系統性紅斑狼瘡380例外周血淋巴細胞亞群變化及臨床意義

楊宇峰，朱　劍，茹晉麗，車國柱，靳志勇，孫慧萍，靳雪琴，陳偉華，李小峰

?

系統性紅斑狼瘡380例外周血淋巴細胞亞群變化及臨床意義

楊宇峰，朱劍，茹晉麗*，車國柱，靳志勇，孫慧萍，靳雪琴，陳偉華，李小峰

*共同第一作者

[摘要]目的探討T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞及NK細胞的變化在系統性紅斑狼瘡(SLE)發生和發展中的作用。方法選取解放軍264醫院和山西醫科大學第二醫院診治的SLE 380例及健康體檢者58例，SLE患者分為穩定期組157例、輕度活動期組79例、中度活動期組82例、重度活動期組62例。檢測各組外周血中T、B淋巴細胞、NK細胞、Th、Ts細胞計數及百分比，并分析SLE患者外周血淋巴細胞亞群與SLE疾病活動指數(SLEDAI)的相關性。結果活動期SLE T、Th及NK細胞計數及百分比、Ts細胞計數低于健康對照組和穩定期組，B細胞百分比高于健康對照組和穩定期組(P<0.05)。T、Th、Ts、NK細胞計數、T細胞百分比與SLEDAI評分呈負相關，B細胞百分比與SLEDAI評分呈正相關(r=-0.347、-0.311、-0.326、-0.351、-0.318、0.455，P<0.05)。結論外周血淋巴細胞亞群的變化可以為SLE患者病情評估及診治效果提供依據。

[關鍵詞]免疫系統疾病；紅斑狼瘡,系統性；淋巴細胞亞群

系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus， SLE)是一種由多因素引起的以多臟器受累為特征的自身免疫性疾病[1]，全世界SLE患病率為17/10萬～48/10萬，我國有近100萬的患者，好發于育齡期女性，因其高患病率、高病死率而對社會人群身心健康造成較大危害[2]。SLE病因未明，免疫系統紊亂貫穿整個發病過程，T淋巴細胞異常、B淋巴細胞過度活化最終導致免疫系統的異常免疫應答是其主要發病機制[3],而治療SLE的傳統或新的免疫抑制劑及生物制劑所針對的靶細胞多為體內增生過度活躍的淋巴細胞。隨著基礎免疫和細胞標記技術的發展，發現了越來越多的淋巴細胞亞型，這些淋巴細胞亞型在SLE的發病機制中發揮著不同的作用。以往對外周血淋巴細胞亞群與SLE病情相關性的研究大多樣本量較小且僅檢測淋巴細胞亞群百分比，結果不太一致[4-11]。本研究對380例不同活動期SLE患者外周血中T、B淋巴細胞、NK細胞、CD4+T(Th)、CD8+T(Ts)細胞計數及百分比進行檢測，以探討SLE病情活動期與上述淋巴細胞亞群之間的關系。

1資料與方法

1.1臨床資料收集2009年1月—2014年6月解放軍264醫院和山西醫科大學第二醫院確診的SLE 380例，均符合1997年美國風濕病協會(ARA)修訂的SLE分類標準[12]。男26例，女354例，年齡7～75(32.6±11.9)歲。參照SLE活動性指數(SLE disease activity index， SLEDAI)評分作為病情活動判斷標準[13](0～4分為穩定期，5～9分為輕度活動期，10～14分為中度活動期，>15分為重度活動期)分為：穩定期157例，男10例，女147例，年齡9～75(32.0±11.6)歲；輕度活動期組79例，男4例，女75例，年齡7～58(33.4±11.3)歲；中度活動期組82例，男10例，女72例，年齡16～66(35.5±13.3)歲；重度活動期組62例，男2例，女60例，年齡15～54(29.4±10.4)歲。選擇同期上述醫院門診健康體檢者58例為健康對照組，男14例，女44例，年齡14～66(39.4±10.1)歲；既往無重大疾病史，本人及其直系親屬無自身免疫性疾病史。各組性別、年齡等方面比較差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑：四色流式細胞儀，四色免洗T細胞亞群分析試劑以及FACS溶血素,均購于美國BD公司。熒光標記單克隆抗體和同型對照均購自法國Immunotech公司。Beckman Coulter EPICS XL型流式細胞儀購自美國Beckman-Coulter公司。

1.2.2檢測方法：抽取靜脈血1 ml于乙二胺四乙酸(EDTA)-K3抗凝管中，充分搖勻。在各測定管中分別加入熒光標記單克隆抗體CD3-PECY5/CD4-異硫氰酸熒光素(FITC)/CD8-藻紅蛋白(PE)、CD-19-FITC和CD16CD56-PE各20 μl，待測全血標本100 μl，調節細胞濃度約10×109/L。每份標本設同一型對照，對照管中加入鼠抗人(IgG1-PECY5/IgG1-FITC/IgG1-PE)20 μl，待測全血標本100 μl，混勻，室溫避光反應20 min后，以Q-Prep儀溶血，上機檢測。流式細胞術(FCM)激光為冷亞激光，波長488 nm，采用氣體流向檢測儀(flow-Check)調整光路，用同型對照調電壓，以側向角散射(SSC)為橫坐標，前向角散射(FSC)為縱坐標，構建散點圖，在散點圖上采用設門技術分析淋巴細胞群中T細胞(CD3+)、Th細胞(CD3+CD4+)、Ts細胞(CD3+CD8+)、B細胞(CD19+)和NK細胞(CD16+CD56+)百分數，每份標本計數1×105個細胞。

2結果

2.1外周血淋巴細胞亞群計數T細胞計數SLE組及SLE穩定期組、輕、中、重度活動期組均低于健康對照組，SLE輕、中、重度活動期組均低于穩定期組，且SLE重度活動期組低于輕、中度活動期組(P<0.05)。B細胞計數SLE中度活動期組高于穩定期，重度活動期組高于健康對照組、穩定期組、輕度活動期組(P<0.05)。Th細胞計數SLE組及SLE穩定期組、輕、中、重度活動期組均低于健康對照組，SLE輕、中、重度活動期組均低于穩定期組，且SLE重度活動期組高于輕度活動期組(P<0.05)。Ts細胞計數SLE組低于健康對照組(P<0.05)，SLE輕、中、重度活動期組均低于健康對照組、穩定期組，SLE重度活動期組低于輕度活動期組(P<0.05)。Th/Ts計數比值SLE組及SLE穩定期組、輕、中度活動期組均低于健康對照組，SLE中度活動期組低于穩定期組(P<0.05)。NK細胞計數SLE組及SLE穩定期、輕、中、重度活動期組均低于健康對照組，SLE輕、中、重度活動期組均低于穩定期組，且SLE重度活動期組低于輕、中度活動期組(P<0.05)。總淋巴細胞計數SLE組及SLE穩定期、輕、中、重度活動期組均低于健康對照組，SLE輕、中、重度活動期組均低于穩定期組，且SLE重度活動期組低于輕度活動期組(P<0.05)。其余指標各組間比較差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

±s)

注：SLE為系統性紅斑狼瘡；與健康對照組比較，aP<0.05;與SLE穩定期組比較，cP<0.05;與SLE輕度活動期組比較，eP<0.05;與SLE中度活動期組比較，gP<0.05

2.2外周血淋巴細胞亞群百分比T細胞百分比SLE組低于健康對照組，SLE輕、中、重度活動期組均低于健康對照組、穩定期組，且SLE重度活動期組低于輕、中度活動期組(P<0.05)。B細胞百分比SLE組高于健康對照組，SLE輕、中、重度活動期組均高于健康對照組、穩定期組，且SLE中度活動期組高于輕度活動期組，SLE重度活動期組高于中度活動期組(P<0.05)。Th細胞百分比SLE組低于健康對照組，SLE輕、中、重度活動期組均低于健康對照組、穩定期組(P<0.05)。Ts細胞百分比SLE穩定期組、中度活動期組均高于健康對照組，SLE重度活動期組低于穩定期組、輕、中度活動期組(P<0.05)。NK細胞百分比SLE組及SLE穩定期、輕、中、重度活動期組均低于健康對照組，且SLE輕、中、重度活動期組均低于穩定期組(P<0.05)。見表2。

±s)

注：SLE為系統性紅斑狼瘡；與健康對照組比較,aP<0.05；與SLE穩定期組比較,cP<0.05；與SLE輕度活動期組比較,eP<0.05;與SLE中度活動期組比較,gP<0.05

2.3外周血淋巴細胞與SLEDAI相關性分析T、Th、Ts、NK細胞計數均與SLEDAI呈負相關(P<0.05)。T細胞百分比與SLEDAI呈負相關，B細胞百分比與SLEDAI呈正相關(P<0.05)。見表3～4。

表3　各組外周血淋巴細胞亞群計數與系統性

表4　各組外周血淋巴細胞亞群百分比與系統性

3討論

人體正常免疫應答過程有賴于各種免疫細胞之間的相互協作和相互制約，SLE患者外周血中出現大量自身抗體說明自身反應性B細胞的存在和活化，而B細胞增殖活化有賴于調節細胞的調節，淋巴細胞亞群紊亂與SLE發生、發展密切相關。根據T細胞在免疫應答中的功能不同，將T細胞分為輔助性T細胞(helper T lymphocyte， Th/CD4+)和抑制性T細胞(supressor T lymphocyte， Ts/Tc/CD8+)。有研究認為，Th淋巴細胞具有輔助B細胞生成抗體和巨噬細胞活化等功能，輔助誘導細胞及體液免疫，目前認為Th淋巴細胞的異常凋亡與SLE的發展和進展有著密切的聯系，并在自身抗體的形成過程中起著關鍵作用[14]。

國內外對SLE患者T細胞亞群的研究較多，但結果都不太一致。本研究結果發現，SLE組Th細胞計數及百分比低于健康對照組，且其計數與SLEDAI評分呈負相關，與國內研究一致[4-7]。由于SLE疾病活動患者體內產生大量自身抗體通過不同途徑進入淋巴細胞，導致細胞周期紊亂，引起Th淋巴細胞凋亡，比例降低。本研究發現，SLE組Ts細胞計數低于健康對照組，與SLEDAI呈負相關，與孫家祥等[7]報道一致。究其原因可能是Ts淋巴細胞抑制T細胞活化、抑制B細胞產生抗體和細胞毒作用，起抑制細胞及體液免疫的作用，而Ts細胞下降引起了B細胞多克隆激活及體液免疫異常,繼而加重SLE病情[15]。但任娜等[4]、Yang等[9]研究發現Ts細胞升高，成傳芳等[6]、Lee等[8]研究表明Ts細胞變化無統計學意義。本研究結果與上述不一致，可能與彼此研究的樣本量有關，具體原因仍需進一步探討。本研究發現，SLE組Th/Ts計數比值低于健康對照組，與吳冰文等[5]、孫家祥等[7]和董劍[16]研究結果一致。王曉樂等[17]報道，T細胞亦可分為CD4+CD28+、CD4+CD28-、CD8+CD28+、CD8+CD28-具有不同表型和功能的亞群，SLE患者外周血T細胞CD28分子表達水平顯著降低，包括CD4+CD28+和CD8+CD28+ T細胞亞群細胞均明顯減少，而以CD4+CD28+細胞降低更為明顯，故出現Th/Ts比值降低。Th與Ts細胞的相互制約及平衡對機體免疫應答具有重要的調節作用，兩亞群比例失調會產生免疫功能失常，因此Th/Ts比值代替了整體的免疫平衡[18]。

CD19+淋巴細胞即為B細胞，其功能為分泌抗體和激活T細胞。激活的T細胞可以輔助B細胞活化，其中可能包括自身反應性B細胞，后者分泌更多的自身抗體，最終加重SLE病情。已有研究證實，SLE患者血中與病情活動有關的B細胞以及分泌自身抗體的B細胞數量增加，從而導致自身抗體增多[10]。本研究發現，SLE組B細胞百分比高于健康對照組，SLE輕、中、重度活動期組B細胞百分比均高于健康對照組、穩定期組，B細胞百分比與SLEDAI評分呈正相關，與以往的報道一致[5，6，10，16]。

NK細胞是體內非特異性免疫效應細胞，對多種細胞，尤其是T、B淋巴細胞具有免疫調節作用，SLE活動期NK細胞減少，對T、B淋巴細胞免疫調節作用減弱，從而導致多種自身抗體產生[19]。活動期SLE患者經過治療，NK細胞計數有所增多，提示NK細胞在一定程度可以反映機體免疫失衡狀態。本研究結果顯示，SLE組NK細胞計數及百分比低于健康對照組，SLE輕、中、重度活動期組患者NK細胞計數均低于健康對照組、穩定期組，NK細胞計數與SLEDAI呈負相關，這與吳冰文等[5]、成傳芳等[6]和Puxeddu等[11]的研究結果相近。

綜上所述，SLE患者體內存在淋巴細胞平衡紊亂，T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞及NK細胞數量、百分比和(或)功能改變在SLE發生、發展各階段發揮著重要的作用，淋巴細胞亞群的監測不僅可以從細胞水平反映疾病病情，還可以幫助我們進一步探討SLE的發病機制，從而為臨床診斷與治療提供應用價值。

[參考文獻]

[1]黃志芳,李新倫,李紅霞，等.Th17細胞及白介素-17在系統性紅斑狼瘡發病中的作用[J].空軍醫學雜志,2014,30(1):28-30.

[2]陸在英，鐘南山.內科學[M].7版.北京.人民衛生出版社，2009：719-724.

[3]張琳,張偉.系統性紅斑狼瘡相關的生物標志物[J].中國免疫學雜志,2007,23(9):860-863.

[4]任娜,趙威,邱廣斌，等.系統性紅斑狼瘡患者的外周血淋巴細胞亞群結果分析[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(20):2449-2451.

[5]吳文冰,林一,陳雯，等.系統性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細胞亞群分析[J].實驗與檢驗醫學,2014(2):142-143,152.

[6]成傳芳,茹晉麗,羅靜，等.兒童系統性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細胞亞群與疾病活動的研究[J].中國藥物與臨床,2014(5):580-583.

[7]孫家祥,李艷,劉利洪，等.系統性紅斑狼瘡患者外周血T淋巴細胞亞群、免疫球蛋白及補體變化分析[J].臨床和實驗醫學雜志,2013,12(9):654-655.

[8]Lee J, Shin E K, Lee S Y,etal. Oestrogen up-regulates interleukin-21 production by CD4(+) T lymphocytes in patients with systemic lupus erythematosus[J].Immunology， 2014，142(4):573-580.

[9]Yang J H, Shen Q, Zhao D B,etal. Expression and clinical significance of inducible

co-stimulator on peripheral blood T lymphocyte subsets in patients with systemic lupus erythematosus[J].Chinese Medical Journal, 2005,85(5):318-323.

[10]Iikuni N, Louren?o E V, Hahn B H,etal. Cutting edge: Regulatory T cells directly suppress B cells in systemic lupus erythematosus[J].J Immunol， 2009，183(3):1518-1522.

[11]Puxeddu I, Bongiorni F, Chimenti D,etal. Cell surface expression of activating receptors and co-receptors on peripheral blood NK cells in systemic autoimmune diseases[J].Scand J Rheumatol， 2012，41(4):298-304.

[12]Griffiths B, Mosca M, Gordon C. Assessment of patients with systemic lupus erythematosus and the use of lupus disease activity indices[J].Best Pract Res Clin Rheumatol， 2005，19(5):685-708.

[13]Bombardier C, Gladman D D, Urowitz M B,etal. Derivation of the SLEDAI. A disease activity index for lupus patients. The Committee on Prognosis Studies in SLE[J].Arthritis Rheum， 1992，35(6):630-640.

[14]Schliesser U, Streitz M, Sawitzki B. Tregs: application for solid-organ transplantation[J].Curr Opin Organ Transplant, 2012,17(1):34-41.

[15]Stockinger B, Bourgeois C, Kassiotis G. CD4+ memory T cells: functional differentiation and homeostasis[J].Immunol Rev, 2006,211:39-48.

[16]董劍.系統性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細胞亞群的狀況研究[J].檢驗醫學與臨床，2013,10：132-133.

[17]王曉樂,邱潮林,吳秀梅，等.SLE患者外周血T細胞亞群凋亡特點及其相關機制的研究[J].中國免疫學雜志,2010,26(4):348-353,359.

[18]Friese M A, Fugger L. Pathogenic CD8(+) T cells in multiple sclerosis[J].Ann Neurol, 2009,66(2):132-141.

[19]萬臘根,鞠北華,黃清水,等.SLE病人自身抗體檢測的循證檢驗研究[J].實驗與檢驗醫學,2009,27(5):441-444.

(收稿時間：2014-12-02修回時間：2015-01-05)

·論著·

Changes and Clinical Significance of Peripheral Blood Lymphocyte Subsets in 380 Patients with Systemic Lupus Erythematosus

YANG Yu-feng1， ZHU Jian1， RU Jin-li2， CHE Guo-zhu2， JIN Zhi-yong2， SUN Hui-ping2, JIN Xue-qin2, CHEN Wei-hua2, LI Xiao-feng3(1. Department of Rheumatology and Immunology, General Hospital of PLA, Beijing 100039, China; 2. Department of Rheumatology and Immunology, 264 Hospital of PLA, Taiyuan 030001, China; 3. Department of Rheumatology, the Second Hospital of Shanxi Medical College, Taiyuan 030001, China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effects of T lymphocyte cell subsets, B-lymphocytes and NK cells changes in the pathogenesy and development of systemic lupus erythematosus (SLE). MethodsA total of 380 inpatients with SLE and 58 healthy controls taking medical examination were recruited in this study, and then the SLE inpatients were divided into inactive SLE subgroup (subgroup A,n=157), gentle active SLE subgroup (subgroup B，n=79), midrange active SLE subgroup (subgroup C,n=82) and severe active SLE subgroup (subgroup D,n=62). The counts and percentages of T-lymphocytes, B-lymphocytes, Th, Ts and NK cells in peripheral blood were detected in the four groups. The correlations between peripheral-blood lymphocyte subsets and disease activity indexes of SLE (SLEDAI) in SLE patients were also analyzed. ResultsIn active subgroups, the values of counts and percentages of T, Th and NK cells and Ts cell count were significantly lower than those in control group, while B-lymphocytes percentage was significantly higher than those in control group and inactive SLE subgroup (P<0.05). The counts of T, Th, Ts, NK cells and percentage of T cell were negatively correlated with SLEDAI score, while percentage of B cell was positively correlated with SLEDAI score (r=-0.347, -0.311, -0.326, -0.351, -0.318, 0.455，P<0.05). ConclusionThe changes of lymphocyte subsets in peripheral blood of SLE patients may be helpful in evaluating pathogenetic condition and diagnosis of the SLE.

[Key words]Immune system diseases； Lupus erythematosus, systemic； Lymphocyte subsets

[DOI]10.3969/j.issn.2095-140X.2015.05.019

[文獻標志碼][中國圖書資料分類號]R593.241A

[文章編號]2095-140X(2015)05-0069-04

[通訊作者]朱劍，E-mail:jian.jzhu@gmail.com

[基金項目][作者單位]100039 北京，解放軍總醫院風濕免疫科(楊宇峰、朱劍)；030001 太原，解放軍264醫院風濕免疫科(茹晉麗、車國柱、靳志勇、孫慧萍、靳雪琴、陳偉華)；030001 太原，山西醫科大學第二醫院風濕科(李小峰)