛20 d，不能行走，逐漸加重5 d，于2005年7月22日來十堰市人民醫院就診。既往有雙手和雙腳關節及全身骨關節疼痛病史3年。查體：T 37.3 ℃，行走困難，雙手腕關節、掌指、近端指間和雙側踝關節輕度腫脹，未見肌肉萎縮和關節畸形，心肺聽診未聞及異常，腹軟，肝脾各肋緣下未觸及。血常規：血紅蛋白100 g/L，白細胞8.9×109L-1，血小板391×109L-1；骨髓細胞學無明顯異常；RF 60.9 IU/mL，CRP 17.4 mg/L，ASO 202.3 mmol/L，ESR 80 mm/h，抗核抗體、ds-DNA和ENA多肽譜陰性，腎功能、肌酶學檢查正常，心電圖正常，DAS-28評分4.0分。雙手和雙足X射線檢查：關節周圍軟組織腫脹，關節間隙狹窄，未見關節面軟骨破壞。入院以后給予美洛昔康、潑尼松及甲氨蝶呤口服及支持對癥治療2個月后癥狀有所減輕，但在激素減量和甲氨蝶呤停用后上述癥狀復又加重，在征得醫院倫理委員會的批準和患者知情同意的基礎上給予UC-MSC移植治療，每周1次，共4次。移植后1個月患者臨床癥狀明顯好轉，DAS-28評分降為2.6分，ESR降為20 mm/h，RF 27.4 IU/mL，CRP 7.6 mg/L。出院后隨訪1年，未觀察到與治療相關的不良反應，并且患者癥狀持續緩解無復發。

1.2UC-MSC來源和移植途徑 取足月妊娠剖宮產健康胎兒的臍帶，采用組織塊貼壁培養法于含有5%CO2、37 ℃飽和濕度培養箱中培養，細胞達80%匯合后，以0.2%的胰酶/EDTA消化并按1∶3的比例傳代。收集第3代細胞，細胞總數為(5～7)×107個。流式細胞儀檢測細胞表型并確定為UC-MSC。移植前由患者簽署干細胞知情同意書。間充質干細胞治療次數：4次為1個療程，每次間隔1周，治療途徑采用靜脈輸注，治療后24 h內嚴密觀察患者生命體征的變化。

2 討 論

RA的發病機制至今尚未完全闡明，非甾體抗炎藥、改變病情的抗風濕藥及糖皮質激素治療RA已為人們所熟知，但這些藥物均具有不同的缺點和局限性。生物治療具有抗炎和防止骨破壞的作用，但容易導致注射部位局部的皮疹、感染，并且長期使用使淋巴系統腫瘤患病率增加，限制了其在臨床上的廣泛使用。近年來，基礎和臨床實驗研究表明間充質干細胞(MSC)具有免疫調節和再生修復的生物學特性，為RA的治療提供了嶄新的前景。

李慧等[5]研究報道UC-MSC能明顯抑制CIA大鼠的炎癥因子釋放和抑制內皮細胞的異常活化，有利于緩解RA的免疫炎性關節癥狀。蘇毅等[6]采用純化的自體外周血造血干細胞移植可使患者造血功能得到較快重建，近期臨床癥狀改善。毛飛等[7]研究提示骨髓MSC下調了RA小鼠脾臟單個核細胞表達TLR8及TLR9的水平，但TLR8與TLR9的表達無相關性。王黎明等[8]應用靜脈輸注UC-MSC的方式治療RA結果提示所有患者飲食、睡眠、體力、疲勞等臨床癥狀均明顯改善，全部患者滿足ACR20標準，且治療前后血液各項生化指標無明顯變化。Liang等[9]報道4例類風濕持續活動的患者接受了MSC的治療，結果4例患者中有3例ESR、DAS-28評分和疼痛VAS積分在移植后1個月和6個月明顯降低，2例患者在移植后6個月達到了歐洲風濕病防治聯合會的中等緩解標準，但分別在7個月和23個月后復發。4例患者未達到DAS-28緩解標準。患者治療過程中沒有觀察到與治療有關的嚴重不良反應。

本研究中，2例難治性RA患者在常規治療療效欠佳的情況下接受UC-MSC治療后飲食、睡眠、體力、疲勞等臨床癥狀明顯改善，2例患者的28個關節的疾病活動度評分明顯降低；治療后1個月后，ESR、CRP和RF抗體滴度也較治療前有明顯下降。隨訪1年，未觀察到與治療有關的不良反應，且癥狀持續緩解無復發。這表明采用UC-MSC輔助治療對難治性RA安全、有效，值得臨床推廣應用。結合國內外學者的動物實驗和臨床研究結果[10-15]，筆者分析UC-MSC治療RA的可能機制為：①MSC具有獨特的免疫調節作用，能調節多種先天性或獲得性免疫功能，進而調控機體的免疫應答；②MSC具有自我更新和多向分化潛能，在一定的條件下能生成脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞、神經細胞和成肌細胞等非造血成體細胞，可能參與受損組織的再生修復；③MSC具有趨化作用，可以阻止炎性遞質的釋放，減輕炎癥反應，減輕組織損傷，可阻止病情進展。由于本研究樣本量太小且隨訪時間較短，UC-MSC輔助治療難治性RA的臨床療效及不良反應還需擴大樣本量進一步觀察。

[1] Xu J,Wang D,Liu D,et al. Allogeneic mesenchymal stem cell treatment alleviates experimental and clinical Sjogren syndrome[J]. Blood,2012,120(15):3142-3151

[2] Dazzi F,Krampera M. Mesenchymal stem cells and autoimmune diseases[J]. Best Pract Res Clin Haematol,2011,24(1):49-57

[3] Scherer HU,Van-Pel M,Toes RE,et al. Mesenchymal stem cells in autoimmune diseases:hype or hope?[J]. Arthritis Res Ther, 2010, 12(3):126

[4] 張效北,李江濤,趙和泰,等. 間充質干細胞治療類風濕性關節炎患者臨床分析[J]. 中國現代醫生,2011,49(34):139-140

[5] 李慧,顧健,林傳明,等. 臍帶間充質干細胞對CIA大鼠炎癥因子的干預[J]. 中國組織工程研究與臨床康復,2011,15(36):6701-6704

[6] 蘇毅,賴思含,易海,等. 純化的自體外周血造血干細胞移植治療難治性幼年型類風濕性關節炎的初步研究[J]. 實用醫院臨床雜志,2011,8(4):33-34

[7] 毛飛,錢暉,朱偉,等. 骨髓間充質干細胞下調類風濕性關節炎小鼠脾臟單個核細胞TLR8 及TLR9的表達[J]. 中國組織工程研究與臨床康復,2011,15(45): 8371- 8375.

[8] 王黎明,周建軍,白雯,等. 臍帶間充質干細胞治療17例類風濕性關節炎患者的臨床療效觀察[J]. 中國免疫學雜志,2010,26(7)：659-662

[9] Liang J,Li X,Zhang H,et al. Allogeneic mesenchymal stem cells transplantation in patients with refractory RA[J]. Clin Rheumatol,2012,31(1):157-161

[10] De Miguel MP,Fuentes-Julián S,Blázquez-Martínez A,et al. Immunosuppressive properties of mesenchymal stem cells:advances and applications[J]. Curr Mol Med,2012,12(5):574- 591

[11] Daikeler T,Tyndall A. Stem cell treatment of autoimmune disease[J]. Dtsch Med Wochenschr,2011,136(33):1684-1686

[12] Kraus KH，Kirker-Head C. Mesenchymal stem cells and bone regeneration[J]. Vet Surg,2006,35(3):232-242

[13] Bielby R,Jones E,McGonagle D. The role of mesenchymal stem cells in maintenance and repair of bone[J]. Injury,2007,38(Suppl 1):S26-S32

[14] Li X,Liu L,Meng D,et al. Enhanced apoptosis and senescence of bone-marrow-derived mesenchymal stem cells in patients with systemic lupus erythematosus[J]. Stem Cells Dev,2012,21(13):2387-2394

[15] Liang J,Zhang H,Hua B,et al. Allogenic mesenchymal stem cells transplantation in refractory systemic lupus erythematosus:a pilot clinical study[J]. Ann Rheum Dis,2010,69(8):1423-1429

楊華強，E-mail:yanghuaqiang2004@126.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.06.013

R593.21

B

1008-8849(2015)06-0609-02

2014-01-05