拉米夫定治療慢性乙型肝炎預后與HLA-DQ基因多態性的分析

劉文宣，高　霞，李保欣，李　濤，劉文聰，張曉琳*(.河北醫科大學公共衛生學院流行病與衛生統計學教研室，河北 石家莊 05007；.河北醫科大學第一醫院傳染病科，河北 石家莊 0500；.河北醫科大學第一醫院超聲科，河北 石家莊 0500)

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·論著·

拉米夫定治療慢性乙型肝炎預后與HLA-DQ基因多態性的分析

劉文宣1，高霞1，李保欣2，李濤1，劉文聰3，張曉琳1*(1.河北醫科大學公共衛生學院流行病與衛生統計學教研室，河北 石家莊 050017；2.河北醫科大學第一醫院傳染病科，河北 石家莊 050031；3.河北醫科大學第一醫院超聲科，河北 石家莊 050031)

[摘要]目的探討HLA-DQ基因rs2856718和rs927557的2個位點突變是否與拉米夫定(lamivudine，LAM)治療慢性乙型肝炎預后有關。方法采用調查問卷收集283例研究對象的一般資料，同時收集其外周血，提取DNA，用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF MS)實驗平臺進行DNA的SNPs分型，使用單因素及多因素Logistic回歸方法分析HLA-DQ基因多態性與LAM治療慢性乙型肝炎預后不同結局的關系。結果攜帶HLA-DQ基因 rs2856718G和rs9275572A的個體ALT應答的可能性增加(OR=1.732,P=0.034;OR=2.846,P<0.001)。另外，攜帶rs9275572A的個體DNA應答的可能性也增加(OR=2.387,P=0.007)。結論在中國北方漢族人群中，HLA-DQ的2個SNP位點(rs9275572和rs2856718)與LAM治療慢性乙型肝炎預后有關，rs9275572A和rs2856718G為ALT應答和DNA應答的保護性因素。

[關鍵詞]乙型肝炎，慢性；拉米夫定；多態性，單核苷酸

doi:10.3969/j.issn.1007-3205.2015.12.002

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是我國常見的傳染病，特別是慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)，給患者帶來巨大的身心壓力和經濟負擔，目前尚無特效治療方法。在我國及大部分亞洲地區，CHB是導致肝硬化(liver cirrhosis,LC)和原發性肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的主要原因[1]，肝硬化、高水平HBV DNA及丙氨酸轉氨酶(alanine aminotransferase，ALT)是HCC的重要危險因素[2]。對于HBV感染患者的治療主要是通過抑制病毒復制，達到限制或逆轉病情的目的。有效的治療措施可顯著提高CHB患者的生存率，降低并發癥的發生風險[3]。拉米夫定(lamivudine，LAM)是最早用于治療CHB的核苷類似物，能有效抑制HBV DNA及ALT水平，改善肝臟組織學病變，它抗病毒能力強，價格低廉，不良反應較小，到目前為止，仍被廣泛應用，尤其在部分亞洲國家[4]。然而，長期應用LAM治療可產生嚴重的耐藥性，其機制可能為HBV病毒變異所致，也可能與機體自身的遺傳因素有關。有研究表明，HLA基因可影響LAM治療CHB的預后[5]。本研究前期結果顯示，HLA-DQ基因的2個SNP位點(rs9275572和rs2856718)與HBV感染后的不同結局有關，故我們繼續探索上述2個位點突變是否與LAM治療后的不同結局存在關聯。

1資料與方法

1.1一般資料本研究的研究對象來源于石家莊市第五醫院、河北醫科大學第一醫院和河北醫科大學第四醫院，入院時間為2010年1月—2012年1月，經納入和排除標準篩選，入組研究對象包括CHB和LC患者，患者均首次單獨應用LAM治療，共283例。男性186例，女性97例，年齡39～61歲，平均(50.08±10.73)歲。病例診斷均符合中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會2010年聯合修訂的“病毒性肝炎防治方案”的診斷標準。

1.2療效判定對符合納入條件的LAM治療組患者治療6個月后，根據病毒學應答(DNA檢測不到或下降>2 log copies /mL)與否分為2組(DNA應答組與DNA非應答組)，根據生化學應答(ALT在正常參考值范圍)分為ALT應答組和ALT非應答組，療效判定標準參照“慢性乙型肝炎防治指南(2010年)”。

1.3研究方法本研究采用自行設計的調查問卷收集相關資料，調查問卷共3個部分：患者基本情況(性別、年齡、吸煙、飲酒、有無乙型肝炎疫苗接種史等)、發病情況(病程、病情、有無其他疾病、有無家族史等)和檢查結果(乙型肝炎5項、HBV DNA定量、ALT水平、AFP水平等)。同時，收集其外周血，提取DNA，用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS)實驗平臺進行DNA的SNPs分型。本研究所采用SNP分析模型為：共顯性模型、顯性模型、隱性模型。假設某一突變位點的野生堿基為W，突變堿基為V。在共顯性模型中定義該位點可能出現的3種基因型WW、WV、VV分別為0、1、2，基因型分析時的比較方式為WV/VV與WW比較；在顯性模型中定義該位點可能出現的3種基因型WW、WV、VV分別為0、1、1，基因型分析時的比較方式為WV+VV與WW比較；在隱性模型中定義該位點可能出現的3種基因型WW、WV、VV分別為0、0、1，基因型分析時的比較方式為VV與WW+WV比較。

2結果

2.1研究對象的一般資料

2.1.1DNA應答組與非應答組一般資料比較DNA應答組患者年齡、性別、治療前HBVDNA、ALT及AST水平差異均無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.1.2ALT應答組與非應答組一般資料比較ALT應答組患者年齡、性別、治療前HBVDNA、ALT及AST水平差異均無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表1　DNA應答組與非應答組一般資料比較

表2　ALT應答組與非應答組一般資料比較

2.2HLA-DQ多態性位點rs2856718與LAM治療后DNA應答及ALT應答的關系rs2856718與LAM治療后DNA應答無關聯，但與ALT應答有關，rs2856718A等位基因更容易出現ALT應答。在共顯性模型下(GGvsAA)，OR值為2.036(95%CI=1.234～3.064，P=0.002)；在顯性模型下(GG+AGvsAA)和隱性模型下(GGvsAA+AG)，OR值分別為1.732(95%CI=1.146～3.158，P=0.034)和1.952(95%CI=1.208～4.127，P=0.033)。見表3～6。

2.3HLA-DQ多態性位點rs9275572與LAM治療后DNA應答及ALT應答的關系rs9275572與LAM治療后DNA應答相關，rs9275572G等位基因更容易出現DNA應答。在共顯性模型下(AGvsGG:OR=1.987,95%CI=1.059～3.046，P=0.011;AAvsGG:OR=3.532,95%CI=1.752～9.546，P=0.004)、在顯性模型下(AA +AGvsGG:OR=2.387,95%CI=1.428～5.034，P=0.007)和隱性模型下(AAvsGG+AG:OR=3.841 95%CI=1.368～8.745，P=0.004)均具有相關性。

rs9275572基因多態性與ALT應答具有相關性，rs9275572G等位基因更容易出現ALT應答。在共顯性模型下(AGvsGG:OR=2.358,95%CI=1.462～4.258,P=0.002;AAvsGG:OR=3.083,95%CI=1.357～6.289,P=0.004)、在顯性模型下(AA +AGvsGG:OR=2.846,95%CI=1.591～5.163,P<0.001)和隱性模型下(AAvsGG+AG:OR=2.306,95%CI=1.247～5.528,P=0.029)均存在此關聯。見表3～6。

表3　DNA應答組與非應答組HLA-DQ基因rs2856718和rs9275572位點基因型頻率分布

表4　HLA-DQ基因rs2856718和rs9275572位點突變與DNA應答的關系分析

a:經調整年齡、性別、吸煙、飲酒因素的OR和OR95%CI

表5　ALT應答組HLA-DQ基因rs2856718和rs9275572位點基因型頻率分布

表6　HLA-DQ基因rs2856718和rs9275572位點突變與ALT應答的關系分析

a:經調整年齡、性別、吸煙、飲酒因素的OR和OR95%CI

3討論

本研究首次闡明HLA-DQ的2個SNP位點(rs9275572和rs2856718)與LAM治療后的DNA應答和ALT應答有關。攜帶rs9275572A堿基的CHB和LC患者，經LAM治療后出現DNA應答和ALT應答的可能性更高，在LAM治療后的DNA應答和ALT應答中起到保護作用，而Kumar等[6]報道的該位點的AA堿基為HCV感染的危險堿基，這可能與HBV和HCV的致病機制不同及研究人群不同有關，但我們的前期研究結果顯示該位點在HBV易感性和HBV自然清除中也同樣起到保護作用，與在LAM治療預后中結果一致。rs2856718G同樣為LAM治療后ALT應答的保護性因素。從遺傳學角度，結合我們的前期研究結果，可以證實無論是HBV易感性、HBV自然清除及感染后不同的結局，還是LAM治療后的病毒學應答和生化應答，HLA-DQ的SNP位點rs9275572和rs2856718均起到保護作用，攜帶rs9275572A和rs2856718G等位基因的個體，HBV易感性降低，HBV自然清除能力增高，DNA和ALT應答率增高。另外，Ahn等[7]報道，HLA-DQ基因的另外2個多態性位點rs3077 and rs9277535也與LAM治療后血清中的HBsAg水平有關。研究發現，LAM治療的作用靶點為HBV DNA P基因C區內的高度保守序列YMDD，YMDD突變為YVDD或YIDD，從而可導致LAM治療耐藥[8]。從我們的研究結果來看，LAM的抗病毒療效除了與HBV自身變異有關以外，還與機體自身的遺傳因素有關。在接下來的研究中，我們會進一步探索與LAM療效有關的其他基因位點。

本研究首次報道了HLA-DQ基因(rs2856718和rs9275572)與LAM治療預后的關聯，發現了可能影響LAM治療預后的SNP位點，證實了LAM治療預后可能受到遺傳和環境因素的共同影響，為更好地選擇合適的抗病毒藥物提供了理論基礎。本研究也具有一定的局限性，僅為雙向性研究，部分患者資料來自臨床病例，可能存在回憶偏倚，有待于擴大樣本量，采用前瞻性研究設計進一步證實二者的聯系。

[參考文獻]

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(本文編輯：劉斯靜)

Association ofHLA-DQpolymorphisms and different prognosis to lamivudine therapy

LIU Wen-xuan1,GAO Xia1,LI Bao-xin2,LI Tao1,LIU Wen-cong3,ZHANG Xiao-lin1*

(1.Department of Epidemiology and Statistics,the School of Public Health,Hebei Medical University,Shijiazhuang 050017,China;2.Department of Infections Diseases,the First Hospital of Hebei

Medical University,Shijiazhuang 050031，China;3.Department of Ultrasound,the First Hospital of Hebei Medical University,Shi Jiazhuang 050031,China)

[Abstract]ObjectiveTo study the relevance of two single-nucleotide polymorphisms (HLA-DQrs28567185 and rs9275572) with different prognosis to lamivudine therapy for chronic hepatitis B.MethodsA total of 283 samples were enrolled,and peripheral blood samples were collected in this study.The single-nucleotide polymorphisms in theHLA-DQregion were genotyped using matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry.Logistic regression was applied to case-control comparisons for the different phenotypic outcomes in co-dominant,dominant and recessive genetic models,adjusted for sex and age.ResultsThe study demonstrated the clear relevance ofHLA-DQrs2856718 and rs9275572 with DNA response and ALT response.HLA-DQrs2856718G and rs9275572A were strongly associated with increased risk of ALT response (OR=1.732;P=0.034;OR=2.846,P<0.001).Moreover,rs9275572A was also associated with increased risk of DNA response (OR=2.387,P=0.007).ConclusionOur study suggested thatHLA-DQloci were associated with the different prognosis to lamivudine therapy in Han Chinese,rs2856718G and rs9275572A were protective factors for ALT response and DNA response.

[Key words]hepatitis B,chronic；lamivudine；polymorphism,single nucleotide

[中圖分類號]R512.62

[文獻標志碼]A

[文章編號]1007-3205(2015)12-1371-04

*通訊作者。E-mail:807210221@qq.com

[作者簡介]劉文宣(1983-)，女，河北欒城人，河北醫科大學公

[基金項目]河北省科學技術研究與發展計劃(132777246)；河北

[收稿日期]2015-10-12；[修回日期]2015-11-20

省醫學科學研究重點課題(20150627；20150626；20090048)

共衛生學院講師，醫學博士，從事肝病的致病機制研究。