視黃醇結合蛋白、尿微量白蛋白檢測診斷糖尿病合并冠心病患者冠狀動脈病變程度臨床價值

張建興,江志忠

(南方醫科大學第五附屬醫院心內科，廣州 510900)

視黃醇結合蛋白、尿微量白蛋白檢測診斷糖尿病合并冠心病患者冠狀動脈病變程度臨床價值

張建興,江志忠※

(南方醫科大學第五附屬醫院心內科，廣州 510900)

摘要：目的探討視黃醇結合蛋白(RBP)、尿微量白蛋白(MA)用于預測合并糖尿病的冠心病患者冠狀動脈病變程度的可能性。方法選取2013年10月至2015 年5月南方醫科大學第五附屬醫院收治的冠心病合并糖尿病患者43例作為糖尿病組，冠心病未合并糖尿病患者43例作為非糖尿病組，均行冠狀動脈造影檢查，采用雙抗酶聯免疫吸附試驗法檢測血清中RBP 4水平，采用比濁法檢測MA水平。結果糖尿病組RBP4和MA水平顯著高于非糖尿病組 [(70±15) μg/L比(43±9) μg/L,(68±16) μg/L比(34±10) μg/L]，差異有統計學意義(P<0.05)。糖尿病組患者的冠狀動脈病變血管數和冠狀動脈病變評分顯著高于非糖尿病組 [(2.64±0.84)支比(1.32±0.23)支、(8.2±3.3)分比(5.6±2.8)分]，差異有統計學意義(P<0.05)。聯合RBP4和MA與冠狀動脈病變血管數呈正相關(r=0.803,0.892,P<0.01)，與冠狀動脈病變評分呈正相關(r=0.821，0.874，P<0.05)。結論冠心病合并糖尿病患者的冠狀動脈病變程度與RBP和MA密切相關，RBP、MA的檢測可為冠心病患者冠狀動脈病變程度的診斷提供依據。

關鍵詞：糖尿病；冠心病；視黃醇結合蛋白；尿微量白蛋白；病變程度

糖尿病是一種血糖水平慢性增高的代謝疾病，主要并發癥為糖尿病腎病[1-2]。近年來，隨著人們生活水平的提高，糖尿病的發生率逐年增長[3]。糖尿病和冠心病關系密切，冠心病大部分是由于冠狀動脈粥樣硬化所致[4]。糖尿病是引發冠心病的重要因素之一，冠心病合并糖尿病加重患者的冠狀動脈病變程度，妨礙冠狀動脈側支循環，使患者病死率上升，并且近年來冠心病合并糖尿病發病年輕化。視黃醇結合蛋白(retinol binding protein，RBP)4屬于脂質運載蛋白超家族，負責結合轉運維生素A的代謝產物，作為脂肪因子參與胰島素抵抗，并且用于肝病及腎病的早期診斷[5-7]。尿微量白蛋白(microalbuminuria,MA)指尿中排泄的微量白蛋白，生理條件下尿液中水平較低，是預測糖尿病腎病的指標，能夠反映腎臟異常蛋白質滲漏。目前，MA是預測心血管風險的重要指標[8-9]。本研究主要分析RBP、MA水平與冠狀動脈病變程度的關系，探討RBP、MA用于預測合并糖尿病的冠心病患者冠狀動脈病變程度的可能性。

1資料與方法

1.1一般資料選取2013年10月至2015 年5月南方醫科大學第五附屬醫院收治的冠心病合并糖尿病患者43例作為糖尿病組，冠心病未合并糖尿病患者43例作為非糖尿病組。其中糖尿病組男22例、女21 例，年齡30~76歲，平均(46±5) 歲；病程7~13年，平均(10.3±1.4)歲；非糖尿病組男20例、女23 例，年齡32~75歲，平均(47±5)歲，病程8~13年，平均(10.2±1.2) 歲；患者均診斷為冠心病，且行冠狀動脈造影檢查。入選標準：心肌酶譜正常，冠狀動脈造影未見顯著閉塞病變，發作前后心電圖存在明顯動態演變。患者均排除心臟瓣膜病，心肌病，體質量過輕，過度肥胖，全身免疫系統疾病，急慢性感染疾病，腫瘤，嚴重肝腎功能不全。兩組患者的性別、年齡、病程等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經本院倫理委員會審批，患者均簽署知情同意書。

1.2血管病變程度判定 采用德國飛利浦HSC型設備，優維顯造影劑，Juikin′s導管技術，患者造影導管經右橈動脈進入，多種常規體位投照，造影結果由兩位以上專家鑒定。

冠狀動脈病變血管數評定標準：左主干病變為雙支病變；除此，單支冠狀動脈血管內徑狹窄程度≥50%為1支血管病變；2支血管內徑狹窄程度≥50%為2支血管病變；3支血管內徑狹窄程度≥50%為3支血管病變；左主干合并右冠狀動脈病變為3支血管病變。

根據美國心臟學會標準[10]將冠狀動脈病變評分分為6個等級：5分為狹窄程度99%~100%；4分為狹窄程度90%~98%；3分為狹窄程度75%~89%；2分為狹窄程度50%~74%；1分為狹窄程度25%~49%；0分為狹窄程度≤24%。

1.3實驗材料 抗人RBP4抗體(北京博奧森生物技術有限公司)；辣根酶標記的羊抗兔IgG(稀釋度為1∶200～500)(北京博奧森生物技術有限公司)；微量移液器(德國艾本德)；UVP凝膠成像系統(美國VILBER LOURM)；DU800核酸蛋白分析儀(美國貝克曼公司)；渦旋混合儀VX-200型(美國萊伯特公司)；離心機3K30型(德國西格瑪公司)；超低溫冰箱(日本三洋電器集團)；-20 ℃冰箱SCD-2166XZ型(青島海爾)；電子天平(德國賽多利斯科學儀器(北京)有限公司)；全自動特定蛋白分析儀ARRAY360(美國貝克曼公司)；酶標儀MODEL450(美國伯樂公司)。

1.4檢測指標所有患者入院24 h內清晨空腹抽取靜脈血5 mL，采用雙抗酶聯免疫吸附試驗法檢測血清中RBP4的水平；所有患者入院24 h內清晨留取中段尿5 mL，患者的尿樣品不添加防腐劑，采用比濁法檢測尿中微量白蛋白的水平。

1.5檢測方法

1.5.1RBP4檢測采用雙抗酶聯免疫吸附試驗法檢測，將患者血液樣本置于肝素鋰管，混勻，以離心半徑12 cm，轉速為3000 r/min離心10 min，分離血清，取0.5 mL上清置于聚對苯乙炔管，保存于-80 ℃待測，在酶標板上包埋抗人RBP4單抗，抗人RBP4單抗結合待測樣品和標準品，添加生物素化的抗人RBP4抗體，形成免疫復合物，通過辣根酶標記的羊抗兔IgG結合生物素，添加3,3′,5,5′-四甲基聯苯胺底物，顯藍色，加入硫酸終止液，顯黃色，在波長450 nm處檢測樣品的光密度值，繪制標準曲線得到樣品RBP4濃度，RBP4濃度和光密度值成正比。

1.5.2MA檢測采用比濁法檢測，將患者的尿液樣品以離心半徑12 cm，轉速為3000 r/min，離心10 min。取10 μL上清置于離心管，加入50 μL抗血清，反應溫度為37 ℃，在波長340 nm 處檢測樣品的光密度值，繪制標準曲線得到樣品MA濃度。設備為全自動特定蛋白分析儀ARRAY360，配套試劑和設備均由美國貝克曼公司提供。

2結果

2.1兩組患者RBP4和MA水平比較糖尿病組RBP4為(70±15) μg/L，MA為(68±16) μg/L；非糖尿病組RBP4為(43±9) μg/L，MA為(34±10) μg/L，糖尿病組的RBP4和MA水平均顯著高于非糖尿病組，差異有統計學意義(t=9.894,11.673,P<0.01)。

2.2兩組患者冠狀動脈病變程度比較糖尿病組冠狀動脈病變血管數為(2.64±0.84)支，冠狀動脈病變評分為(8.2±3.3)分；非糖尿病組冠狀動脈病變血管數為(1.32±0.23)支，冠狀動脈病變評分為(5.6±2.8)分，糖尿病組患者的冠狀動脈病變血管數和冠狀動脈病變評分均顯著高于非糖尿病組，差異有統計學意義(t=9.939,3.898,P<0.01)。

2.3RBP4和MA與冠狀動脈病變程度的關系RBP4和MA與冠狀動脈病變血管數呈正相關(r=0.803,0.892,P<0.05)，與冠狀動脈病變評分呈正相關(r=0.821，0.874，P<0.05)。

3討論

目前，冠心病是一種長期慢性炎癥疾病，冠狀動脈粥樣硬化是其主要原因[11-12]。動脈粥樣硬化的病理過程為：單核細胞長期停留在血管，入侵血管內膜，隨后轉化成巨噬細胞，導致趨化因子、炎性因子、氧化酶類及細胞外基質等增生，形成血栓，動脈粥樣斑塊纖維帽被降解，粥樣斑塊破裂，血栓脫落，血管痙攣，導致急性冠狀動脈綜合征。目前，預防冠心病是醫療衛生界研究的重要課題。RBP是一種單鏈蛋白質，屬于脂質運載蛋白超家族，負責結合轉運維生素A的代謝產物。研究表明，RBP參與胰島素抵抗，并與血脂異常、糖尿病腎病、體質指數等有關[13-15]。降低血脂能夠降低冠心病的發生率，但不能治療冠心病。2型糖尿病及代謝綜合征患者體內RBP4水平上升[16]。MA指尿中排泄的微量白蛋白，白蛋白是血液中的一種正常蛋白質，生理條件下尿液中白蛋白水平較低。研究表明，MA是預測糖尿病腎病的指標，能夠反映腎臟異常蛋白質滲漏[15]。糖尿病患者腎小球對白蛋白吸收量降低，使尿中白蛋白水平增加[17]。MA是冠狀動脈病變評分的獨立因素，并且影響冠狀動脈病變血管數。

本研究結果表明，糖尿病組患者的RBP4較非糖尿病組顯著上升。糖尿病患者體內存在游離-RBP4正反饋信號，增強肝臟組織釋放RBP4，而且糖尿病患者腎小球過濾功能受損，因此，導致血清中RBP4水平上升。糖尿病組患者的MA較非糖尿病組顯著上升。一方面由于糖尿病患者血液黏滯，膠原硬化，腎小球過濾功能受損；另一方面，冠心病腎小球血壓較高，腎小球對白蛋白吸收量降低，使尿中白蛋白水平增加。糖尿病組患者的冠狀動脈病變血管數和冠狀動脈病變評分較非糖尿病組均有顯著上升。研究表明，高血糖水平對冠狀動脈病變起重要作用。高胰島素血癥引起血管內平滑肌細胞增殖，細胞內脂質合成，引發動脈粥樣硬化，導致冠心病。RBP4和MA與冠狀動脈病變程度呈正相關(P<0.05)，與冠狀動脈病變評分均呈正相關(P<0.05)。由此可見，RBP4和MA的診斷有利于早期發現患者病情，并進行干預治療，延緩患者病情的發生、發展。糖尿病、冠心病早期，患者的體征和臨床癥狀不明顯，需要通過實驗室檢查手段。冠心病等疾病的預測、診斷具有多種途徑，冠狀動脈造影等技術存在創傷，且費用較高，不能作為常規檢測手段。動態心電圖等無創檢測手段僅能夠對部分冠心病預測、診斷。因此，對冠心病患者進行特殊準確的指標檢查是非常必要的，這樣才能夠做到冠心病的早預防、早診斷、早治療。

綜上所述，冠心病合并糖尿病患者的冠狀動脈病變程度與RBP和MA密切相關，RBP和MA聯合檢測可以用于預測冠狀動脈病變程度，并且為臨床診斷提供依據，為冠心病合并糖尿病患者的及時治療提供時機。

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The Clinical Value of Retinol Binding Protein, Urinary Albumin Detection for Diagnosis of Severity of Coronary Artery Disease in Diabetes Mellitus Patients with Coronary Heart DiseaseZHANGJian-xing,JIANGZhi-zhong. (DepartmentofCardiology，theFifthAffiliatedHospitalofSouthernMedicalUniversity,Guangzhou510900,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the feasibility for retinol binding protein(RBP) and urinary microalbuminuria(MA) to predict the lesion degree in coronary heart disease combined with diabetes mellitus.MethodsA total of 86 patients with coronary heart disease were chosen in the Fifth Affiliated Hospital of Southern Medical University from Oct.2013 to May 2015 as study group.43 cases with diabetes as diabetes group and 43 cases without diabetes as non-diabetes group.They all received coronary angiogram treatment,and enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) was used to measure the plasma concentrations of RBP4;turbidimetry was used to test urinary MA.ResultsSerum RBP4, urinary MA levels of the diabetes group were significantly higher than those in control group [(70±15) μg/L vs (43±9) μg/L,(68±16) μg/L vs (34±10) μg/L](P<0.05).Number and score of coronary artery lesion in diabetes group were significantly higher than those in the control group[(2.64±0.84) vessel vs (1.32±0.23) vessel,(8.2±3.3) point vs (5.6±2.8) point](P<0.05).The serum RBP4,urinary MA levels and lesion blood vessel number of coronary artery disease were positively correlated(r=0.803,0.892,P<0.01).The serum RBP4, urinary MA levels and grade of coronary artery disease were positively correlated(r=0.821，0.874，P<0.05).ConclusionThe lesion degree is closely related to RBP and MA in coronary heart disease combined with diabetes mellitus,which have clinical diagnostic value for the lesion degree of coronary heart disease.

Key words:Diabetes mellitus; Coronary heart disease; Retinol binding protein; Microalbuminuria; Lesion degree

收稿日期：2015-06-24修回日期：2015-07-27編輯：相丹峰

基金項目：廣州市醫藥衛生科技項目(20151A011110)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.22.045

中圖分類號：R587

文獻標識碼：A

文章編號：1006-2084(2015)22-4152-03