YKL-40蛋白檢測在卵巢癌診斷中的應用

劉　炎, 范江濤, 李大海

(廣西醫科大學第一附屬醫院 婦科, 廣西 南寧, 530021)

YKL-40蛋白檢測在卵巢癌診斷中的應用

劉炎, 范江濤, 李大海

(廣西醫科大學第一附屬醫院 婦科, 廣西 南寧, 530021)

摘要:目的檢測卵巢癌患者血清人軟骨糖蛋白-39(YKL-40)及糖類抗原125(CA125)水平，以及卵巢癌組織YKL-40表達，探討YKL-40蛋白檢測在卵巢癌診斷中的應用。方法選擇惡性卵巢癌患者17例，交界性卵巢腫瘤患者16例，以及良性卵巢腫瘤患者19例，另選取非卵巢癌對照患者20例，檢測患者術前血清CA125水平及YKL-40水平，術后YKL-40水平，免疫組化檢測卵巢組織YKL-40蛋白表達情況。結果術前血清YKL-40水平隨腫瘤惡性程度增加而顯著升高(P<0.05或P<0.01)，卵巢癌患者手術前后YKL-40水平具有顯著性差異(P<0.01)。隨腫瘤惡性程度增加，腫瘤組織YKL-40表達量增加。YKL-40聯合CA125檢測診斷惡性卵巢癌的靈敏度顯著高于單獨檢測其中之一。結論YKL-40蛋白表達可作為卵巢癌的診斷標志物，血清YKL-40水平聯合CA125水平檢測可提高對卵巢癌診斷的靈敏度。

關鍵詞:人軟骨糖蛋白-39; 糖類抗原125; 卵巢癌; 免疫組織化學

卵巢癌是婦科三大常見惡性腫瘤之一，病死率高達47%。卵巢癌早期癥狀無異常，很難被發現，而大多數患者發現時已是晚期，錯過了最佳治療時期。目前治療方法的進步使腫瘤能被最大限度抑制，但5年生存率依然低于40%[1]。因此，臨床一直致力于尋找特異而靈敏的腫瘤標志物，以提高卵巢癌早期診斷。糖類抗原125(CA125)最常見于上皮性卵巢腫瘤(漿液性腫瘤)患者的血清中，其診斷的敏感性較高，但特異性較差[2]。近幾年來，人軟骨糖蛋白-39(YKL-40)越來越受人們關注，研究表明其可作為判斷部分腫瘤預后的生物學標志[3]。本研究通過免疫組織化學檢測YKL-40在卵巢組織中的表達，聯合檢測血清CA125與YKL-40水平，探討YKL-40在卵巢癌診斷中的意義。

1資料與方法

1.1一般資料

收集2010年10月—2013年10月在廣西醫科大學第一附屬醫院的接受治療的經病理檢查確診的52例卵巢癌患者手術切除的卵巢癌組織，包括卵巢上皮性惡性腫瘤17例，其中腺癌低分化癌9例、漿液性癌5例、黏液性癌1例、交界性癌2例；交界性漿液性瘤10例、交界性黏液瘤6例；卵巢良性腫瘤19例，其中黏液性瘤6例、漿液性瘤8例、腺瘤囊腺瘤5例。另選取非卵巢癌患者手術切除的卵巢組織標本20例作為對照。所有入選患者具有完整的臨床和病理資料，各組患者均否認近期服藥史、內分泌疾病或其他腫瘤病史。各組年齡無顯著差異(P>0.05), 具有可比性。

1.2方法

1.2.1血清學指標測定：所有患者術前3 d以及術后7 d空腹抽取外周靜脈血3～5 mL保存于真空干燥管內，室溫靜置1～2 h, 3 000 r/min離心15 min, 取上清，分裝保存于-80 ℃備用。根據YKL-40 ELISA試劑盒(上海藍基生物科技有限有限公司)說明書測定血清樣本吸光度值。血清CA125水平使用電化學發光免疫分析法(ECLI)進行檢測。

1.2.2免疫組織化學：病理組織標本均經10%福爾馬林固定6 h后，常規石蠟包埋，3.0 μm連續切片，滴加一抗(小鼠抗YKL-40單克隆抗體，美國bioscientific公司)，常規洗脫，加入二抗(通用型二步法檢測系統PV-9000，北京中杉金橋生物有限公司)孵育，作DAB(DAB顯色試劑盒，北京中杉金橋生物有限公司)染色，蘇木素復染、氨水返藍5 min, 封片、鏡檢。用膠質母細胞瘤組織作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3結果判定

1.3.1血清學檢查：觀察術前患者血清CA125水平，CA125>35 U/mL為陽性[4]。根據Elisa標準曲線計算血清YKL-40含量，YKL-40陽性是以正常對照組的均值+1.96個標準差，即95%置信區間上限值[5]。

1.3.2免疫組化結果：免疫組化鏡檢結果由2名高級病理醫師進行計數，細胞質顯示呈棕黃或棕褐色顆粒染色，為陽性反應，評分方式結合陽性細胞染色強弱及陽性細胞百分比兩種記分方法記錄結果。按染色強度：陰性記為0分、弱陽性計1分、中陽性計2分、強陽性計3分。按陽性細胞數：在400倍視野下每例標本隨機選取不重復5個視野，計算陽性細胞所占總細胞的百分比，少于1%記為0分、1%～10%記為1分、11%～50%為2分、超過50%為3分。2種積分結果相乘，定義0～3分為YKL-40正常表達，4～9分為過量表達。

2結果

2.1YKL-40在血清中的表達

術前，各組之間兩兩比較，YKL-40水平隨腫瘤惡性程度增加而顯著升高(P<0.05或P<0.01)。術后, 4組患者血清YKL-40水平無顯著差異(P>0.05)。良性卵巢瘤、交界性腫瘤組及惡性腫瘤組術前血清YKL-40水平與術后比較差異有統計學意義(P<0.05)。

μg/L

與對照組比較, *P<0.05, **P<0.01。

與良性腫瘤組比較, ##P<0.01。

與交界性腫瘤組比較, ▲P<0.05。

與同組術前相比, △P<0.01, △△P<0.05。

2.2YKL-40在卵巢癌組織中的表達

卵巢癌組織標本中YKL-40的表達見圖1。YKL-40在對照組正常表達，卵巢良性腫瘤組織中過表達率26.32%(5/19), 交界性腫瘤組織中過表達率50.00%(8/16), 而在卵巢惡性腫瘤組織中成過量表達率82.36%(14/17)。良惡性腫瘤組織中YKL-40表達量差異具有統計學意義(P<0.05)。

A. 良性腫瘤組織, YKL-40正常表達; B. 卵巢惡性上皮性腫瘤組織, YKL-40過度表達

圖1卵巢良惡性腫瘤組織中YKL-40蛋白表達情況免疫組化染色200倍

2.3患者術前血清YKL-40、CA125單獨和

聯合檢測陽性率統計結果

YKL-40、CA125單獨和聯合檢測在不同分組中的陽性檢出率見表2。惡性腫瘤組YKL-40陽性率高于CA125陽性率。二者聯合可使惡性腫瘤組陽性檢出率提高至88.23%，對交界性腫瘤的陽性檢出率提高至62.50%。以對照組織為參照，YKL-40、CA125單獨檢測及二者聯合應用對惡性腫瘤診斷的靈敏度分別為82.35%、70.59%、88.23%, 陽性預測值分別為93.33%、92.31%、93.76%, 陰性預測值分別為86.36%、79.17%、90.45%。二者聯合檢測時，檢測敏感性高于單獨檢測其中的任何一項。

表2　4組患者血清中YKL-40和CA125陽性檢出率[n(%)]

3討論

YKL-40是哺乳動物18糖蛋白家族中的一員，研究[6-7]表明其在炎癥、惡性腫瘤增殖浸潤、腫瘤周圍血管發生、細胞外基質的重塑等過程中發揮重要作用[8]，是腫瘤生長因子的一種，多種惡性腫瘤患者血清YKL-40高表達[9]。其已被作為一種潛在的腫瘤血清學標記物[10], 可用于評估卵巢癌等多種人類惡性腫瘤的發展和預后，研究[11]發現其對早期卵巢癌、子宮內膜癌等診斷靈敏度高于CA125, 水平升高的早期卵巢癌患者明顯預后不良。Choudhuri等[12]也對Ⅲ期卵巢癌患者血清中YKL-40進行檢測，發現血漿YKL-40>130 ng/mL的Ⅲ期卵巢癌患者生存時間明顯縮短，可作為卵巢癌的一個獨立預后因素。本研究顯示卵巢良惡性交界性腫瘤組YKL-40水平均高于對照組，且隨著惡性程度增加YKL-40水平也顯著增加，提示其可作為臨床分期的參考。且手術前后YKL-40差異顯著，表明其可作為臨床手術療效的判斷指標。

本研究中免疫組化結果證實血清學檢查的結果，即組織YKL-40表達越高，血清學表達越高。良性卵巢腫瘤組織YKL-40表達量最低，惡性卵巢癌組織中YKL-40表達量最高。但由于間質細胞也不同程度表達YKL-40，且隨病理分期增加，卵巢癌組織浸潤及轉移更廣泛，腫瘤間質更豐富[13]，因此免疫組化結果產生的假陽性率較高，應結合YKL-40血清學分析，以進一步確定病理檢查結果。

CA125在正常卵巢組織中不存在, 80%的卵巢惡性腫瘤患者血清CA125升高，但近半數的早期病例并不升高，故不單獨用于卵巢惡性癌的早期診斷，且90%患者血清CA125與病程進展無關，具有較高的假陽性率[14]，主要用于輔助診斷惡性漿液性卵巢癌、上皮性卵巢癌，同時也是卵巢癌術后、化療后療效觀察的指標。本研究顯示CA125診斷良性、交界性、惡性卵巢腫瘤的靈敏度均低于YKL-40，而二者結合診斷對良性、交界性、惡性卵巢腫瘤的診斷靈敏度進一步提高。表明YKL-結合其他檢查(如CA125)有望進一步提高對惡性卵巢癌的診斷水平。與國外的研究結果基本一致[15-16]。

綜上所述，YKL-40蛋白表達可作為卵巢癌的診斷標志物，血清YKL-40水平聯合CA125水平檢測在惡性卵巢癌的診斷等方面有較高的臨床價值，可提高對卵巢癌診斷的靈敏度[17-18]。

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Application of YKL-40 protein detection

in the diagnosis of ovarian cancer

LIU Yan, FAN Jiangtao, LI Dahai

(DepartmentofGynecology,TheFirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedical

University,Nanning,Guangxi, 530021)

ABSTRACT:ObjectiveTo detect the serum levels of human cartilage glycoprotein-39 (YKL-40) and carbohydrate antigen 125 (CA125) and the expression of YKL-40 in patients with ovarian cancer so as to explore the application of YKL-40 protein detection in diagnosis of ovarian cancer. MethodsA total of 17 patients with malignant ovarian cancer, 16 pateitns with borderline ovarian cancer, 19 patients with benign ovarian cancer and 20 patients with non-ovarian cancer were selected. The levels of serum CA125 and YKL-40 level before operation and YKL-40 level after operation were detected. Immunohistochemical method was used to detect TKL-40 protein expression in tissues of ovarian cancer. ResultsYKL-40 level increased along with the malignant severity of ovarian cancer before operation (P<0.05 or P<0.01), and there was significant difference of YKL-40 level before and after operation (P<0.01). The expression of YKL-40 in tumor tissue increased with the degree of malignancy deterioration. The sensitivity of YKL-40 combined with CA125 detection was significantly higher than that of YKL-40 or CA125 detection. ConclusionExpression of YKL-40 protein can be used as a diagnostic marker for ovarian cancer, and combined detection of YKL-40 and CA125 can improve the diagnostic sensitivity for patients with ovarian cancer.

KEYWORDS:human cartilage glycoprotein-39; carbohydrate antigen 125; ovarian cancer; immunohistochemistry

通信作者:范江濤, Email: Jiangtaofan1969@163.com

收稿日期:2014-10-19

中圖分類號:R 737.31

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)03-088-04

DOI:10.7619/jcmp.201503026