乳腺葉狀腫瘤上皮組織中E-cadherin的表達及臨床意義

瞿偉，彭亞婷，周國鳳

(南昌市第三醫院，南昌330006)

乳腺葉狀腫瘤(PTs)是少見的纖維上皮來源的腫瘤，占乳腺腫瘤的0.3%～1%，有復發和轉移的潛能。根據間質細胞異型性、間質細胞密度、核分裂象、間質過度生長及腫瘤邊界幾個特征，PTs可分為良性、交界性及惡性。雖有報道p53、c-kit、EGFR、CD10等標志物與以上病理學特征之間的關系，然而仍難以準確區分纖維腺瘤與良性PTs，良性PTs與交界性PTs，交界性PTs與惡性PTs［1］。本研究通過免疫組化SP法檢測E-cadherin蛋白在PTs及纖維腺瘤上皮組織中的表達，檢測Ki-67在PTs間質成分中的表達，從而探討E-cadherin的表達與PTs病理學特征及Ki-67表達之間的相關性，分析E-cadherin在鑒別PTs和纖維腺瘤的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 南昌市第三醫院2011年4月～2013年5月手術切除的PTs患者60例，年齡26～76歲，平均45歲;腫物直徑1.8～21 cm，平均6.3 cm;其中，良性PTs 41例，交界性PTs 16例，惡性PTs 3例。選擇同期乳腺纖維腺瘤患者10例作為對照組，年齡1 9～48歲，平均30.6歲;腫物直徑1.5～4cm，平均2.2 cm，分別取腫瘤組織。

1.2 方法

1.2.1 病理形態觀察方法 所有腫瘤組織經10%中性福爾馬林固定、石蠟包埋及HE染色，由兩名病理醫師顯微鏡下觀察腫瘤的間質細胞異型性、間質細胞密度、核分裂象、間質過度生長、腫瘤邊界的病理學特征。1～3項分為輕、中、重3級，核分裂象為計算每10個(400倍)HPF內間質細胞核分裂數(直徑0.5 mm)。病理診斷標準:良性PTs為間質細胞密度低，無間質過度生長，核輕度異型，腫瘤邊界清楚，和(或)核分裂≤2個/10 HPF(400倍);惡性PTs為間質細胞密度高、間質過度生長、核重度異型、核分裂≥5個/10 HPF(400倍)和(或)腫瘤邊界不清。符合以上5個診斷標準中的4個及以上則診斷為良性或惡性PTs，不完全符合良性或惡性PTs診斷標準時則診斷為交界性PTs。

1.2.2 E-cadherin、Ki67檢測方法 所有組織經10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續切片，SP法免疫組化染色。鼠抗人E-cadherin、Ki-67單克隆抗體(即用型，克隆號:4A2C7、EP5)和SP免疫組化試劑盒均購自北京中杉金橋公司。以陽性對照切片作為陽性對照，血清代替一抗為陰性對照，PBS代替一抗為空白對照。Ki-67用0.01 mol/L、pH 6.0的檸檬酸鹽進行高壓修復，E-cadherin用0.001 mol/ L、pH 9.0的EDTA進行熱修復。最后DAB顯色，蘇木精復染，鹽酸乙醇分化，氨水返藍。結果判定:在顯微鏡下觀察，E-cadherin為上皮成分中胞膜及近胞膜胞質著色，Ki-67為胞核著色。E-cadherin按陽性細胞比例及著色深淺評分。陽性強度判定:無著色為0分，淡棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;陽性細胞數目為實際百分率;兩者相乘為評分結果，分值范圍0～300。Ki-67計算陽性細胞比例。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件。E-cadherin在葉狀腫瘤、纖維腺瘤上皮成分中表達是否存在差異采用t檢驗，E-cadherin表達與臨床病理參數的相關性分析采用Pearson相關性分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 E-cadherin蛋白表達 E-cadherin蛋白在纖維腺瘤中的陽性表達為236.50±60.14，在葉狀腫瘤中的陽性表達為175.93±83.83，P=0.032。見插頁Ⅲ圖8。

2.2 E-cadherin表達與葉狀腫瘤病理學特征的關系 E-cadherin的表達隨著間質細胞密度的增加而減少(P=0.00);E-cadherin的表達與腫瘤邊界、組織學分級、細胞異型性、細胞生長過度及核分裂象無關性(P均＞0.05)。見表1。

表1 E-cadherin表達與乳腺葉狀腫瘤病理學特征參數的關系

2.3 E-cadherin蛋白表達與臨床特征及Ki-67表達的相關性 E-cadherin蛋白的表達與PTs患者年齡、腫瘤大小、間質細胞及上皮細胞Ki-67的表達無相關性(r分別=－0.27、0.248、－0.208、－0.102，P均＞0.05)。

3 討論

E-cadherin主要參與細胞的黏附作用，被認為是一種重要的抑癌基因。乳腺癌等許多上皮來源的腫瘤都有E-cadherin的缺失［1］。與上皮性腫瘤不同，本組實驗發現，E-cadherin在PTs的上皮成分中高表達，而在間質細胞中不表達。另外，E-cadherin的表達隨著間質細胞密度的增加而減少;E-cadherin的表達與患者年齡、腫瘤大小及邊界、組織學分級、細胞生長過度及異型性、核分裂象及Ki-67的表達無關。以往人們認為上皮成分不影響葉狀腫瘤的形成和發展。然而，從以上研究結果可以看出葉狀腫瘤的上皮成分與間質成分存在著一定的關聯，且這種關聯對葉狀腫瘤的發展可能有重要作用。

葉狀腫瘤的上皮成分和間質成分都參與PTs的形成，且上皮成分參與間質的生長。上皮蛋白的表達與間質特征的關系表明這兩種成分之間是相互關聯的［2～4］。Wnt信號通路可能是上皮—間質之間相互作用的重要通路［5］。Wnt通路中的許多蛋白，如上皮 Wnt5A、間質 SFRP4等在 PTs中都有過表達［6］。Wnt通路也能影響依賴E-cadherin的細胞黏附，Wnt通路能影響PTs上皮成分中E-cadherin的表達［7］。由此推測E-cadherin在PTs上皮成分中的變化可能與其間質特征相關。

然而，除抑癌基因作用外，E-cadherin還可能作為原癌基因發揮作用。胞質內E-cadherin的裂解片段及其向核內的遷移已經表明，E-cadherin能促進Cyclin D1等目標基因的轉錄［8，9］。另外，E-cadherin也能參與細胞內信號轉導［10，11］。根據以上推測E-cadherin可能通過以上機制促進PTs惡性轉化，但本研究結果顯示，E-cadherin在葉狀腫瘤中充當著類似抑癌基因的角色，這需要今后在細胞及基因水平進一步研究證實。

PTs中上皮性E-cadherin的表達也可能是由于Wnt成分的改變所引起的。這種作用更可能通過非經典型Wnt通路而不是經典型Wnt通路產生的，盡管兩種通路都與E-cadherin介導的黏附作用有關。β-catenin是經典型Wnt通路中的關鍵因子，能調節E-cadherin阻遏蛋白的表達。相反，E-cadherin復合物能調控β-catenin介導的經典型Wnt通路。許多上皮性腫瘤中都能發現經典型Wnt信號通路的激活與E-cadherin表達的下降同時發生。Wnt蛋白通過鈣流入激活非經典型Wnt通路［12］。作為鈣依賴性黏附分子，E-cadherin與非經典型Wnt通路有關。Wnt5A是非經典型Wnt通路中的一個因子，能夠促進 E-cadherin介導的細胞黏附［13］。Wnt5A與E-cadherin的表達在肝癌及乳腺癌中都呈正相關［14］。除Wnt5A外，Wnt信號通路的其他成員，如SFRPs也能增加E-cadherin的表達。SFRP4在PTs的間質成分中表達異常［5］。

PTs與纖維腺瘤有時在形態學上難以鑒別，這兩者在發生、發展過程中有著一定的聯系，有著相同的起源但不同的分化方向。目前，研究更傾向于上皮成分與間質成分互相作用的模式參與PT的起源［15］。本研究結果表明，E-cadherin在乳腺纖維腺瘤上皮成分中的表達比乳腺葉狀腫瘤上皮成分中更高，這可能對我們鑒別這兩者有一定的作用。E-cadherin在上皮成分中表達不夠高時，我們更傾向于診斷葉狀腫瘤。另外，E-cadherin在良性葉狀腫瘤上皮成分中的表達水平隨著間質細胞密度的增加而減少，這提示，E-cadherin在葉狀腫瘤間質細胞生長的過程中可能起著抑制作用，可通過后續研究進一步證實。

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