蝦籽中十種合成色素及其色淀的高效液相色譜測定方法

楊昊等

摘要：建立了蝦籽中檸檬黃、日落黃等10種合成色素及其色淀的高效液相色譜測定方法。樣品以氫氧化鈉-甲醇溶液提取，加入EDTA絡合色淀中的鋁離子。采用symmetryC18色譜柱，以甲醇-20mmol/L醋酸銨為流動相梯度洗脫，二極管陣列檢測器測定，外標法定量。10種色素在0.5～20.0mg/kg范圍內線性良好，相關系數均大于0.9999，加標回收率82.4%～107.9%，相對標準偏差0.445%～6.310%，檢出限為0.5～1.0mg/kg。

關鍵詞：蝦籽；合成色素；色淀；高效液相色譜

中圖分類號：Q657.7+2文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）01-0110-04

蝦籽是一種蛋白質含量高、營養豐富的食品。優質的蝦籽呈現桔黃色，但在空氣中易氧化而成為褐色，部分生產商可能采用加入合成色素或其色淀的方法改善蝦籽的色澤，而目前國家未批準在蝦籽中使用合成色素[1]。合成色素是以煤焦油中的苯胺為原料制成的，所以又稱為“煤焦油色素”或“苯胺色素”。色淀是水溶性色素沉淀在氧化鋁上制備成的特殊著色劑，不溶于一般介質，通過擴散進行著色。某些產品在生產過程中沒有水或水分含量很少，故需要使用色淀著色，目前還沒有針對色淀進行檢測的方法報道。

毒理學研究發現，某些合成色素有慢性毒性或致癌性[2]。色素及防腐劑等的檢測方法有薄層色譜法，示波極譜法[3]，高效液相色譜法[4～9]，方波伏安法[10]。這些方法大多用于檢測飲品、面粉制品等基質比較簡單的食品[11～16]，而蝦籽基質較復雜，使用國家標準GB/T5009.35-2003[17]方法測定其中色素，前處理步驟繁瑣，且不能檢測其中不溶于水的色淀。本試驗建立了氫氧化鈉-甲醇提取，EDTA絡合鋁離子，高效液相色譜同時測定蝦籽中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、赤蘚紅、誘惑紅、靛藍、亮藍、酸性紅等10種合成色素及其色淀的多組分同時測定方法，結果滿意。

1材料與方法

1.1材料與試劑

試驗材料：蝦籽，購自濟南七里堡農貿市場。

試劑：甲醇（色譜純），美國飛世爾公司；醋酸銨（色譜純），德國Flukar公司；鹽酸（分析純），中國國藥集團化學試劑有限公司；氨水（分析純），中國天津科密歐化學試劑有限公司；氫氧化鈉（分析純），中國國藥集團化學試劑有限公司；檸檬黃、莧菜紅、新紅、酸性紅、胭脂紅、日落黃、亮藍、赤蘚紅、誘惑紅、靛藍標準物質（國家標準物質），中國計量科學研究院；檸檬黃鋁色淀（含量10%），河南金潤食品添加劑有限公司；胭脂紅鋁色淀（含量20%），河南金潤食品添加劑有限公司；日落黃鋁色淀（含量10%），上海染料研究所有限公司；乙二胺四乙酸（分析純），中國國藥集團化學試劑有限公司。

1.2儀器

Allance2695型高效液相色譜儀配2998型二極管陣列檢測器，美國Waters公司；BSA822-cw型電子天平，德國Sartorios公司；AB204-S型電子天平，瑞士MettlerToledo公司；MS3基本型旋渦混合器，德國IKA公司；SB-800DTD型超聲波清洗器，中國寧波新芝生物科技股份有限公司；3-18K型冷凍離心機，德國Sigma公司；mini-Q超純水制備器，美國Millipore公司；HGC-24型氮吹儀，上海恒奧貿易有限公司；有機相針式濾器（SCAA-104），上海安譜科學儀器有限公司。

1.3標準溶液的制備

準確稱取每種色素標準樣品（國家標物中心提供）25mg置于25ml容量瓶中，配制成色素濃度為1.0mg/ml標準儲備液。用移液管移取適量的標準儲備液用甲醇-水（5+95）依次稀釋成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μg/ml的標準系列溶液。

1.4高效液相色譜條件

色譜柱：symmetryC18柱（25cm×4.6mm，5μm）；流速：1.0ml/min；柱溫：35℃；采集波長：200～650nm；進樣量：50μl。

流動相：A為甲醇；B為20mmol/L醋酸銨溶液。梯度洗脫程序見表1。endprint

摘要：建立了蝦籽中檸檬黃、日落黃等10種合成色素及其色淀的高效液相色譜測定方法。樣品以氫氧化鈉-甲醇溶液提取，加入EDTA絡合色淀中的鋁離子。采用symmetryC18色譜柱，以甲醇-20mmol/L醋酸銨為流動相梯度洗脫，二極管陣列檢測器測定，外標法定量。10種色素在0.5～20.0mg/kg范圍內線性良好，相關系數均大于0.9999，加標回收率82.4%～107.9%，相對標準偏差0.445%～6.310%，檢出限為0.5～1.0mg/kg。

關鍵詞：蝦籽；合成色素；色淀；高效液相色譜

中圖分類號：Q657.7+2文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）01-0110-04

蝦籽是一種蛋白質含量高、營養豐富的食品。優質的蝦籽呈現桔黃色，但在空氣中易氧化而成為褐色，部分生產商可能采用加入合成色素或其色淀的方法改善蝦籽的色澤，而目前國家未批準在蝦籽中使用合成色素[1]。合成色素是以煤焦油中的苯胺為原料制成的，所以又稱為“煤焦油色素”或“苯胺色素”。色淀是水溶性色素沉淀在氧化鋁上制備成的特殊著色劑，不溶于一般介質，通過擴散進行著色。某些產品在生產過程中沒有水或水分含量很少，故需要使用色淀著色，目前還沒有針對色淀進行檢測的方法報道。

毒理學研究發現，某些合成色素有慢性毒性或致癌性[2]。色素及防腐劑等的檢測方法有薄層色譜法，示波極譜法[3]，高效液相色譜法[4～9]，方波伏安法[10]。這些方法大多用于檢測飲品、面粉制品等基質比較簡單的食品[11～16]，而蝦籽基質較復雜，使用國家標準GB/T5009.35-2003[17]方法測定其中色素，前處理步驟繁瑣，且不能檢測其中不溶于水的色淀。本試驗建立了氫氧化鈉-甲醇提取，EDTA絡合鋁離子，高效液相色譜同時測定蝦籽中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、赤蘚紅、誘惑紅、靛藍、亮藍、酸性紅等10種合成色素及其色淀的多組分同時測定方法，結果滿意。

1材料與方法

1.1材料與試劑

試驗材料：蝦籽，購自濟南七里堡農貿市場。

試劑：甲醇（色譜純），美國飛世爾公司；醋酸銨（色譜純），德國Flukar公司；鹽酸（分析純），中國國藥集團化學試劑有限公司；氨水（分析純），中國天津科密歐化學試劑有限公司；氫氧化鈉（分析純），中國國藥集團化學試劑有限公司；檸檬黃、莧菜紅、新紅、酸性紅、胭脂紅、日落黃、亮藍、赤蘚紅、誘惑紅、靛藍標準物質（國家標準物質），中國計量科學研究院；檸檬黃鋁色淀（含量10%），河南金潤食品添加劑有限公司；胭脂紅鋁色淀（含量20%），河南金潤食品添加劑有限公司；日落黃鋁色淀（含量10%），上海染料研究所有限公司；乙二胺四乙酸（分析純），中國國藥集團化學試劑有限公司。

1.2儀器

Allance2695型高效液相色譜儀配2998型二極管陣列檢測器，美國Waters公司；BSA822-cw型電子天平，德國Sartorios公司；AB204-S型電子天平，瑞士MettlerToledo公司；MS3基本型旋渦混合器，德國IKA公司；SB-800DTD型超聲波清洗器，中國寧波新芝生物科技股份有限公司；3-18K型冷凍離心機，德國Sigma公司；mini-Q超純水制備器，美國Millipore公司；HGC-24型氮吹儀，上海恒奧貿易有限公司；有機相針式濾器（SCAA-104），上海安譜科學儀器有限公司。

1.3標準溶液的制備

準確稱取每種色素標準樣品（國家標物中心提供）25mg置于25ml容量瓶中，配制成色素濃度為1.0mg/ml標準儲備液。用移液管移取適量的標準儲備液用甲醇-水（5+95）依次稀釋成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μg/ml的標準系列溶液。

1.4高效液相色譜條件

色譜柱：symmetryC18柱（25cm×4.6mm，5μm）；流速：1.0ml/min；柱溫：35℃；采集波長：200～650nm；進樣量：50μl。

流動相：A為甲醇；B為20mmol/L醋酸銨溶液。梯度洗脫程序見表1。endprint

摘要：建立了蝦籽中檸檬黃、日落黃等10種合成色素及其色淀的高效液相色譜測定方法。樣品以氫氧化鈉-甲醇溶液提取，加入EDTA絡合色淀中的鋁離子。采用symmetryC18色譜柱，以甲醇-20mmol/L醋酸銨為流動相梯度洗脫，二極管陣列檢測器測定，外標法定量。10種色素在0.5～20.0mg/kg范圍內線性良好，相關系數均大于0.9999，加標回收率82.4%～107.9%，相對標準偏差0.445%～6.310%，檢出限為0.5～1.0mg/kg。

關鍵詞：蝦籽；合成色素；色淀；高效液相色譜

中圖分類號：Q657.7+2文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）01-0110-04

蝦籽是一種蛋白質含量高、營養豐富的食品。優質的蝦籽呈現桔黃色，但在空氣中易氧化而成為褐色，部分生產商可能采用加入合成色素或其色淀的方法改善蝦籽的色澤，而目前國家未批準在蝦籽中使用合成色素[1]。合成色素是以煤焦油中的苯胺為原料制成的，所以又稱為“煤焦油色素”或“苯胺色素”。色淀是水溶性色素沉淀在氧化鋁上制備成的特殊著色劑，不溶于一般介質，通過擴散進行著色。某些產品在生產過程中沒有水或水分含量很少，故需要使用色淀著色，目前還沒有針對色淀進行檢測的方法報道。

毒理學研究發現，某些合成色素有慢性毒性或致癌性[2]。色素及防腐劑等的檢測方法有薄層色譜法，示波極譜法[3]，高效液相色譜法[4～9]，方波伏安法[10]。這些方法大多用于檢測飲品、面粉制品等基質比較簡單的食品[11～16]，而蝦籽基質較復雜，使用國家標準GB/T5009.35-2003[17]方法測定其中色素，前處理步驟繁瑣，且不能檢測其中不溶于水的色淀。本試驗建立了氫氧化鈉-甲醇提取，EDTA絡合鋁離子，高效液相色譜同時測定蝦籽中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、新紅、赤蘚紅、誘惑紅、靛藍、亮藍、酸性紅等10種合成色素及其色淀的多組分同時測定方法，結果滿意。

1材料與方法

1.1材料與試劑

試驗材料：蝦籽，購自濟南七里堡農貿市場。

試劑：甲醇（色譜純），美國飛世爾公司；醋酸銨（色譜純），德國Flukar公司；鹽酸（分析純），中國國藥集團化學試劑有限公司；氨水（分析純），中國天津科密歐化學試劑有限公司；氫氧化鈉（分析純），中國國藥集團化學試劑有限公司；檸檬黃、莧菜紅、新紅、酸性紅、胭脂紅、日落黃、亮藍、赤蘚紅、誘惑紅、靛藍標準物質（國家標準物質），中國計量科學研究院；檸檬黃鋁色淀（含量10%），河南金潤食品添加劑有限公司；胭脂紅鋁色淀（含量20%），河南金潤食品添加劑有限公司；日落黃鋁色淀（含量10%），上海染料研究所有限公司；乙二胺四乙酸（分析純），中國國藥集團化學試劑有限公司。

1.2儀器

Allance2695型高效液相色譜儀配2998型二極管陣列檢測器，美國Waters公司；BSA822-cw型電子天平，德國Sartorios公司；AB204-S型電子天平，瑞士MettlerToledo公司；MS3基本型旋渦混合器，德國IKA公司；SB-800DTD型超聲波清洗器，中國寧波新芝生物科技股份有限公司；3-18K型冷凍離心機，德國Sigma公司；mini-Q超純水制備器，美國Millipore公司；HGC-24型氮吹儀，上海恒奧貿易有限公司；有機相針式濾器（SCAA-104），上海安譜科學儀器有限公司。

1.3標準溶液的制備

準確稱取每種色素標準樣品（國家標物中心提供）25mg置于25ml容量瓶中，配制成色素濃度為1.0mg/ml標準儲備液。用移液管移取適量的標準儲備液用甲醇-水（5+95）依次稀釋成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μg/ml的標準系列溶液。

1.4高效液相色譜條件

色譜柱：symmetryC18柱（25cm×4.6mm，5μm）；流速：1.0ml/min；柱溫：35℃；采集波長：200～650nm；進樣量：50μl。

流動相：A為甲醇；B為20mmol/L醋酸銨溶液。梯度洗脫程序見表1。endprint