HPLC-ELSD法同時測定感愈膠囊中膽酸和豬去氧膽酸的含量

王 蕾，仇其原

鹽城市藥品檢驗所，鹽城 224002

HPLC-ELSD法同時測定感愈膠囊中膽酸和豬去氧膽酸的含量

王 蕾，仇其原

鹽城市藥品檢驗所，鹽城 224002

目的：建立HPLC-ELSD法同時測定感愈膠囊中膽酸和豬去氧膽酸的含量。方法：采用Capcell PAK MGⅡ C18色譜柱，以乙腈-水（55∶45）為流動相進行測定。結果：膽酸和豬去氧膽酸分別在0.0614～0.3684 mg·mL-1（r=0.9995）和0.0423～0.2538 mg·mL-1（r=0.9992）范圍內進樣量與峰面積的對數具有良好線性關系；兩者平均回收率分別為99.52%、99.83%，RSD分別為0.74%、0.87%（n=6）。結論：本法簡便、準確、分離效果好，可用于感愈膠囊的質量控制。

感愈膠囊；膽酸；豬去氧膽酸；HPLC-ELSD法；含量測定

感愈膠囊是由板藍根、金銀花、人工牛黃、對乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺等制備而成的復方制劑。主要用于風熱感冒所致的發熱、流汗、鼻塞、咽痛、咳嗽。現行質量標準“含量測定”項下僅收載對乙酰氨基酚和鹽酸金剛烷胺的含量[1]。其中人工牛黃具有清熱解毒、化痰定驚的作用，而膽酸和豬去氧膽酸是其主要成分，為了更好地控制感愈膠囊的質量，筆者參考文獻[2-3]，建立了HPLC-ELSD法同時測定感愈膠囊中膽酸和豬去氧膽酸的含量，結果表明該法靈敏度、穩定性和重現性均能滿足測定要求，是一種檢測感愈膠囊中膽酸和豬去氧膽酸的有效方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200 Series高效液相色譜儀；Varian 380-LC ELSD檢測器；XS205DU電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

膽酸對照品 （批號：100078-200414，純度98%），豬去氧膽酸對照品（批號：100087-200610，純度97.3%），均為中國藥品生物制品檢定所提供；感愈膠囊（每粒含人工牛黃10 mg，通藥制藥集團股份有限公司，批號為130503、130609、130912）；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 精密稱取膽酸對照品30.70 mg與豬去氧膽酸對照品21.15 mg，置于50 mL量瓶中，加甲醇適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。精密量取貯備液3 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每毫升含膽酸0.1842 mg、豬去氧膽酸0.1269 mg的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液 取感愈膠囊10粒，精密稱定，研細，混勻，精密稱取內容物1.0 g置10 mL量瓶中，加甲醇適量超聲處理30 min，取出，放至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：Capcell PAK MGⅡC18（4.6mm×150mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（55∶45）；流速：0.6 mL·min-1；柱溫：30℃；進樣量：10 μL；ELSD檢測器漂移溫度為100℃；霧化氣體為空氣，氣流速度為1.8 L·min-1。

2.3 專屬性試驗

在“2.2”色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，在此條件下，膽酸與豬去氧膽酸的分離度符合規定，峰形良好，陰性樣品無干擾。結果見圖1。

圖1 對照品（A）、供試品（B）、陰性對照（C）色譜峰圖

2.4 線性關系考察

分別精密吸取對照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL各置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。在“2.2”色譜條件進樣測定。以進樣量對數值（X）為橫坐標，峰面積對數值（Y）為縱坐標，制得膽酸、豬去氧膽酸的回歸方程分別為Y=1.4662X+1.7837，r=0.9995和Y=1.5328X+1.6976，r=0.9992。結果表明，膽酸和豬去氧膽酸分別在0.0614～0.3684 mg· mL-1、0.0423～0.2538 mg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.5 進樣精密度試驗

精密吸取“2.1.1”項下對照品溶液10 μL，在“2.2”色譜條件下重復進樣6次，測得峰面積的RSD（n= 6）分別為1.02%、0.98%。結果表明進樣精密度良好。

2.6 重復性試驗

取同批次樣品（批號130503）5份，按“2.1.2”項方法制備供試品溶液，按“2.2”項色譜條件測定，結果膽酸、豬去氧膽酸含量的RSD分別為0.87%、0.92%。

2.7 穩定性試驗

取同一批次樣品（批號130503），按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取同一供試品溶液10 μL，于0、2、4、8、12、24 h進樣，注入液相色譜儀，按“2.2”項下色譜條件測定，記錄色譜峰面積。結果膽酸和豬去氧膽酸峰面積的RSD分別為0.95%、1.01%（n=6），表明樣品在24 h內穩定性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量感愈膠囊（批號130503）的內容物約0.5 g共6份，精密稱定，分別置10 mL量瓶中，精密加入對照品溶液3 mL，按“2.1.2”項方法制備供試品溶液并測定含量，計算回收率，見表1。

2.9 樣品含量測定

取3批感愈膠囊，照“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，以“2.2”項下色譜條件測定，按外標法計算。結果樣品中膽酸的含量為0.73、0.75、0.69 mg/粒，豬去氧膽酸的含量為0.45、0.43、0.41 mg/粒（n=5）。

表1 膽酸和豬去氧膽酸加樣回收試驗結果

3 討 論

膽酸和豬去氧膽酸的紫外吸收較弱，如按《中國藥典》2010版一部“清開靈注射液膽酸”項下測定波長192 nm檢測[2]，基線噪聲較大，供試品溶液中膽酸和豬去氧膽酸不能分離。經試驗，采用HPLCELSD法同時測定膽酸和豬去氧膽酸的含量，簡化了實驗操作，提高了測定的靈敏度，同時具有基線平穩、峰形良好等優點。

[1] 國家藥品監督管理局標準（試行）WS-10368（ZD-0368）-2002-2012Z[S].

[2] 國家藥典委員會.中華人共和國藥典：一部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：1110-1.

[3] 羅曉茹，曹 紅，邢俊波，等.人工牛黃及其制劑中膽酸含量測定的研究進展[J].解放軍藥學學報，2009，25（3）：247-9.

Determination of Cholalic Acid and Hyodeoxycholic Acid in Ganyu Capsules by HPLC-ELSD

WANG Lei,QIU Qi-yuan
Yancheng Institute for Drug Control,Yancheng 224002

Objective:To simultaneously determine cholic acid and hyodeoxycholic acid in Ganyu capsules by an HPLC-ELSD method.Methods:The column was Capcell PAK MGⅡ C18,the mobile phase was acetonitriles-water (55∶45);ELSD was used for detection.Results:The linear ranges of cholalic acid and hyodeoxycholic acid were 0.0614-0.3684 mg·mL-1(r=0.9995)and 0.0443-0.2538 mg·mL-1(r=0.9992), respectively,with average recoveries at 99.52%(RSD=0.74%,n=6)and 99.83%(RSD=0.87%,n=6)respectively.Conclusion:The method is simple and accurate with good separation,and it is applicable for the quality control of Ganyu capsules.

Ganyu capsules;Cholalic acid;Hyodeoxycholic acid;HPLC-ELSD;Determination

R927.2

A

1673-7806（2015）06-571-02

王蕾，女，副主任藥師 E-mail:hujun7273@126.com

2015-05-13

2015-08-10