新型接頭蛋白CARD10在結直腸癌中的表達與意義

趙婷婷　刑鵬　李繼光

·論著·

新型接頭蛋白CARD10在結直腸癌中的表達與意義

趙婷婷刑鵬李繼光

【摘要】目的檢測CARD10(caspase recruitment domain family member 10)蛋白在結直腸癌組織及其癌旁粘膜組織中的表達水平，結合臨床病理資料，探討CARD10與結直腸癌患者臨床病理特征的關系。方法利用免疫組化方法檢測147例結直腸癌組織及其癌旁粘膜組織中的CARD10表達情況，使用SPSS 19.0軟件進行統計分析。結果在結直腸癌組織和癌旁黏膜組織中，CARD10陽性表達分別為46例(31.29%)和10例(6.80%)，CARD10在結直腸癌中的表達上調(P<0.01)。CARD10在結直腸癌組織中的表達與腫瘤的TNM分期(P<0.01)、浸潤深度(P<0.05)、淋巴結轉移(P<0.01)、遠處轉移(P<0.05)以及Ki-67表達明顯相關(P<0.01)。結論CARD10在結直腸癌的發生發展中可能發揮著腫瘤促進因子的作用。

【關鍵詞】結直腸腫瘤；免疫組織化學；CARD10

作者單位：110000沈陽，中國醫科大學腫瘤研究所

結直腸癌是世界最常見的腫瘤之一，在所有腫瘤中，結直腸癌的死亡率位列第二[1]。盡管結直腸癌根治術和術前、術后放化療已被廣泛應用，但結直腸癌的生存率仍不樂觀。因此，找到更多的結直腸癌的生物治療靶點十分必要。

轉錄因子NF-κB(nuclear factor kappa B)可以上調多種促癌基因進而參與調控包括結直腸癌在內的多種腫瘤的發生發展[2-6]。溶血磷脂酸LPA(Lysophosphatidic acid)能夠通過結合G蛋白偶聯受體進而激活核轉錄因子NF-κB的活性[7-8]。近年來有文獻報道新型接頭蛋白CARD10(caspase recruitment domain family,member10)能通過參與LPA-G蛋白偶聯受體激活NF-κB的過程，進而調控NF-κB的靶基因表達，從而調控多種惡性腫瘤的發生和發展[9-10]。目前，已有文獻報道CARD10的異常表達與膀胱癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌等惡性腫瘤的臨床分期相關[11-14]，但尚無文獻研究CARD10與結直腸癌的臨床特點的關系。因此，在本研究中，我們采用免疫組化技術檢測CARD10蛋白在結直腸癌組織中的表達水平，同時結合臨床病理資料，進一步探討CARD10與結直腸癌患者臨床病理特征的關系。

資料與方法

一、一般資料

本研究收集2006年至2008年中國醫科大學附屬第一醫院腫瘤外科切除的結直腸癌及其癌旁正常粘膜組織標本各147例。全部患者均未接受術前放療或化療，并且有完整的臨床病理資料。組織學分類根據WHO組織學分類標準劃分，臨床分期根據第七版結直腸癌TNM分期標準劃分。所有標本均采用武漢博士德公司的SABC法免疫組化試劑盒進行染色。簡要過程如下：石蠟包埋組織，常規切片(4 um)，組織切片常規脫蠟、水化，雙氧水阻斷內源性酶，緩沖液微波修復，室溫冷卻35分鐘，加入一抗抗人CARD10兔多克隆抗體(1：1000稀釋，Sigma，美國)或抗人Ki-67鼠單克隆抗體(1：500稀釋，Abcam，美國)于濕盒中37℃孵育4小時(PBS為陰性對照),加入二抗,置于濕盒中37℃孵育45分鐘,加入SABC液于濕盒中孵育30分鐘，最后加入后二氨基聯苯胺(DAB)顯色液顯色1～2 min,加入蘇木素復染液中復染4 min,鹽酸酒精分化,梯度酒精透明，中性樹膠封片。

二、免疫組化結果判定

CARD10免疫組化染色結果基于染色強度和染色陽性細胞比例進行綜合評分。評分標準如下。染色強度：細胞無染色為0分；細胞呈淺黃色為1分；細胞呈深黃或深棕色為2分。陽性染色細胞比例：無陽性染色細胞為0分；陽性染色細胞比例1~5%為1分；陽性染色細胞比例6%~25%為2分；陽性染色細胞比例26%~75%為3分；陽性染色細胞比例75~100%為4分。上述兩種判斷標準得分乘積為最終計分結果：0~3分為陰性表達；4~8分為陽性表達。Ki-67免疫組化染色結果基于陽性染色細胞比例，陽性染色細胞比例≥40%為Ki-67陽性表達，<40%為Ki-67陰性表達。

三、統計學方法

利用SPSS 19.0統計學軟件進行統計分析。利用卡方檢驗計算CARD10表達與臨床病理資料的關系，所有檢驗均以P<0.05為檢驗標準。

結　　果

免疫組化染色結果顯示，CARD10蛋白主要表達于細胞的細胞質中(圖1)。在癌旁黏膜組織中，CARD10陽性表達為10例(6.80%)，與之相反，在結直腸癌組織中，CARD10陽性表達為46例(31.29%)。CARD10在結直腸癌組織中表達明顯上調(P<0.01)。卡方檢驗結果表明，CARD10在結直腸癌組織中的表達與腫瘤的TNM分期(P<0.01)、浸潤深度(P<0.05)、淋巴結轉移(P<0.01)、遠處轉移(P<0.05)以及Ki-67表達明顯相關(P<0.01)，而與性別、年齡、分化程度無明顯相關性(P>0.05，表1)。從表1可以看出，與CARD10陰性表達患者相比，CARD10陽性表達的患者TNM分期及T分期更晚，并且發生淋巴結轉移、遠處轉移和Ki-67陽性的概率增加。

討　　論

大多數腫瘤均可以觀察到NF-κB的活化，并且活化的NF-κB可以調控腫瘤的進展。據報道，NF-κB活化后可以調控腫瘤的增殖、侵襲、遷徙、血管生成、炎癥反應、放化療抵抗等[15]。腫瘤中NF-κB活化的途徑是近年來研究的熱點，LPA通過結合G蛋白偶聯受體進而激活NF-κB的活性是一條經典的途徑[7-8]。近年來發現，CARD10能通過參與LPA-G蛋白偶聯受體激活NF-κB的過程，實現對NF-κB活性的調控，進而調控NF-κB的靶基因的表達[9-11]。因此，研究者們開始注意到CARD10對腫瘤的調控作用。Xie等報道，在卵巢癌中上調CARD10的表達可以通過調控cyclin D1,cyclin E,and Bcl-2的表達進而增強卵巢癌細胞的增殖活性和化療抵抗能力[16]。Du等報道，在胰腺癌中，下調腫瘤細胞的CARD10表達可以降低細胞的增殖、遷徙和侵襲能力，并且這種調控作用是通過NF-κB的靶基因Bcl-10介導的[13]。更重要的是，研究者們發現了CARD10在腫瘤中的表達與患者的臨床病理特點有著緊密的聯系[11-14]。但目前尚無文獻報道CARD10在結直腸癌中的表達與意義。

表1　CARD10的表達與臨床病理資料關系表

在本研究中，我們利用免疫組化在107例結直腸癌組織及癌旁粘膜組織檢測了CARD10的表達情況并且結合臨床病理治療進行了細致地分析。我們發現與癌旁粘膜組織相比，CARD10在結直腸癌組織中表達明顯上調，提示CARD10可能與結直腸癌的發生發展密切相關。進而我們研究了CARD10在結直腸癌中的表達情況與臨床病理資料的關系，我們發現CARD10的表達與腫瘤的TNM分期、浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移以及Ki-67表達明顯相關。與CARD10陰性表達患者相比，CARD10陽性表達的患者TNM分期更晚，浸潤深度更深、并且發生淋巴結轉移、遠處轉移和Ki-67陽性的概率增加。這個結果進一步說明了CARD10參與了對結直腸癌進展的調控，并且發揮著腫瘤促進因子的作用。這個結果也提示了CARD10很有可能是結直腸癌的一個治療靶點。

眾數周知，TNM分期是結直腸癌最重要的分期系統，TNM分期與患者預后極其相關[17]。同樣，淋巴結轉移、遠處轉移以及Ki-67的表達狀態亦是結直腸癌十分重要的預后因素[18-20]。鑒于本研究發現CARD10的表達與上述4個預后因素密切相關，我們推斷CARD10陽性表達患者與陰性表達患者有預后差異，并且CARD10很有可能是結直腸癌的獨立預后因素。我們將會在未來的研究中檢驗這一推斷。

CARD10在結直腸癌中的表達升高，并且與結直腸癌的TNM分期、浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移以及Ki-67表達明顯相關，提示CARD10在結直腸癌的發生發展中可能發揮著腫瘤促進因子的作用。

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(本文編輯：馬天翼)

趙婷婷，刑鵬，李繼光.新型接頭蛋白CARD10在結直腸癌中的表達與意義[J/CD].中華結直腸疾病電子雜志，2015，4(1)：58-61.

Expression and the significance of caspase recruitment domain family member10 in colorectal cancer

ZHAOTing-ting，XINGPeng，LIJi-guang

.TumorResearchInstituteofChinaMedicalUniversity，Shenyang110013，China.

Correspondingauthor：LIJi-guang，Email：13898829926@163.com.

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and the significance of CARD10(caspase recruitment domain family member 10)in colorectal cancer.MethodsThe expression of CARD10 was detected by immunohistochemistry.The statistic analysis was performed by SPSS 19.0.ResultsOverexpression of CARD10 was found in 46(31.29%)patients and 10(6.80%)patients in colorectal cancer tissues and tumor-adjacent mucosae,respectively.CARD10 was overexpressed in colorectal cancer(P<0.01).Overexpression of CARD10 in colorectal cancer correlated with TNM stage(P<0.01),tumor depth(P<0.05),nodal metastasis(P<0.01),distant metastasis(P<0.05),and Ki-67 status(P<0.01).ConclusionThis study demonstrated that CARD10 may play a role as tumor-promoting factor in colorectal cancer.

【Key words】Colorectal neoplasms；Immunohistochemistry；CARD10

(收稿日期：2015-01-20)

通訊作者：李繼光，Email：13898829926@163.com

基金項目:國家自然科學基金(81302125)

DOI：10.3877/cma.j.issn.2095-3224.2015.01.13