不同石榴品種果實類黃酮物質組分和含量分析

朱峰等

摘要：以4個不同表現型石榴品種‘泰山紅、‘大青皮、‘墨石榴和‘三白為試材，利用高效液相色譜法（HPLC）分別測定果皮和果汁中楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等類黃酮含量。結果表明：4個品種的果皮、果汁中均存在這5種類黃酮物質，其中以楊梅酮和槲皮素含量最高。4個品種間類黃酮含量有差異。‘三白石榴果皮和果汁中的類黃酮總量均最高，分別達到377.5μg/g和82.0μg/g，‘泰山紅、‘大青皮和‘墨石榴果皮和果汁中類黃酮含量依次降低。此外，同一品種不同部位也有差異，‘三白果皮類黃酮總量是果汁的4.60倍，而‘泰山紅、‘墨石榴和‘大青皮依次是3.51、4.45、4.28倍。表明類黃酮含量在石榴不同品種以及同一品種果皮和果汁中均存在差異性。

關鍵詞：石榴；果皮；果汁；類黃酮；HPLC

中圖分類號：S665.401文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）01-0040-04

石榴（PunicagranatumL.）是傳統的栽培果樹之一，具有較高的食用、藥用及觀賞價值。目前，全世界有1000多個栽培品種[2]。石榴在中國已有2000多年的栽培歷史，據不完全統計，我國栽培面積目前已達到11.7×104hm2左右，居世界第一位，形成了山東棗莊、陜西臨潼、新疆葉城、云南蒙自、四川會理、河南開封、安徽懷遠等幾個石榴適生栽培區。

類黃酮具有結構和特征的多樣性，廣泛存在于水果、蔬菜、堅果、種子和莖皮中，是植物體內最重要的次生代謝產物之一，也是人類膳食不可缺少的組成部分[1]。研究表明，石榴中富含類黃酮物質，其果實提取物對心腦血管疾病、腫瘤、細菌感染等具有顯著的防治作用[3～8]。雖然石榴中的類黃酮研究開展較早，但已往對類黃酮研究主要集中在定性和總量測定[9，10]方面，且大都局限于單一品種。利用高效液相色譜法測定石榴類黃酮物質含量的研究較少[11]，對不同石榴品種果皮和果汁中類黃酮物質組分含量的研究尚未見相關報道。本試驗以4個不同表現型石榴品種為試材，采用高效液相色譜法（HPLC）對果皮、果汁中類黃酮組分（楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素）的含量進行了提取和測定，以揭示不同石榴品種類黃酮組分在含量上的差異，為石榴類黃酮物質的開發利用和良種選育提供理論依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試品種以山東省果樹研究所石榴種質資源圃中的‘泰山紅、‘大青皮、‘三白和‘墨石榴4個石榴品種為試材。該資源圃立地條件一致，常規管理。

1.1.2試劑以楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等5種類黃酮物質為標準品，其中楊梅酮購自Sigma公司、芹菜素購自ChromaDex公司，槲皮素、木犀草素和山奈素購自中國藥品生物制品檢定所。

1.1.3試驗設計每個品種每3株為一個小區，隨機區組排列，重復3次。

1.2試驗方法

取樣時，選取樹勢一致的植株，自樹體東南西北4個方向及高度一致的果枝采集果實。采摘后低溫條件下帶回實驗室，用削皮刀取得果皮，籽粒手工壓榨后經三層紗布過濾得到果汁。

采用Aglient1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）進行測定分析，甲醇、甲酸均為色譜級。

1.2.1類黃酮的提取取0.5g果皮和10g果汁，分別放于40ml62.5%的甲醇水溶液中，添加BHA（2g/L）。仔細加入6mol/LHCl10ml，使總體積達50ml，然后提取液在90℃水浴中回流2h，冷卻至室溫，超聲處理5min。取提取液10ml，經0.45μm濾膜過濾后用于HPLC測定。

1.2.2類黃酮標準溶液的配置分別取楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素1mg，用甲醇分別定容至5ml，超聲處理10min，得每個標準品的標準溶液，各取1ml混勻得到5種標準品混合液，配好的溶液于-20℃保存。

1.2.3HPLC分析采用Aglient1260高效液相色譜儀，配備Agilent1260VWD可變波長檢測器。色譜柱為ZORBAXSBC18柱（150mm×4.6mm，5μm），柱溫30℃。采用2%甲酸（A液）和甲醇溶液（B液）為流動相，進樣量為10μl。其中類黃酮分析時的流速為0.8ml/min，梯度洗脫程序：0～45min（80%A液，20%B液），45～60min（20%A液，80%B液）。

1.2.4類黃酮的定性及定量分析定性分析根據標準品的保留時間確定。定量分析采用標準曲線法。類黃酮總量為各組分含量的總和。

1.2.5統計分析采用Anova對數據進行差異顯著性分析。

2結果與分析

2.1類黃酮標準品色譜圖

類黃酮在確定的色譜條件下，取10μl標準品混合液進樣分析，得到標準品色譜圖（圖1）。5種類黃酮標準品流出順序分別為楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素和芹菜素。endprint

摘要：以4個不同表現型石榴品種‘泰山紅、‘大青皮、‘墨石榴和‘三白為試材，利用高效液相色譜法（HPLC）分別測定果皮和果汁中楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等類黃酮含量。結果表明：4個品種的果皮、果汁中均存在這5種類黃酮物質，其中以楊梅酮和槲皮素含量最高。4個品種間類黃酮含量有差異。‘三白石榴果皮和果汁中的類黃酮總量均最高，分別達到377.5μg/g和82.0μg/g，‘泰山紅、‘大青皮和‘墨石榴果皮和果汁中類黃酮含量依次降低。此外，同一品種不同部位也有差異，‘三白果皮類黃酮總量是果汁的4.60倍，而‘泰山紅、‘墨石榴和‘大青皮依次是3.51、4.45、4.28倍。表明類黃酮含量在石榴不同品種以及同一品種果皮和果汁中均存在差異性。

關鍵詞：石榴；果皮；果汁；類黃酮；HPLC

中圖分類號：S665.401文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）01-0040-04

石榴（PunicagranatumL.）是傳統的栽培果樹之一，具有較高的食用、藥用及觀賞價值。目前，全世界有1000多個栽培品種[2]。石榴在中國已有2000多年的栽培歷史，據不完全統計，我國栽培面積目前已達到11.7×104hm2左右，居世界第一位，形成了山東棗莊、陜西臨潼、新疆葉城、云南蒙自、四川會理、河南開封、安徽懷遠等幾個石榴適生栽培區。

類黃酮具有結構和特征的多樣性，廣泛存在于水果、蔬菜、堅果、種子和莖皮中，是植物體內最重要的次生代謝產物之一，也是人類膳食不可缺少的組成部分[1]。研究表明，石榴中富含類黃酮物質，其果實提取物對心腦血管疾病、腫瘤、細菌感染等具有顯著的防治作用[3～8]。雖然石榴中的類黃酮研究開展較早，但已往對類黃酮研究主要集中在定性和總量測定[9，10]方面，且大都局限于單一品種。利用高效液相色譜法測定石榴類黃酮物質含量的研究較少[11]，對不同石榴品種果皮和果汁中類黃酮物質組分含量的研究尚未見相關報道。本試驗以4個不同表現型石榴品種為試材，采用高效液相色譜法（HPLC）對果皮、果汁中類黃酮組分（楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素）的含量進行了提取和測定，以揭示不同石榴品種類黃酮組分在含量上的差異，為石榴類黃酮物質的開發利用和良種選育提供理論依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試品種以山東省果樹研究所石榴種質資源圃中的‘泰山紅、‘大青皮、‘三白和‘墨石榴4個石榴品種為試材。該資源圃立地條件一致，常規管理。

1.1.2試劑以楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等5種類黃酮物質為標準品，其中楊梅酮購自Sigma公司、芹菜素購自ChromaDex公司，槲皮素、木犀草素和山奈素購自中國藥品生物制品檢定所。

1.1.3試驗設計每個品種每3株為一個小區，隨機區組排列，重復3次。

1.2試驗方法

取樣時，選取樹勢一致的植株，自樹體東南西北4個方向及高度一致的果枝采集果實。采摘后低溫條件下帶回實驗室，用削皮刀取得果皮，籽粒手工壓榨后經三層紗布過濾得到果汁。

采用Aglient1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）進行測定分析，甲醇、甲酸均為色譜級。

1.2.1類黃酮的提取取0.5g果皮和10g果汁，分別放于40ml62.5%的甲醇水溶液中，添加BHA（2g/L）。仔細加入6mol/LHCl10ml，使總體積達50ml，然后提取液在90℃水浴中回流2h，冷卻至室溫，超聲處理5min。取提取液10ml，經0.45μm濾膜過濾后用于HPLC測定。

1.2.2類黃酮標準溶液的配置分別取楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素1mg，用甲醇分別定容至5ml，超聲處理10min，得每個標準品的標準溶液，各取1ml混勻得到5種標準品混合液，配好的溶液于-20℃保存。

1.2.3HPLC分析采用Aglient1260高效液相色譜儀，配備Agilent1260VWD可變波長檢測器。色譜柱為ZORBAXSBC18柱（150mm×4.6mm，5μm），柱溫30℃。采用2%甲酸（A液）和甲醇溶液（B液）為流動相，進樣量為10μl。其中類黃酮分析時的流速為0.8ml/min，梯度洗脫程序：0～45min（80%A液，20%B液），45～60min（20%A液，80%B液）。

1.2.4類黃酮的定性及定量分析定性分析根據標準品的保留時間確定。定量分析采用標準曲線法。類黃酮總量為各組分含量的總和。

1.2.5統計分析采用Anova對數據進行差異顯著性分析。

2結果與分析

2.1類黃酮標準品色譜圖

類黃酮在確定的色譜條件下，取10μl標準品混合液進樣分析，得到標準品色譜圖（圖1）。5種類黃酮標準品流出順序分別為楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素和芹菜素。endprint

摘要：以4個不同表現型石榴品種‘泰山紅、‘大青皮、‘墨石榴和‘三白為試材，利用高效液相色譜法（HPLC）分別測定果皮和果汁中楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等類黃酮含量。結果表明：4個品種的果皮、果汁中均存在這5種類黃酮物質，其中以楊梅酮和槲皮素含量最高。4個品種間類黃酮含量有差異。‘三白石榴果皮和果汁中的類黃酮總量均最高，分別達到377.5μg/g和82.0μg/g，‘泰山紅、‘大青皮和‘墨石榴果皮和果汁中類黃酮含量依次降低。此外，同一品種不同部位也有差異，‘三白果皮類黃酮總量是果汁的4.60倍，而‘泰山紅、‘墨石榴和‘大青皮依次是3.51、4.45、4.28倍。表明類黃酮含量在石榴不同品種以及同一品種果皮和果汁中均存在差異性。

關鍵詞：石榴；果皮；果汁；類黃酮；HPLC

中圖分類號：S665.401文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）01-0040-04

石榴（PunicagranatumL.）是傳統的栽培果樹之一，具有較高的食用、藥用及觀賞價值。目前，全世界有1000多個栽培品種[2]。石榴在中國已有2000多年的栽培歷史，據不完全統計，我國栽培面積目前已達到11.7×104hm2左右，居世界第一位，形成了山東棗莊、陜西臨潼、新疆葉城、云南蒙自、四川會理、河南開封、安徽懷遠等幾個石榴適生栽培區。

類黃酮具有結構和特征的多樣性，廣泛存在于水果、蔬菜、堅果、種子和莖皮中，是植物體內最重要的次生代謝產物之一，也是人類膳食不可缺少的組成部分[1]。研究表明，石榴中富含類黃酮物質，其果實提取物對心腦血管疾病、腫瘤、細菌感染等具有顯著的防治作用[3～8]。雖然石榴中的類黃酮研究開展較早，但已往對類黃酮研究主要集中在定性和總量測定[9，10]方面，且大都局限于單一品種。利用高效液相色譜法測定石榴類黃酮物質含量的研究較少[11]，對不同石榴品種果皮和果汁中類黃酮物質組分含量的研究尚未見相關報道。本試驗以4個不同表現型石榴品種為試材，采用高效液相色譜法（HPLC）對果皮、果汁中類黃酮組分（楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素）的含量進行了提取和測定，以揭示不同石榴品種類黃酮組分在含量上的差異，為石榴類黃酮物質的開發利用和良種選育提供理論依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1供試品種以山東省果樹研究所石榴種質資源圃中的‘泰山紅、‘大青皮、‘三白和‘墨石榴4個石榴品種為試材。該資源圃立地條件一致，常規管理。

1.1.2試劑以楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素等5種類黃酮物質為標準品，其中楊梅酮購自Sigma公司、芹菜素購自ChromaDex公司，槲皮素、木犀草素和山奈素購自中國藥品生物制品檢定所。

1.1.3試驗設計每個品種每3株為一個小區，隨機區組排列，重復3次。

1.2試驗方法

取樣時，選取樹勢一致的植株，自樹體東南西北4個方向及高度一致的果枝采集果實。采摘后低溫條件下帶回實驗室，用削皮刀取得果皮，籽粒手工壓榨后經三層紗布過濾得到果汁。

采用Aglient1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）進行測定分析，甲醇、甲酸均為色譜級。

1.2.1類黃酮的提取取0.5g果皮和10g果汁，分別放于40ml62.5%的甲醇水溶液中，添加BHA（2g/L）。仔細加入6mol/LHCl10ml，使總體積達50ml，然后提取液在90℃水浴中回流2h，冷卻至室溫，超聲處理5min。取提取液10ml，經0.45μm濾膜過濾后用于HPLC測定。

1.2.2類黃酮標準溶液的配置分別取楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素、芹菜素1mg，用甲醇分別定容至5ml，超聲處理10min，得每個標準品的標準溶液，各取1ml混勻得到5種標準品混合液，配好的溶液于-20℃保存。

1.2.3HPLC分析采用Aglient1260高效液相色譜儀，配備Agilent1260VWD可變波長檢測器。色譜柱為ZORBAXSBC18柱（150mm×4.6mm，5μm），柱溫30℃。采用2%甲酸（A液）和甲醇溶液（B液）為流動相，進樣量為10μl。其中類黃酮分析時的流速為0.8ml/min，梯度洗脫程序：0～45min（80%A液，20%B液），45～60min（20%A液，80%B液）。

1.2.4類黃酮的定性及定量分析定性分析根據標準品的保留時間確定。定量分析采用標準曲線法。類黃酮總量為各組分含量的總和。

1.2.5統計分析采用Anova對數據進行差異顯著性分析。

2結果與分析

2.1類黃酮標準品色譜圖

類黃酮在確定的色譜條件下，取10μl標準品混合液進樣分析，得到標準品色譜圖（圖1）。5種類黃酮標準品流出順序分別為楊梅酮、槲皮素、木犀草素、山奈素和芹菜素。endprint