天麻蜜制片的質量標準研究Δ

左愛萍，王傳方，潘 梅，唐靖雯#，張麗艷，吳 浩，龔建平（.貴州威門藥業股份有限公司，貴陽 55008；.貴州同威生物科技有限公司，貴州畢節 55600；.貴陽中醫學院藥學院，貴陽 55000；.中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心，南昌 0006）

天麻是古今醫家常用的名貴中藥[1]，具有息風止痙、平抑肝陽，祛風通絡之功效。天麻蜜制片是由天麻中的佳品貴州鮮天麻精制而成的飲片。將鮮天麻切片加以蜂蜜蜜炙[2-4]，作用有三：其一，起協同作用，增強天麻的滋陰補血、益氣固精、安神定志等補益作用；其二，起矯味作用，賦予天麻良好的適口性，便于直接服用；其三，可保存天麻中的各種有效成分，充分發揮天麻的藥效作用。筆者通過考察天麻蜜制片的薄層色譜（TLC）鑒別、水分、灰分、浸出物，以及天麻素和對羥基苯甲醇的含量，初步建立了天麻蜜制片的質量標準。

1 材料

1.1 儀器

2695型高效液相色譜（HPLC）儀，包括二級管陣列檢測器（美國Waters 公司）；KQ-250DB 型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；AΜW2200型十萬分之一電子天平（日本島津公司）；pH酸度計（德國Sartorius公司）；SHB-IV型循環水式真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）。

1.2 藥品與試劑

天麻蜜制片（貴州同威生物科技有限公司，批號：20150101、20150102、20150103）；天麻對照藥材（批號：120944-201009）、天麻素對照品（批號：110807-201306，純度：96.8%）均購自中國食品藥品檢定研究院；對羥基苯甲醇對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號：20140302，純度：98%）；蜂蜜（貴州夜郎蜂業科技有限公司，批號：20150505）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果[5-9]

2.1 定性鑒別

2.1.1 天麻素 取樣品80 ℃下烘干，粉碎成粉末，精密稱取0.5 g，加70%甲醇5 ml，超聲（功率：250 W，頻率：40 kHz）處理30 min，濾過，取濾液，作為供試品溶液。另取天麻對照藥材0.5 g，同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。再取天麻素對照品適量，加甲醇制成每l ml 含l mg 的對照品溶液。按TLC 法（2010 版《中國藥典》（一部）附錄ⅥB）試驗，吸取上述溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（9∶1∶0.2，V/V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視。結果顯示，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，詳見圖1A。

圖1 薄層色譜圖A.天麻素；B.對羥基苯甲醇；1～3.供試品（批號：20150101、20150102、20150103）；4.對照藥材；5.對照品Fig 1 TLC chromatogramsA.gastrodin；B.benzyl alcohol；1-3.test sample（batch number：2015010，20150102，20150103）；4.reference cru herbs；5.reference substance

2.1.2 對羥基苯甲醇 按“2.1.1”項下方法制成供試品溶液和對照藥材溶液。另取對羥基苯甲醇對照品適量，加乙醇制成每l ml 含l mg 的對照品溶液。按TLC 法（2010 版《中國藥典》（一部）附錄ⅥB）試驗，吸取上述供試品溶液10 μ1，對照藥材溶液和對照品溶液各5 μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（1∶1，V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視。結果顯示，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，詳見圖1B。

2.2 檢查項目

2.2.1 水分 參照2010年版《中國藥典》（一部）附錄ⅨH水分測定法第一法，將樣品切碎至直徑＜3 mm的碎末，稱取碎末2 g，精密稱定，按規定方法測定，測得3 批樣品水分含量均＜35.0%，結果見表1。建議天麻蜜制片的水分不得超過40.0%。

表1 樣品水分、總灰分、浸出物含量測定結果Tab 1 Determination results of moisture，total ash and extract content of samples

2.2.2 總灰分 參照2010年版《中國藥典》（一部）附錄ⅨK灰分測定法，取“2.1.1”項下烘干樣品粉末2～4 g，按規定方法測定，測得3 批樣品總灰分均＜2.0%。建議天麻蜜制片的總灰分不得超過4.5%，結果見表1。

2.2.3 浸出物含量 參照2010年版《中國藥典》（一部）ⅩA浸出物測定法，取“2.1.1”項下烘干樣品粉末2～4 g，以75%乙醇為浸出溶劑，按規定方法測定，測得3 批樣品浸出物含量均＞40.0%，結果見表1。建議天麻蜜制片的浸出物含量不得少于40.0%。

2.3 含量測定

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.05%磷酸（3∶97，V/V）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：220 nm；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μl。在上述色譜條件下進樣測定，記錄色譜圖，理論板數均大于5 000，分離度均大于2，各成分基線分離良好，詳見圖1。

圖2 高效液相色譜圖A.混合對照品；B.供試品；C.蜜空白對照；1.天麻素；2.對羥基苯甲醇Fig 2 HPLC chromatogramsA.mixed reference substance；B.test sample；C.honey blank control；1.gastrodin；2.benzyl alcohol

2.3.2 混合對照品溶液的制備 取天麻素和對羥基苯甲醇對照品各適量，分別精密稱定，加乙腈-水溶液（3∶97，V/V，下同）制成每l ml含天麻素50 μg、對羥基苯甲醇25 μg的混合對照品溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 取“2.1.1”項下烘干樣品粉末約2 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50 ml，稱定質量，超聲（功率：120 W，頻率：40 kHz）處理30 min，放冷，再稱定質量，用乙醇補足減失的質量，濾過；精密量取續濾液10 ml，濃縮至近干無醇味，殘渣加乙腈-水溶液溶解，置于25 ml量瓶中，用乙腈-水溶液定容，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.3.4 蜜空白對照溶液的制備 取蜂蜜少許（＜1 g），置于100 ml量瓶中，搖勻，即得。

2.3.5 線性關系考察 分別精密稱取天麻素對照品10.08 mg、對羥基苯甲醇對照品10.12 mg，分別置于10 ml 量瓶中，加乙腈-水溶液溶解并定容，搖勻，即得天麻素、對羥基苯甲醇質量濃度分別為0.100 8、10.12 mg/ml 的單一對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液各10、5 ml，置同一20 ml棕色量瓶中，加乙腈-水溶液定容，搖勻，即得每1 ml 含天麻素0.504 μg、對羥基苯甲醇0.253 μg 的混合對照品溶液。精密量取上述混合對照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，分別置于20 ml量瓶中，用乙腈-水溶液定容，制成系列對照品貯備液。精密吸取上述系列對照品溶液各10 μl，按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以質量濃度（x，μg/ml）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得天麻素回歸方程為y＝8.554 1x+1.361 8（r＝0.999 9，n＝5），對羥基苯甲醇回歸方程為y＝15.687x+2.817 5（r＝0.999 9，n＝5）。結果表明，天麻素、羥基苯甲醇檢測質量濃度線性范圍分別為25.2～126.0、12.7～63.5 μg/ml。

2.3.6 精密度試驗 取“2.3.2”項下混合對照品溶液適量，連續進樣6次，記錄峰面積。結果，天麻素、羥基苯甲醇峰面積的RSD分別為0.37%、0.32%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.7 穩定性試驗 取“2.3.3”項下供試品溶液（批號：20140501）適量，分別于放置0、2、4、8、16、24 h時進樣測定，記錄峰面積。結果，天麻素、羥基苯甲醇面積的RSD 分別為0.83%、1.51%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內基本穩定。

2.3.8 重復性試驗 精密稱取同一批樣品（批號：20140501），干燥后制成粉末（過3號篩），精密稱定2 g，共6份，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，天麻素、羥基苯甲醇峰面積的RSD分別為1.03%、1.35%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.3.9 加樣回收率試驗 取已含量的樣品（批號：20140501）適量，共6 份，分別精密加入天麻素、對羥基苯甲醇對照品2.30、0.60 mg，按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，計算樣品含量，并計算加樣回收率，結果見表2。

表2 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 2 Results of recovery tests（n＝6）

2.3.10 樣品含量測定 取3 批樣品各適量，分別按“2.3.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，計算樣品的質量分數，結果見表3。

表3 樣品含量測定結果Tab 3 Results of contents determination of samples

由表2可知，3批天麻蜜制片中天麻素和對羥基苯甲醇總質量分數為0.29～0.33%，平均為0.30%。建議天麻素和對羥基苯甲醇總質量分數不得少于0.25%

3 討論

根據不同批次天麻蜜制片試驗測定結果，暫定天麻蜜制片水分不得超過40.0%，灰分不得超過4.5%，浸出物含量不得低于40.0%，天麻素和對羥基苯甲醇總質量分數不得少于0.25%。

在定性鑒別過程中，分別進行了天麻素和對羥基苯甲醇TLC鑒別，與2010 版《中國藥典》（一部）僅對天麻素進行定性鑒別的方法比較，文中鑒別方法可更好地控制制劑質量。而天麻素和對羥基苯甲醇極性相差不大，可在同一薄層板上顯示，但考慮2015版《中國藥典》（一部）TLC鑒定中，兩者是分開鑒定，故筆者亦將兩者分開鑒定。

本品含量測定采用天麻素和對羥基苯甲醇總質量分數主要有兩方面原因：其一，在分子結構上講，天麻素較對羥基苯甲醇多了一個β-D-吡喃葡萄糖，而此結構在不同環境下極易脫落，從而形成對羥基苯甲醇，所以為更準確地對天麻素進行質量控制，應計算二者總質量分數；其二，在2015 版《中國藥典》（一部）也將二者總質量分數作為含量測定指標。

綜上所述，該方法操作簡便、重復性好，可用于天麻蜜制片的質量控制。

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