芪加口服液對輻射損傷小鼠造血功能的保護作用

唐 瑛，王慶敏，劉李娜，陳文彬

近代研究表明，黃芪多糖具有抗氧化作用，其作用機制可能與提高機體免疫功能、清除自由基及抗脂質過氧化有關［1］。原花青素是由不同數量的兒茶素或表兒茶素縮合而成的一大類多酚類化合物的總稱，是一種很強的自由基清除劑和脂質過氧化抑制劑，具有抗氧化、抗衰老、抗癌等多種生物活性［2］。而黃酮類化合物具有廣泛的藥理活性，特別是抗氧化、抗輻射作用，是天然活性成分中極具應用潛力的資源之一。由刺五加黃酮、黃芪多糖和原花青素組成的復方芪加口服液具有很好的抗輻射作用。本研究擬以60Co γ輻射所致造血機能損傷模型小鼠為研究對象，觀察芪加口服液對輻射損傷小鼠造血功能的保護作用。

1 材料與方法

1.1 動物 昆明種小鼠50只，雌雄各半，體質量22～24 g，由復旦大學實驗動物中心提供，并經倫理委員會許可，許可證號:SCXK(滬)2007-0002。

1.2 主要試劑 芪加口服液由刺五加黃酮、黃芪多糖和原花青素組成，由湖北省中醫藥研究院新藥研究室提供，批號0050215。

1.3 分組及給藥 按數字表法隨機將小鼠分為5組，即對照組、模型組和芪加口服液高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)劑量給藥組，每組10只。給藥組按設定劑量照前灌胃2周，照后灌胃1周，對照組和模型組給予等體積生理鹽水。

1.4 照射條件 采用BJ-6B醫用電子直線加速器(北京)，60Co γ射線一次全身照射。模型組和給藥組小鼠置于自制有機玻璃盒中(20cm×20cm，深3.5cm)照射，照射距離10cm，小鼠吸收劑量為6.0 Gy。對照組設置相應環境，佯照射。

1.5 觀察指標 (1)白細胞數(white blood cell，WBC):照射后第9天尾部取血，計數WBC數。(2)骨髓有核細胞數:照射后第9天將小鼠頸椎脫臼處死，取左側股骨，白細胞稀釋液沖洗骨髓細胞，顯微鏡下計數骨髓有核細胞數。(3)骨髓DNA含量:測定方法參照文獻［3］。(4)脾指數:取脾臟稱重，按下式計算脾指數:脾指數=脾質量(mg)/鼠體質量(g)。(5)內源性脾結節:測定方法參照文獻［4］。

2 結果

2.1 芪加口服液對受照射小鼠外周血白細胞的影響 見圖1。與對照組相比較，在接受60Coγ射線一次全身照射后，模型組的小鼠外周血白細胞數均明顯減少，且差異有統計學意義(P＜0.01);與模型組比較，芪加口服液給藥組小鼠的白細胞數較模型組增加，其中給予高、中劑量芪加口服液小鼠，白細胞數增加明顯，且與劑量呈正相關，差異有統計學意義(P＜0.01或＜0.05)。

2.2 芪加口服液對受照射小鼠脾指數和脾結節的影響 與模型組比較，芪加口服液給藥組小鼠的脾指數和脾結節數較模型組增加，其中高、中劑量組差異有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

圖1 芪加口服液對60Co γ射線照射小鼠外周血白細胞的影響(±s，每組 n=10)

表1 芪加口服液對60Coγ射線照射小鼠造血系統的影響(±s)

表1 芪加口服液對60Coγ射線照射小鼠造血系統的影響(±s)

注:與對照組比較aP＜0.05;與模型組比較bP＜0.05

組別 鼠數 劑量(mg/kg) 脾指數(mg/g) 脾結節(個)對照組10 3.55±0.01模型組 10 2.23±0.01a 1.29±0.32高劑量組 10 400 3.27±0.01b 2.32±0.96b中劑量組 10 200 3.40±0.01b 2.24±0.21b低劑量組10 100 2.85±0.01 1.84±1.01

2.3 芪加口服液對受照射小鼠骨髓有核細胞數和DNA含量的影響 與模型組比較，芪加口服液各給藥組小鼠的骨髓有核細胞數增加，骨髓DNA含量明顯增高，高、中劑量組與模型組差異有統計學意義(P＜0.01或P＜0.05)，說明芪加口服液能保護受照射小鼠造血功能。見表2。

表2 芪加口服液對60Co γ射線照射小鼠造血功能的影響(±s)

表2 芪加口服液對60Co γ射線照射小鼠造血功能的影響(±s)

注:與對照組比較aP＜0.01;與模型組比較bP＜0.05，cP＜0.01

組別 鼠數 劑量(mg/kg) DNA(A268/根股骨)骨髓有核細胞(×106/根股骨)對照組10 0.16±0.02 7.45±1.11模型組 10 0.02±0.004a 0.81±0.21a高劑量組 10 400 0.04±0.02c 1.31±0.21b中劑量組 10 200 0.05±0.01c 1.15±0.21b低劑量組10 100 0.03±0.021 1.03±0.13

3 討論

造血器官是射線的敏感器官，受照射后造血組織損傷產生一系列病理變化，造血功能的恢復是預后的關鍵因素。本研究采用BJ-6B醫用電子直線加速器(北京)，60Co γ射線一次全身照射，骨髓有核細胞數和DNA含量含量明顯降低，說明復制輻射損傷小鼠模型是成功的。小鼠受照射后數日內造血功能損傷較大，在第9天時，造血功能開始恢復，因此本研究觀察了第9天時的各項指標［5］。

芪加口服液由刺五加黃酮、黃芪多糖和原花青素組成，是湖北省中醫藥研究院新藥研究室研究的新型復方抗輻射藥。本研究探討了其對輻射照射小鼠造血系統的影響。實驗結果說明與模型組比較，芪加口服液能提高骨髓有核細胞數、增加骨髓DNA含量和提升白細胞數，其中高、中劑量的影響差異均有統計學意義。這說明芪加口服液對主要造血器官骨髓具有保護作用，能減輕射線對骨髓有核細胞的損傷，促進造血功能的恢復。本研究采用內源性脾結節法研究CFU-S多能造血干細胞的功能和相對數量。研究結果表明，芪加口服液高、中2個劑量能提高脾臟指數，顯著增加內源性脾結節數，保護造血干細胞，提示芪加口服液對脾臟代償造血功能有促進作用。

［1］王慶蓉，馬麗，雷呈祥.多糖抗輻射作用的研究進展［J］.海軍醫學雜志，2009，30(3):273-276.

［2］Moini H，Rimbach G，Packer L.Molecular aspects of procyanidin biological activity:disease preventative and therapeutic potentials［J］.Drug Metabol Drug Interact，2000，17:237-259.

［3］吳萬征，李朝暉，梁球.西藏紅景天對小鼠輻射損傷的保護作用及其抗高原反應與低溫環境的作用［J］.中藥材，2005，28(2):128-130.

［4］陳乾，晉進，郭宏舉，等.褐藻糖膠對60Co-γ射線照射小鼠造血系統的輻射防護作用研究［J］.解放軍藥學學報，2014，30(1):10-13.

［5］周永，麋漫天，楊鎮洲.三羥異黃酮對照射小鼠造血系統損傷的防護作用［J］.中華放射醫學與防護雜志，2002，25(1):21-24.