年輕宮頸鱗癌組織中微血管形成及c-Myc和COX-2表達的臨床病理研究

駱志紅,楊華英,孫冬霞,孔衛平

(　1.滄州河間張茜榮診所,河北 滄州 062450;2.邯鄲市中醫院婦科，河北 邯鄲 056001；

3.邯鄲市婦幼保健院病理科，河北 邯鄲 056002)

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年輕宮頸鱗癌組織中微血管形成及c-Myc和COX-2表達的臨床病理研究

駱志紅1,楊華英2※,孫冬霞3,孔衛平3

(1.滄州河間張茜榮診所,河北 滄州 062450;2.邯鄲市中醫院婦科，河北 邯鄲 056001；

3.邯鄲市婦幼保健院病理科，河北 邯鄲 056002)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.05.055

宮頸鱗癌(squamous carcinoma of cervix,SCC)是僅次于乳腺癌的第二大危害女性健康的腫瘤[1]，宮頸細胞學篩查的普遍應用使SCC得以早期發現和治療，其發病率和病死率有所下降，隨著當今社會性開放程度加劇，SCC發病年齡有年輕化趨勢，嚴重威脅年輕女性的健康，對年輕化SCC應引起社會警惕。針對SCC年輕患者，其術后復發、轉移等仍是治療的難題，隨著分子生物學的發展，人們認識到腫瘤的發展、轉移與基因異常有密切關系，可以認為腫瘤就是基因的疾病。本研究采用免疫組織化學鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(streptavidin-perosidase，SP)法檢測40例SCC中原癌基因(c-Myc)和環加氧酶2(cyclo-oxygenase-2,COX-2)表達及微血管密度(microvessel density,MVD)值情況，分析并探討兩者在其發生、發展和轉移中的作用,為臨床治療提供幫助。

1材料與方法

1.1材料將2007年1月至2011年12月邯鄲市婦幼保健院和邯鄲市中醫院手術切除的SCC組織標本398份中選取40例作為SCC組，患者年齡20~25歲，平均(29.5±1.5)歲；術前均未行放、化療及激素治療。病理分期為Ⅰ期24例、Ⅱ期16例；腫瘤組織為高分化19例、中分化12例、低分化9例；有淋巴轉移18例，無淋巴結轉移22例。同時選取門診就診并行宮頸錐形切除術的宮頸上皮內瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)標本31份，作為CIN組，患者年齡20~25歲，平均(31.4±1.7)歲。另選因子宮肌瘤或子宮脫垂而行手術切除子宮的正常宮頸組織(normal cervical endotheliment,NCE)標本10份作為NCE組，患者年齡20~25歲，平均(33.0±1.6)歲。

1.2c-Myc和COX-2表達檢測采用SP免疫組織化學法，按試劑盒說明書操作，取已知乳腺癌組織切片作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照。常規免疫組織化學SP試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司生產，批號：20120708996)，鼠抗人c-Myc單克隆抗體和鼠抗人COX-2單克隆抗體均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。每張切片均隨機觀察5個高倍視野(×400)，陽性細胞數<5%為(-)，5%～25%為(+)，>25%～50%為(++)，>50%為(+++)。以+～+++為陽性表達。MVD值(CD34標記)計數標準:按照Wei-dner等[1]的評判方法，在低倍(×100)視野下找到癌組織間質微血管密集部位，換到高倍(×400)視野下計數5個視野的微血管數，取其平均值為MVD值。

2結果

2.1c-Myc和COX-2的表達及MVD的變化3組中c-Myc與COX-2的陽性表達物質主要定位于細胞質，呈棕黃色顆粒，見圖1、圖2(封三)。SCC組的c-Myc和COX-2表達高于CIN組和NCE組，CIN組COX-2的表達高于NCE組(P<0.05)；SCC組MVD高于CIN組和NCE組(P<0.05)。見表1。

表1　各組c-Myc、COX-2和MVD比較

c-Myc：源癌基因；COX-2：環加氧酶2；MVP：微血管密度；a與NCE組比較，P<0.05；b與CIN組比較，P<0.05；△：χ2值，*：F值

2.2c-Myc和COX-2陽性表達與宮頸癌臨床病理參數的表達情況在宮頸癌組織中，c-Myc的陽性表達與組織學分化程度和是否有淋巴結轉移有關，隨著組織異型程度增高，分化水平降低，c-Myc陽性表達越強。COX-2陽性表達與宮頸癌臨床病理分期和淋巴結轉移有關，亦隨著臨床病理分期的增高和伴有淋巴結轉移，COX-2陽性表達也增強，見表2。

表2　c-Myc和COX-2陽性表達與宮頸癌

c-Myc：原癌基因；COX-2：環加氧酶2

2.3SCC組中c-Myc蛋白陽性表達組與陰性表達組MVD的差異SCC組中c-Myc蛋白陰性表達的MVD值為13.27±5.43，低于c-Myc蛋白陽性表達的MVD值為28.46±9.73，差異有統計學意義(t=3.994，P<0.01)。

2.4SCC組中COX-2蛋白陽性表達組與陰性表達組MVD的差異SCC組中COX-2蛋白陰性表達的MVD值為16.26±7.37，低于COX-2蛋白陽性表達的MVD值為37.43±9.47，差異有統計學意義(t=4.672，P<0.01)。

2.5COX-2和c-Myc在SCC中相關性分析在SCC組中，COX-2和c-Myc陽性表達呈顯著正相關(χ2=3.350,P=0.067,r=0.345，P=0.029)，見表3。

表3　COX-2和c-Myc在SCC中相關性分析　(例)

COX-2：環加氧酶2;c-Myc：原癌基因；SCC:宮頸鱗癌

3討論

宮頸癌作為最常見的婦科惡性腫瘤之一，危害女性患者的身心健康，有資料顯示宮頸癌患者已出現年輕化的趨勢[2]，其原因可能與性生活開始年齡提前、年輕女性吸煙者增多有關[3]。SCC占宮頸癌的80%～85%，本研究將20~35歲的年輕SCC患者作為研究對象，通過檢測其組織內c-Myc和COX-2的表達情況及MVD，進行分析研究。

c-Myc是1977年被發現的一種具有惡性轉化作用的癌基因，這種基因蛋白在細胞的增殖分化和細胞凋亡中起重要調控作用[4]，這些調控作用主要是通過調節細胞周期G1～S期來完成的，在惡性腫瘤組織中檢測c-Myc的表達水平明顯升高，促進G1期快速進入S期，引起細胞增殖、惡性轉化。另外通過對小鼠研究發現c-Myc不僅參與細胞的生長、增殖和細胞的分化等正常生理活動，可引起組織過早地形成血管，并且有c-Myc活化的細胞在惡變成癌時，能更早形成血管及發生轉移[5]。許多研究表明，在大腸癌、乳腺癌、小細胞肺癌[6-8]等能檢測到c-Myc表達增加、失調，并且通常與癌腫的侵襲性有著密切相關。相關研究證實，在SCC組織中c-Myc蛋白及信使RNA水平過度表達[9]，但是在國內c-Myc在年輕SCC組織中的報道研究少見，本研究重點關注c-Myc在年輕SCC組織中表達情況及MVD，研究表明癌基因C-Myc在NCE、CIN和SCC中的表達情況隨著病情的進展而升高，c-Myc在年輕SCC組織中的表達隨組織學分化程度增高，表達率增高，與組織學分化程度和是否淋巴結轉移有顯著相關性, 并且c-Myc表達陽性在有淋巴結轉移的MVD顯著高于無淋巴結轉移組(P<0.05)，隨著SCC分化程度的改變MVD也明顯不同(P<0.05)，說明c-Myc在SCC發展過程中表達逐漸增高，破壞宮頸組織的基膜，促進腫瘤細胞的浸潤，MVD值增高，新生大量微血管，為腫瘤細胞提供養分，參與腫瘤細胞的浸潤轉移,證實c-Myc蛋白的高表達可以繼續促使腫瘤進一步發展。

作為限速酶的一種COX廣泛存在于人體的各種組織細胞中，COX常見的異構酶包括COX-1和COX-2，其中COX-2在致瘤因素的刺激作用下可以表達，有學者研究發現，COX-2在大多數人類腫瘤組織細胞中明顯表達上調，通過刺激腫瘤細胞增殖和生長、抑制細胞凋亡、增加腫瘤細胞侵襲力在腫瘤組織中發揮作用[10]。另外有研究發現，COX-2對血管內皮生長因子的表達有上調作用，有可能促進腫瘤組織生長和腫瘤血管的形成[11]。此外，本研究結果顯示，從NCE組、CIN組、SCC組， COX-2蛋白表達逐漸增強(P<0.05)。在年輕SCC組中COX-2蛋白的表達與臨床分期和淋巴結轉移有關(P<0.05)，提示COX-2蛋白高表達可以促使年輕SCC進展，發生轉移，其作用機制可能通過COX-2蛋白調節促進增殖、抑制凋亡和促進微血管形成等方面參與腫瘤轉移的各個環節。

對于c-Myc和COX-2在年輕SCC組織中的相關性分析發現，兩者呈明顯正相關(P<0.05)，c-Myc作為Wnt通路中β聯蛋白下游的靶基因對腫瘤細胞增殖分化和凋亡進行調節，COX-2也可以通過β聯蛋白調節表達[12]，兩者共同作用于細胞周期，說明在細胞的增殖、分化及凋亡方面存在共同作用。總之，在40例年輕SCC組中c-Myc和COX-2處于過表達狀態，通過檢測兩者的表達情況有助于年輕女性SCC的診斷及病情判斷提供一定參考依據，但由于本次研究標本量不足，以上結論尚需要進一步擴大標本量進行驗證。

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摘要：目的研究原癌基因(c-Myc)和環加氧酶2(COX-2)在宮頸上皮內瘤樣病變(CIN)和宮頸鱗癌(SCC)中的表達及與微血管密度(MVD)的相關性，探討c-Myc和COX-2在SCC發生、發展中的相互關系及其表達與臨床病理聯系。方法選擇2007年1月至2011年12月邯鄲市婦幼保健院和邯鄲市中醫院手術切除的SCC組織標本40份、CIN標本31份，正常宮頸組織(NCE)10份，采用免疫組織化學SP法檢測各組c-Myc和COX-2的表達情況和微血管密度(MVD)(CD34標記)。分析兩者在SCC組中的陽性表達情況及與腫瘤分期早晚、病理分型高低、淋巴結轉移等病理指標之間的相互關系。結果c-Myc在SCC組中的陰性表達率為62.5%(25/40),顯著高于CIN組和NCE組(P<0.01),在SCC組中c-Myc的表達與分化及淋巴結轉移有關(P<0.01)。在SCC組中，COX-2陽性表達率為67.5%(27/40),顯著高于CIN組和NCE組(P<0.01),COX-2的表達與SCC的臨床病理分期及淋巴結轉移有關(P<0.01)。相關性分析表明兩者在SCC組織中的表達呈正相關，并且兩者在宮頸癌血管生成中可能具有協同作用。結論c-Myc和COX-2在年輕SCC發生、發展中起重要作用，c-Myc和COX-2上調表達可作為SCC預后的判斷指標。

關鍵詞：子宮內膜腫瘤；原癌基因蛋白；環加氧酶2蛋白；微血管密度；免疫組織化學

Study on the Expression of c-Myc and COX-2 in Cervix Neoplasms of Young Women and Their Correlation with the Formation of MicrovesselsLUOZhi-hong1,YANGHua-ying2,SUNDong-xia3,KONGWei-ping3. (1.CangzhouHejianZhangQianrongClinic,Cangzhou062450,China; 2.DepartmentofGynaecology,HandanHospitalofTraditionalChineseMedicine,Handan056001,China； 3.DepartmentofPathology,HandanMaternalandChildHealthCareHospital,Handan056002,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression of COX-2 and c-Myc in cervical intraepithelial neoplasia(CIN) and squamous cell carcinoma(SCC) of young women under 35,and their correlation with microvessel density(MVD),so as to explore the correlation of COX-2 and c-Myc with the incidence and progression of SCC,as well as the correlation of their expression with clinical pathology.MethodsCervical tissue samples of 40 young patients with SCC,samples of 31 young patients with CIN and samples of 10 young patients with normal cervical tissues admitted in Handan Maternal and Child Health Care Hospital and Handan Hospital of Traditional Chinese Medicine were selected as research objects,the expressions of COX-2,c-Myc and microvessel density(MVD) labeled by CD43of all the samples were detected by immunohistochemistry S-P method,and the positive expression status of COX-2 and c-Myc in SCC tissues,as well as their relationship with neoplasm staging,pathological type,and lymph node metastasis were analyzed.ResultsThe positive expression rate of c-Myc in SCC was 62.5%(25/40)，which was significantly higher than that in CIN and normal cervical tissues(P<0.01),the expression of c-Myc was correlated with myometrial invasion and lymph node metastasis(P<0.01).The expression rate of COX-2 in SCC was 67.5%(27/40),which was significantly higher than that in CIN and normal cervical tissues (P<0.01),the expression of COX-2 was correlated with the pathological stage of SCC and lymph node metastasis (P<0.01).It turned out that the expression of COX-2 and c-Myc were positively correlated in SCC,and such expression had synergistic effect on the formation of microvessels in cervical carcinoma.ConclusionCOX-2 and c-Myc play important roles in the incidence and progression of SCC,the high expression of COX-2 and c-Myc can be the indicator for the prognosis of SCC.

Key words:Endometrial neoplasms; c-Myc; Cyclooxygenase-2; Microvessel density; Immunohistochemistry

收稿日期：2013-08-23修回日期：2014-09-10編輯：相丹峰

中圖分類號：R737.33

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)05-0911-03