干酪乳桿菌與氟苯尼考對肉雛雞生長性能及免疫力影響的比較研究

伊淑帥，王開，齊宇，潘娜，胡桂學

(吉林農業大學 動物科學技術學院，長春 130118)

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干酪乳桿菌與氟苯尼考對肉雛雞生長性能及免疫力影響的比較研究

伊淑帥，王開，齊宇，潘娜，胡桂學*

(吉林農業大學 動物科學技術學院，長春 130118)

為比較肉雛雞在飲水中添加干酪乳桿菌與氟苯尼考對肉雛雞生長性能與免疫力的影響，本試驗選取1日齡肉雞120只，隨機分為3個處理組，分別為對照組、干酪乳桿菌組、氟苯尼考組，每個處理組4個重復，每個重復10只，試驗期為21 d，檢測不同階段各處理組的平均日增重、料重比、免疫器官指數、外周血IgG含量、盲腸sIgA含量、淋巴細胞增殖能力。結果顯示，飲水中添加干酪乳桿菌對肉雛雞體重、平均日增重、平均日采食量影響不顯著，添加氟苯尼考顯著抑制了肉雛雞的生長性能(P<0.05)，二者對肉雛雞料重比的影響均差異不顯著。添加干酪乳桿菌對肉雛雞免疫器官指數影響不顯著，但顯著提高了肉雛雞外周血IgG含量、盲腸sIgA含量以及外周血淋巴細胞增殖能力(P<0.05)，添加氟苯尼考顯著抑制了肉雛雞的免疫水平(P<0.05)。結果表明新進肉雛雞在飲水中添加氟苯尼考對雛雞的生長性能及免疫力有顯著的抑制作用，應減少使用，而添加干酪乳桿菌對提高雛雞免疫力是有益的。

干酪乳桿菌；氟苯尼考；雛雞；生長性能；免疫力

肉雞養殖的經濟效益與雛雞階段的發病率、死亡率、生長性能等因素息息相關。吉林省作為我國肉雞養殖大省，養殖場經常使用抗生素并通過飲水或作為飼料添加劑的形式施用以控制發病率、提高生長性能，獲取更大的經濟效益。其中，氟苯尼考是肉雞養殖場中使用率最高的抗生素之一，使用普及率達到78%[1]。然而，由于細菌抗藥性、獸藥殘留等問題的出現，限制了抗生素的使用。益生菌作為一類對機體有益的活的微生物，可以有效抑制病原菌的生長，調節腸道微生物菌群平衡，增強宿主機體免疫力，已做為一種新型飼料添加劑用于畜禽養殖[2]。益生菌是否可以代替抗生素推廣使用已經成為肉雞養殖業一個值得關注的問題，因此，評估使用益生菌、抗生素對雛雞生長性能與免疫力的影響，對二者在臨床實踐中的應用具有良好的指導意義。本試驗通過在雛雞飲水中添加干酪乳桿菌、常用抗生素氟苯尼考，比較各階段相應的生長性能與免疫指標，探討干酪乳桿菌與氟苯尼考對雛雞生長性能與免疫力的影響，旨在評價二者在雛雞養殖中的應用價值。

1 材料和方法

1.1 主要儀器 SANYO-MCV131BNF超凈無菌工作臺(日本SANYO公司)、Multiskan Spectrum 全波長酶標儀(芬蘭Thermo Fisher Labsystems公司)、MikRo 22R高速冷凍離心機(德國HETTICH公司)、HX502T電子分析天平(慈溪市天東衡器廠)、MCO-18AIC CO2恒溫培養箱(日本SANYO公司)、UV-2012PCS氣浴恒溫搖床(龍尼柯儀器有限公司)。

1.2 主要試劑 干酪乳桿菌(L.casei)ATCC393為本實驗室保存；禽用氟苯尼考購自吉林省某動物藥業有限公司；雞分泌性免疫球蛋白-A(sIgA)和雞免疫球蛋白-G(IgG)ELISA檢測試劑盒購自上海朗頓生物有限公司；刀豆蛋白A(ConA)、MTT、淋巴細胞分離液(密度1.077±0.002)購自sigma公司。

1.3 試驗動物及試驗設計 選取120只1日齡AA+肉雞，購自吉林永吉方圓肉種雞場，隨機分為3個處理組：對照組(C組)，基礎日糧；干酪乳桿菌組(L組)，基礎日糧，飲水中添加1 g/L干酪乳桿菌(約109CFU/L)；氟苯尼考組(F組)，基礎日糧，飲水中添加0.1%氟苯尼考；添加標準依據氟苯尼考產品說明與鄭穎輝研究結果[3]。每個處理組4個重復，每個重復10只。

1.4 試驗日糧及飼養管理 按照肉雞正常飼養及防疫程序進行，采用立體籠養方式，飼養周期為21 d，分三階段進行：1～7 d，8～14 d，15～21 d。各處理組雛雞自由采食和飲水，干酪乳桿菌與氟苯尼考采用飲水的方式進行添加，并保證雛雞在短時間內全部飲用完畢。試驗基礎日糧營養標準見表1。

表1 基礎日糧營養水平

1.5 試驗方法

1.5.1 生長性能 每天定時稱量各處理組每日供料量、剩余料量、損失料量。分別于試驗0、21 d稱量各處理組雛雞的體重，稱重前禁食12 h，計算平均日增重與平均日采食量，按以下公式計算料重比：料重比=飼養期內所耗標準飼料量(kg)/同期增重(kg)。

1.5.2 免疫器官指數 分別于試驗7、14、21 d稱量各處理組雛雞的體重，稱重前禁食。12 h，采集脾臟、法氏囊、胸腺，剔除表面多余的脂肪組織，稱量免疫器官重量，按以下公式計算免疫器官指數：免疫器官指數(g/kg)=免疫器官濕重(g)/體重(kg)。

1.5.3 外周血IgG含量檢測 使用雞免疫球蛋白-G(IgG)ELISA試劑盒檢測各處理組雛雞7、14、21 d收集的外周血血清中IgG含量，每個樣品做兩個重復。

1.5.4 盲腸內容物sIgA含量檢測 使用雞分泌性免疫球蛋白-A(sIgA)ELISA試劑盒檢測各處理組雛雞7、14、21 d收集的盲腸內容物上清中sIgA含量，每個樣品做兩個重復。

1.5.5 外周血淋巴細胞增殖試驗 無菌采集心臟肝素抗凝血2 mL，經淋巴細胞分層液分離淋巴細胞，細胞計數后稀釋至濃度為2×106cell/mL，并用臺盼藍拒染法檢測細胞活力>95%。采用 MTT法檢測外周血淋巴細胞增殖能力，計算淋巴細胞的轉化率[4]。

1.5.6 數據統計分析 實驗數據采用Mean±SD表示，使用spss18.0軟件，采用單因素方差分析(one way-ANOVA)法對實驗數據進行分析，檢驗標準為P<0.05。

2 結果與分析

2.1 對雛雞生長性能的影響 如表2所示，雛雞飲水中添加干酪乳桿菌(L組)對雛雞的體重、平均日增重、平均日采食量影響均不顯著(P>0.05)；氟苯尼考組(F組)的體重、平均日增重、平均日采食量顯著低于對照組(C組)與干酪乳桿菌組(L組)。整個試驗周期內，三個處理組料重比差異均不顯著(P>0.05)。結果表明，添加干酪乳桿菌對雛雞生長性能影響不顯著，添加氟苯尼考顯著抑制了雛雞的生長性能。

表2 干酪乳桿菌與氟苯尼考對雛雞生長性能的影響結果表

注：同一行標注有不同字母表示差異顯著(P<0.05)，標注有相同字母或不標注表示差異不顯著(P>0.05)

2.2 對雛雞免疫器官指數的影響 如表3所示，7 d時干酪乳桿菌組(L組)與對照組(C組)脾指數、法氏囊指數、胸腺指數差異均不顯著(P>0.05)；添加氟苯尼考(F組)免疫器官指數均顯著降低，與對照組(C組)相比，脾指數、法氏囊指數、胸腺指數降低30.6%、39.6%、33.4%。14 d時，與對照組(C組)相比，干酪乳桿菌組(L組)胸腺指數提高23.6%，氟苯尼考組(F組)脾指數、法氏囊指數降低16.3%、29.6%。21 d時，三個處理組脾指數、胸腺指數差異均不顯著(P>0.05)，干酪乳桿菌組(L組)與氟苯尼考組(F組)法氏囊指數差異顯著(P<0.05)。表明干酪乳桿菌對雛雞免疫器官指數影響不顯著，而氟苯尼考則降低了免疫器官指數。

表3 干酪乳桿菌與抗生素對雛雞免疫器官指數的影響結果表

注：同一行標注有不同字母表示差異顯著(P<0.05)，標注有相同字母或不標注表示差異不顯著(P>0.05)

2.3 對雛雞外周血IgG含量的影響 依據ELISA試劑盒繪制標準曲線(圖1)，計算樣品含量如圖2所示，7 d時三個處理組外周血IgG含量差異均不顯著(P>0.05)；14 d時，干酪乳桿菌組(L組)與對照組(C組)、氟苯尼考組(F組)相比，外周血IgG含量增加24.3%、17.2%，但是不具有生物學統計意義(P>0.05)；21 d時，三個處理組IgG含量差異顯著(P<0.05)，其中干酪乳桿菌組(L組)含量最高，為4.18±0.37 mg/mL，氟苯尼考組(F組)含量最低，為3.24±0.91 mg/mL。表明干酪乳桿菌可以顯著提高肉雛雞外周血IgG水平。

圖1 IgG ELISA檢測試劑盒標準曲線(標準曲線相關系數：y=1.9512x2-1.4838x+1.3258, R2=0.9920)

圖2 干酪乳桿菌與氟苯尼考對雛雞外周血IgG含量的影響

2.4 對雛雞盲腸sIgA含量的影響 依據ELISA試劑盒繪制標準曲線(圖3)，計算樣品含量如圖4所示，7、14 d時，三個處理組盲腸sIgA含量差異均不顯著(P>0.05)，干酪乳桿菌組(L組)較其他處理組含量較高；21 d時，對照組與氟苯尼考組盲腸sIgA含量差異均不顯著(P>0.05)；添加干酪乳桿菌(L組)盲腸sIgA顯著提高(P<0.05)，與對照組(C組)、氟苯尼考組(F組)相比，盲腸sIgA含量增加22.0%、23.4%。表明添加干酪乳桿菌可以顯著提高雛雞盲腸sIgA水平，添加氟苯尼考對雛雞盲腸sIgA含量影響不顯著。

圖3 sIgA ELISA檢測試劑盒標準曲線

圖4 干酪乳桿菌與氟苯尼考對雛雞盲腸內sIgA含量的影響

2.5 對雛雞外周血淋巴細胞增殖能力的影響 如圖5所示，14 d時三個處理組淋巴細胞轉化率差異顯著(P<0.05)，干酪乳桿菌組(L組)外周血淋巴細胞轉化率最高，為0.534±0.028，氟苯尼考組(F組)淋巴細胞轉化率最低，為0.150±0.022；21 d時，對照組(C組)與干酪乳桿菌組(L組)外周血淋巴細胞轉化率差異不顯著(P>0.05)，分別為0.352±0.082、0.360±0.089，氟苯尼考組(F組)淋巴細胞轉化率最低，為0.077±0.005，與其他處理組差異顯著(P<0.05)。結果表明添加氟苯尼考顯著抑制了雛雞淋巴細胞增殖能力，添加干酪乳桿菌可以提高淋巴細胞增殖能力。

圖5 干酪乳桿菌與氟苯尼考對雛雞外周血淋巴細胞轉化率的影響

3 討論與小結

3.1 干酪乳桿菌與氟苯尼考對雛雞生長性能的影響 干酪乳桿菌在畜禽胃腸道內可以合成多種消化酶類，消化分解機體內多種營養物質，促進營養物質的吸收與利用；還可以通過在胃腸道內的發酵，利用小分子的碳水化合物合成脂肪酸、氨基酸、維生素等營養物質，為機體提供能量來源，加速飼料的消化利用，提高生長性能[5]。但本實驗中，添加干酪乳桿菌對雛雞的平均日增重、料重比影響均不顯著，但有改善胃腸功能、提高飼料轉化率的趨勢，其原因可能與乳桿菌的種類、劑型、添加的濃度有關，與付果花等的研究相一致[6]。氟苯尼考為氯霉素的結構同系物，作用機理及抗菌譜與氯霉素和甲砜霉素相似，1990年首次在日本上市，目前在肉雞養殖實踐中，常用于防治大腸桿菌、沙門菌等引起的細菌性腸炎。它可以引起胃腸迷走神經軸索變性，引起神經功能障礙，導致胃酸分泌減少，降低胃泌素釋放量和胰液分泌，最終導致胃腸消化、吸收功能障礙[7]。本試驗結果表明，添加氟苯尼考可以抑制雛雞的生長，但對料重比的影響不顯著，因此建議在肉雛雞階段，應盡量減少對該藥物的使用。

3.2 干酪乳桿菌與氟苯尼考對雛雞免疫器官指數的影響 免疫器官的發育水平決定了機體免疫應答的能力，是評價雛雞免疫機能的重要指標[8]。研究發現，雛雞日糧中添加不同劑量、不同劑型的枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌均能促進免疫器官的發育，顯著提高雛雞的脾指數、法氏囊指數與胸腺指數[9-10]。李汝春證明，氟苯尼考對雞的免疫器官在短期內造成了不可逆的損傷作用，造成了法氏囊、脾臟、盲腸扁桃體的萎縮[11]。本試驗結果表明，飲水中添加干酪乳桿菌對雛雞免疫器官指數影響不顯著，但可以提高雛雞部分免疫器官指數，添加氟苯尼考顯著抑制了免疫器官的發育。氟苯尼考對免疫器官發育的抑制作用在低日齡雛雞中表現的更加明顯。

3.3 干酪乳桿菌與氟苯尼考對雛雞免疫力的影響 干酪乳桿菌進入畜禽胃腸道后，通過介導細胞內信號傳導通路，活化巨噬細胞、自然殺傷細胞、杯狀細胞等，促進巨噬細胞分泌IL-10、TNF-α等多種細胞因子，促進黏液蛋白與sIgA的分泌、增強腸道黏膜屏障，增加血清中IgA 、IgG和IgM水平，促進T 淋巴細胞和 B 淋巴細胞成熟，增強免疫機能，提高腸道免疫力和抗病力，抵抗腸道腫瘤、炎癥等疾病[12-13]。徐子涵比較了不同劑型的草乳桿菌與格氏乳桿菌制劑對雛雞免疫機能的影響，結果表明，液體與固體兩種劑型的乳桿菌制劑均能提高雛雞血清中IgA、IgG以及腸道內容物中sIgA的含量，增強雛雞T淋巴細胞轉化率，增加細胞因子表達量，并且證明液體益生菌制劑的效果略優于固體制劑[14]。Molnar等研究了枯草芽孢桿菌對肉雞免疫機能的影響，結果表明枯草芽孢桿菌增加腸粘膜固有層杯狀細胞的數量，增強肉雞對新城疫病毒的免疫應答能力[15]。氟苯尼考作為氯霉素家族的抗生素，可以抑制免疫活性細胞的生成，降低細胞免疫功能，抑制細胞免疫與體液免疫。張建梅等比較了復合微生態制劑與氟苯尼考對雛雞免疫機能的影響，結果表明氟苯尼考可引起雛雞法氏囊與脾臟萎縮及淋巴細胞的減少與死亡，對機體免疫機能具有明顯的抑制作用[16]。本試驗結果顯示，干酪乳桿菌可以顯著提高雛雞外周血IgG含量、盲腸sIgA含量以及外周血淋巴細胞增殖能力，而氟苯尼考對雛雞外周血IgG水平、外周血淋巴細胞增殖能力均有顯著的抑制作用，尤其是淋巴細胞增殖能力。表明飲水中添加干酪乳桿菌有助于提高雛雞免疫水平，而氟苯尼考對雛雞免疫機能有顯著的抑制作用。

本試驗證明干酪乳桿菌能提高雛雞的免疫力，可以從外周血中IgG含量、盲腸sIgA含量以及淋巴細胞增殖能力均顯著提高得到驗證。而肉雞養殖中使用普及率最高的抗生素-氟苯尼考對雛雞的生長性能與免疫力均有顯著的抑制作用。因此，在肉雞養殖中應盡量減少氟苯尼考的使用，并通過不斷篩選益生菌菌株、改進益生菌發酵工藝等途徑逐步替代抗生素，提高生長性能與抗病力，以獲得更大的經濟效益。

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(編輯：侯向輝)

Comparative Study on Effect ofLactobacillusand Florfenicol on Growing Performance and Immunity Function of Broilers

YI Shu-shuai, WANG Kai, QI Yu, PAN Na, HU Gui-xue*

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China)

In order to compare the effect ofLactobacilluscaseiand florfenicol on growth performance and immunity function of broilers, in this experiment, 120 one-day-old broilers were randomly divided into 3 groups with 4 replicates in each group and 20 chickens per replicate, including the control group, theLactobacilluscaseigroup, the florfenicol group. The average daily gain, feed weight ratio, immunity organ index, IgG content, sIgA content, and lymphocyte proliferation ability of the treatment group were detected at different stages. The results showed that the effect of body weight, average daily gain and average daily feed intake was not significant by addingL.caseiin drinking water, the growth performance of broilers was significantly inhibited by adding florfenicol(P<0.05), the effect ofL.caseiand florfenicol on chicken feed weight ratio was not significantly. The effect ofL.caseion immunity organ index was not significant, but the IgG content, sIgA content and lymphocyte proliferation ability were significantly increased (P<0.05), immunity function was significantly inhibited using florfenicol (P<0.05). In conclusion, the growth performance and immunity function of broiler could be significant inhibited using florfenicol in the water. however,Lactobacilluscaseiis benefical for brolier to improve the immunity.

Lactobacillus;florfenicol;broilers; growing performance;immunity function

國家自然科學基金項目(31372413)

伊淑帥，碩士研究生，從事益生菌作用機制研究。

胡桂學。E-mail：guixue1964@126.com

2015-07-17

A

1002-1280 (2015) 09-0031-06

S852.61