失眠模型下女貞子紅景天苷制備物藥代動力學分析研究

彭平　孫道涵　馮朵　趙麗敏　楊書娟　朱乃亮　張璐　李煥娟　折改梅　石任兵

失眠模型下女貞子紅景天苷制備物藥代動力學分析研究

彭平孫道涵馮朵趙麗敏楊書娟朱乃亮張璐李煥娟折改梅石任兵

【摘要】目的闡明女貞子紅景天苷制備物作為治療失眠病癥藥物的藥代動力學表征特性。方法采用超高效液相色譜法，PDA檢測器，ACQUITY UPLC H-CLASS T3 色譜柱(50 mm×2.1 mm×1.8 μm)；流動相：乙腈—水(3∶97)，流速0.3 mL/min；柱溫25 ℃。結果失眠模型下，入血成分紅景天苷Cspan20.24 μg/mL、Tspan0.5 h、T1/22.53 h、K0.27，酪醇Cspan0.49 μg/mL、Tspan0.75 h，血藥濃度比值(酪醇∶紅景天苷)最大值為3.90∶100，為體外含量比值的12.58倍。結論在失眠模型下，女貞子紅景天苷制備物體內主要入血成分為紅景天苷和酪醇，且表征出藥代協同性；與正常狀態比較，表現出體內成分生物利用度增加的藥物親和性。

【關鍵詞】紅景天苷；酪醇；藥代動力學；失眠；親和性

紅景天苷、酪醇為中藥紅景天的特性功效性成分，現代藥理研究表明，紅景天苷具有調節睡眠周期，抗失眠的藥理活性，可作為失眠病癥治療藥物[1-3]。為了解決紅景天的資源缺乏狀態，本實驗組發明并建立了從女貞子藥材中提取，并經堿轉化后，大孔樹脂分離富集制備紅景天苷的方法，所得女貞子紅景天苷制備物(簡稱：制備物)以自然藥學觀為指導，經藥物體系研究導向制備而來[4-9]。為探尋其藥物自然性、協同性、親和性[10-11]，本實驗組前期研究建立了超高效液相色譜法，PDA檢測器同時測定紅景天苷和酪醇的體內分析方法(體內紅景天苷、酪醇的最低檢測濃度分別為0.5 μg/mL、0.25 μg/mL，最低定量濃度分別為1 μg/mL、0.5 μg/mL，平均回收率分別為90.97%、92.33%)，發現了制備物在正常狀態大鼠體內可同時檢出紅景天苷和酪醇兩成分，測其在正常大鼠體內藥代動力學表征為：紅景天苷最大血藥濃度值(Cmax)為19.29 μg/mL、最大血藥濃度時間(Tmax)0.5 h、半衰期(T1/2) 3.28 h、曲線下面積(AUC0-t)21.00 μg/mL*h、平均滯留時間(MRT)3.43 h清除率K為0.21，酪醇最大血藥濃度值(Cmax)為0.32 μg/mL最大血藥濃度時間(Tmax)0.75 h，體內同存酪醇與紅景天苷血藥濃度比值(以紅景天苷為參比)最大為2.99∶100，為制備物樣品含量比值的9.65倍。在藥代動力學-成分相互作用(PK-DI)關聯研究中還發現了制備物中以紅景天苷與酪醇為主要有效成分的有關藥物體系在偏頭痛模型下表現出藥代協同吸收性。

本文研究在PCPA致大鼠失眠模型下女貞子紅景天苷制備物藥代動力學表征，并同時與正常狀態下的藥代表征對比分析結果，以闡明其作為治療失眠病癥藥物的藥代動力學表征特性，發現藥物與病理模型之間的特性表征，為進一步基于本制備物進行抗失眠的藥物創新提供科學依據。

1材料

1.1儀器

Waters ACQUITY超高效液相色譜儀，PDA檢測器，Empower工作站，自動進樣；Waters ACQUITY UPLC H-CLASS T3色譜柱(50 mm×2.1 mm×1.8 μm)，METTLER TOLEDO XS204分析天平(METTLER TOLEDO，瑞士)，METTLER TOLEDO XP26分析天平(METTLER TOLEDO，瑞士)，sigma 1-14小型臺式離心機(sigma，德國)，Labconco(r) CentriVap離心濃縮儀(LABCONCO，美國)，渦旋混合器(其林貝爾，中國)，0.22 μm微孔濾器。

1.2藥品與試劑

紅景天苷對照品(北京方程生物科技有限公司，批號130426；含量99.9%)、水楊苷對照品(北京方程生物科技有限公司，生產批號121118；含量99.9%)、酪醇對照品(北京方程生物科技有限公司，批號120927；含量99.9%)、高氯酸(分析純，天津市鑫源化工有限公司)、色譜乙腈(色譜純，Fisher公司)、哇哈哈純凈水、對氯苯丙氨酸(批號：C6506，SIGMA)。

女貞子紅景天苷制備物：取女貞子藥材(浙江產地)70%乙醇提取，經堿轉化后，大孔樹脂分離富集制備而得。(批次：20130926，由課題組制備，樣品經高效液相色譜法測定，紅景天苷含量64.5%，酪醇含量0.2%)。

1.3實驗動物

健康Sprague-Dawley(SD)，雌性，大鼠，體質量200～220 g，鼠齡6～8周，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，許可證編號：SCXK(京)2012-0001，批號20131021。

2方法

2.1給藥方案與樣品采集

SD大鼠隨機分為14組(分別為14個取血時間點組)，每組5只，采用腹腔注射PCPA劑量300 mg/kg致大鼠失眠模型，連續注射造模7天，于末次注射PCPA后30分鐘灌胃給藥女貞子紅景天苷制備物。

失眠模型大鼠，采用單次灌胃給藥女貞子紅景天苷制備物，給藥劑量60 mg/kg，于給藥后2分鐘、5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、1.5小時、2小時、3小時、4小時、8小時、12小時、24小時腹主動脈取血，每次5 mL，10000 r/min離心15分鐘，分離血清，即為含藥血清，于-80℃保存備用。

2.2血藥濃度測定方法

血樣處理方法：取300 μL含藥血清，置于2 mL離心管內，準確加入50 μL濃度為100 μg/mL的內標水楊苷溶液，渦旋30秒，加0.4 mol/mL高氯酸180 μL，渦旋30秒，靜置15分鐘，14800 r/min高速離心15分鐘，取上清液200 μL加1 μL 50%NaOH調pH到6～7，過0.22 μm微孔濾器，供UPLC-PDA檢測分析。

2.3液相色譜分析條件

液相色譜條件Waters ACQUITY超高效液相色譜儀，PDA檢測器，Empower工作站，ACQUITY UPLC H-CLASS T3色譜柱(50 mm×2.1 mm×1.8 μm)；流動相：乙腈—水(3∶97)，流速為0.3 mL/min；柱溫為25℃；進樣體積為10 μL，檢測波長276 nm。

3結果

3.1失眠模型下紅景天苷制備物藥代動力學測定結果

取各給藥組血清樣品制備測定，計算失眠模型大鼠給藥后各時間點體內紅景天苷、酪醇的血藥濃度，結果見表1。

表1　失眠模型大鼠給藥后不同時間點體內

擬合失眠模型大鼠給藥紅景天苷制備物后體內入血成分藥—時曲線見圖1。

圖1　失眠模型大鼠給藥紅景天苷制備物后　體內入血成分藥-時曲線

采用生物學統計軟件PKsolver計算得各給藥組體內紅景天藥代動力學參數，見表2。

3.2藥代動力學-成分相互作用(PK-DI)關聯分析結果

由表2可知，失眠模型下紅景天苷制備物給藥后，體內成分紅景天苷Tmax為0.5 h，由體內酪醇成分血藥濃度值分析可知體內成分酪醇Tmax為0.75 h；在失眠狀態下，紅景天苷和酪醇兩成分的體內Tmax值基本一致，體內酪醇與紅景天苷成分有一定共血藥時間，可產生相互作用藥動學協同吸收特性。

表2　失眠大鼠體內紅景天苷成分藥代動力學參數

3.3紅景天苷及酪醇體內外含量相對比值分析

以紅景天苷含量為參比，計算體內外制備物中成分酪醇含量與紅景天苷含量比值(體外含量比例為：酪醇含量/紅景天苷含量；體內濃度比值為：酪醇血藥濃度/紅景天苷血藥濃度)以表征制備物體內外藥物體系組成，結果見表3。

表3　失眠模型大鼠體內外紅景天苷與酪醇含量比值

結果顯示，以紅景天苷含量為參比，酪醇與紅景天苷含量比值排序為：制備物體外<體內0.25小時<體內0.5小時<體內0.75小時<體內1小時；在大鼠體內酪醇與紅景天苷含量比值較制備物增大了7.13～12.58倍，且從給藥后0.25小時到1小時持續了0.75小時的增量動態變化。

4討論

4.1不同狀態下藥代動力學-成分(PK-DI)相互作用關聯比較分析結果

紅景天苷制備物在失眠模型下與正常狀態下大鼠體內成分藥代動力學參數比較分析，設正常狀態下制備物組藥代動力學參數為1，計算分別兩組體內紅景天苷、酪醇成分藥代動力學參數比值(失眠模型組∶正常狀態組)可知，體內成分紅景天苷：Tmax(0.5、0.5)比值為1∶1，即失眠組=正常組，Cmax(20.24、19.29)比值為1.05∶1，即失眠組>正常組，AUC0-t(28.31、21.00)比值為1.35∶1，即失眠組>正常組，清除率K(0.27、0.21)比值為1.29∶1，即失眠組>正常組，T1/2(2.53、3.28)比值為0.77∶1，即失眠組<正常組，MRT(2.80、3.43)比值為0.82∶1，即失眠組<正常組；體內成分酪醇：Tmax(0.75、0.75)比值為1∶1，即失眠組=正常組，Cmax(0.49、0.32)比值為1.53∶1，即失眠組>正常組；分析表明在失眠模型下紅景天苷制備物藥物體內紅景天苷和酪醇成分生物利用度均較正常狀態下高，體內代謝速度較快。

4.2不同狀態下紅景天苷及酪醇體內外含量相對比值分析

結果顯示，以紅景天苷含量為參比，酪醇與紅景天苷含量比值(3.90∶100)，明顯大于前期實驗研究結果：正常狀態下最大比值(2.99∶100)，且從給藥后15分鐘到1小時持續了45分鐘的增量動態變化，失眠模型下體內同存酪醇與紅景天苷血藥濃度比值可見失眠狀態下體內酪醇與紅景天苷成分共血藥時間較正常狀態下延長，兩成分的體內協同作用較正常狀態下加強。

失眠模型大鼠給藥女貞子紅景天苷制備物給藥后，體內主要以紅景天苷、酪醇兩種成分入血，其藥代動力學特性表征為體內酪醇、紅景天苷兩成分藥動學協同吸收，且在失眠模型下，紅景天苷制備物兩入血成分生物利用度均較正常狀態下高，尤以酪醇與紅景天苷血藥濃度比值明顯增大，體內兩成分酪醇與紅景天苷共血藥時間延長；可見，在失眠模型下紅景天苷制備物藥物體內成分藥動學協同作用增強，表現出藥物對失眠病癥的親和性。

基于自然藥學觀指導思想，自然藥物具有自然性、協同性、親和性三大特性，本研究以藥物“三性”為研究導向，著力藥物組成成分研究、成分相互作用研究、成分與病理狀態關聯研究，揭示了女貞子紅景天苷制備物藥物作為治療失眠病癥藥物的藥代動力學表征特性，其在失眠模型下顯示出紅景天苷與酪醇構成藥物體系，表征出藥代協同性與對失眠病癥狀態的親和性，為進一步基于本制備物進行抗失眠的藥物創新提供了科學依據。

參考文獻

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(本文編輯：董歷華)

·啟事·

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·論著·

作者單位：100069 首都醫科大學中醫藥學院[韓虹娟(碩士研究生)、李冬華、張武芳、耿建國]；首都醫科大學附屬北京婦產醫院婦幼保健院(錢睿亞)；首都醫科大學附屬北京中醫醫院婦科(許昕、黃玉華、趙文景)；首都醫科大學附屬復興醫院月壇社區衛生服務中心中醫科(倪婧)

Study on the pharmacokinetic characterization of salidroside drugs in the insomnia model rats

PENGPing，SUNDao-han，FENGDuo，etal.KeyUnitofExploringEffectiveSubstancesofClassicalandFamousFormulasofStateAdministrationofTraditionalChineseMedicine，SchoolofChinesePharmacy，BeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100102，China

【Abstract】ObjectiveTo study the pharmacokinetic characterization of Salidroside drug which was prepared from Fructus Ligustri Lucidi as a drug for insomnia treatment. MethodsThe drug content was measured by UPLC with PDA detector. Analyzes was performed on an ACQUITY UPLC H-CLASS T3(50 mm×2.1 mm, 1.8 μm) column with salicin as the internal standard. The mobile phase was acetonitrile:water solution (3:97, v/v) at a flow rate of 0.3 mL/min. The temperature of column was 25℃. ResultsThe Cmax, Tmax, T1/2, and K of salidroside were 20.24 μg/mL, 0.5 h, 2.53 h, and 0.27 in insomnia rats, respectively; and the Cmax, Tmax of tyrosol were 0.49 μg/mL and 0.75 h respectively in insomnia rats. The maximum content ratio of tyrosol / salidroside was 3.90/100, which was 12.58 times higher than that in vitro. ConclusionSalidroside and tyrosol were the main components of salidroside drug into the blood and they exhibited a synergistic effect for absorption in the insomnia model rats. The bioavailability of drug was increased in insomnia model rats when compared with the health rats.

【Key words】Salidroside； Tyrosol； Pharmacokinetic； Insomnia； Adaptation

通訊作者：李冬華(1972- )，女，博士，教授，碩士生導師。研究方向：中藥防治婦科腫瘤機制研究。E-mail:dududoctor@163.com

作者簡介：韓虹娟(1987- )，女，2012級碩士研究生。研究方向：中藥防治婦科腫瘤機制研究。E-mail:hanhongjuan0508@126.com

基金項目：國家自然科學基金(81373812，81073096)

(收稿日期：2014-09-10)

Corresponding author：SHI Ren-bing，E-mail:shirb@126.com

【中圖分類號】R285.5

【文獻標識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1674-1749.2015.03.006