性能評價、方法學評價及參考區間驗證在ALI FAX血沉檢測質量保證中的應用

性能評價、方法學評價及參考區間驗證在ALI FAX血沉檢測質量保證中的應用

陳顯秋,曲林琳,王學軍,劉天明*

(吉林大學第一醫院 檢驗科，吉林 長春130021)

紅細胞沉降率(血沉，ESR)是指抗凝靜脈血直立靜置于室溫下，紅細胞在單位時間內沉降的速度。有報道，病理性ESR增高與結核、類風濕性關節炎、感染、惡性腫瘤、紅斑狼瘡、多發性骨髓瘤等許多疾病相關[1]，是一項非特異性的檢驗項目。用于ESR檢測的Westergren法被國際血液標準化委員會(ICSH)推薦為ESR測定的標準方法[2]。Westergren法操作簡便，但容易受管內抗凝劑稀釋，不同廠家血沉管的內徑、材質存在差異，檢測用血量較大，操作及結果判讀費時費力，不適合大批量標本ESR的檢測。本檢驗科自2008年引進ALI FAX TEST1血沉儀替代westergren法檢測血沉以來，通過每12個月對其進行儀器校準，隨后評價儀器等準確性、重復性和攜帶污染率等主要性能指標，并進行參考區間驗證，來保證分析過程中的檢驗質量。為了了解儀器法與westergren法檢測血沉的差異以及標本存放時間對結果的影響，我們對ALI FAX TEST1儀器法與Westergren法檢測結果進行差異和相關性比較，對標本穩定性進行評價。

1材料與方法

1．1材料ALI FAX TEST I血沉儀(意大利)和Westergren法檢測的血液樣品均采用乙二胺四乙酸(EDTA)-K2抗凝的真空抗凝管，采集2ml靜脈血抗凝，真空抗凝管購自廣州陽普醫療科技股份有限公司。ALI FAX TEST I血沉儀在檢測前及每年按儀器說明書要求應用配套標準品進行校準。

1.2樣本檢測按照儀器說明書，開機后儀器預熱并進行自檢，儀器前面控制區液晶屏上顯示“adjusting temp…”，待儀器內部溫度穩定在37℃后進行樣本針和管路清洗，然后樣本檢測，按照屏幕提示將裝載有EDTA-K2抗凝血的樣本架插入檢測道，關門，按“START”開始檢測，儀器自動旋轉混勻并完成檢測。每批檢測前及檢測完畢后都進行樣本針和管路清洗，及時清理廢液桶。

1.3性能評價(1)準確度：用ALI FAX TEST l檢測衛生部室間質評血沉5份標本，記錄測定值(X)，將測定值與靶值(Y)做差，計算出偏倚(B)和相對偏倚(%)，公式為B=|X-Y|，B%=|X-Y|/Y×100%；(2)重復性：選用10例ESR結果覆蓋正常、異常的標本分別在血沉儀上連續檢測11次，將第1次測定結果去除，計算每份樣本的變異系數(CV)值；(3)攜帶污染率：選取ESR高值和低值標本各一份，依次檢測高值3次(H1，H2，H3)、低值3次(L1，L2，L3)，計算攜帶污染率，公式為攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.4穩定性評價隨機抽取40例EDTA-K2抗凝血標本各2份，采集后30 min內在ALI FAX TEST l上檢測完畢，將標本分別保存在室溫(23-26℃)和4-8℃下于采集后4 h、16 h進行儀器法檢測，比較不同存放條件下ESR的變化情況。

1.5方法學評價抽取EDTA-K2抗凝血標本40份(血沉儀結果標記*者除外)，用儀器法檢測得到的ESR結果涵蓋高、中、低水平，再用Westergren法[3]進行檢測，將兩種方法所得的ESR結果做顯著性檢驗及相關性分析(r值及回歸方程)，分析比較兩種檢測方法的差異及相關程度。

1.6參考區間驗證選取健康男性、女性EDTA-K2抗凝血液標本各20例，在經校準并通過性能驗證的ALI FAX TEST1血沉儀上進行檢測，每組ESR檢測結果95%(19例)分布在現行參考區間內，1例結果在參考區間以外時判定為該參考區間有效。如果某組中有≥2例檢測結果在參考區間之外，則必須重新收集這組(20例)標本重新檢測，不超過2例結果在參考區間以外時可判定為參考區間通過驗證；若在參考區間以外的超過2例，在排除標本原因、檢測系統和檢測程序原因后，進一步進行生物參考區間調查，必要時自行建立參考區間。

1.7統計分析顯著性檢驗、相關性分析、95%CI等統計應用GraphPad Prism5.0進行完成。

2結果

2.1性能評價

2.1.1準確度應用ALI FAX TEST l檢測衛生部室間質評5個水平的樣品，結果見表1。所得的偏倚均在允許范圍內。

2.1.2重復性10例ESR結果覆蓋正常、異常的全血標本，每份標本經ALI FAX TEST1重復檢測11次，將第1次測定結果去除，計算其余10次的CV值，1份低值ESR樣本的CV為14.5%，其余均<10%(見表2)，符合重復性不超過1/3TEa的標準[4]。

2.1.3攜帶污染率選取ESR高值和低值標本各一份，高值3次(H1，H2，H3)測定結果分別為116、115、120，低值3次(L1，L2，L3)測定結果分別為6、8、5，利用攜帶污染率公式(L1-L3)/(H3-L3)×100%計算出攜帶污染率0.8%。

表2　ALI FAX TEST l重復性驗證結果

2.2穩定性評價40例EDTA-K2抗凝血標本各2份，采集后30 min內在ALI FAX TEST l上完成檢測，隨后將標本分別保存在室溫(23-26℃)和4-8℃下于采集后4 h、16 h進行儀器法檢測。與采集后立即檢測的ESR結果比較，采集后室溫、4-8℃放置4 h檢測的ESR結果無明顯變化；而在室溫或4-8℃放置16 h后檢測ESR結果明顯降低(P<0.05，見表3)。

表3　 ALI FAX TEST l穩定性檢測結果評價(ESR單位：mm/h)

注：△與采集后30 min內ESR檢測結果相比。

2.3方法學比較ALI FAX TEST1儀器經校準、配套標準品通過正確度驗證，40份EDTA-K2抗凝血標本經儀器法檢測，與Westergren法3檢測相比，兩種方法所得的ESR結果無顯著性差異(P>0.05)，相關性較好(y=0.9294x-0.9019，R2=0.8222，圖1)。

2.4參考區間驗證ESR現用參考區間，男性為0-15 mm/L，女性為0-20 mm/L。ALI FAX TEST1血沉儀經儀器校準、性能驗證通過后，檢測20例健康男性及20例健康女性ESR(表4)，結果健康男性ESR分布范圍2-25 mm/L，其中有1例ESR為25 mm/L超出參考區間上限，其余19例ESR結果在2-15 mm/L范圍內，符合95%可信區間的要求；健康女性ESR分布范圍2-28 mm/L，其中有1例ESR為28 mm/L超出參考區間上限，其余19例ESR結果在2-18 mm/L范圍內，符合95%可信區間的要求。

圖1　ALI FAX TEST1與Westergren法檢測ESR結果差異

表4　健康男性、女性ESR檢測結果(單位：mm/h)

3討論

ALI FAX TEST1全自動血沉儀采用950 nm波長的紅外線進行檢測，光電二極管檢測器收集的電脈沖信號與紅細胞在毛細管固定位置出現的密集程度相關。每個樣本在單位時間內所檢測的電脈沖信號變化被描繪成一條沉降曲線，在單位時間內信號的減低被轉換成數值。該儀器檢測速度110份/小時，每個測試所需的樣本量僅為150 μl全血，儀器配套樣本架可同時放入60份標本進行檢測，有利于批量上樣、自動旋轉混勻，適合本檢驗科進行大批量血沉樣本的檢測。儀器內部溫度恒定在37℃，保證了檢測環境的穩定性。因此ALI FAX TEST1血沉儀與westergren法相比除了檢測速度的優勢外，還可基本排除環境溫度、樣本混勻、管徑大小等實驗因素的影響。為了提高儀器法檢測的準確性和重復性，需要監控儀器性能。本檢驗科按照ISO15189：2007《醫學實驗室——質量和能力的專用要求》[5]和美國臨床和實驗室標準協會(CLSI)發布的性能驗證指南EP10-A[6]制定了血沉檢測的性能驗證方案，規定了性能驗證的內容、頻率、時機、步驟、結果分析和結論。一般情況下在每次儀器校準之后進行性能評價，包括正確度、精密度和攜帶污染率。應用可溯源的配套標準品[7]對該儀器進行正確度驗證，配合3個水平的室內質控品，以保證儀器檢測的準確性。重復性的評價結果表明，ESR值較低時，CV值較高，隨著ESR值升高，其CV逐漸降低，ALI FAX對于檢測高值血沉表現出良好的重復性，這對于臨床疾病的治療監測、隨訪具有重要的意義。該儀器的準確性、重復性較好，檢測效率較高，使用中還需注意攜帶污染現象[8]，經評價該儀器攜帶污染率低，能夠較好地保障檢測結果準確性和重復性。治療過程中或治療后患者血液中的藥物成分或特殊的代謝產物可能會對儀器的電脈沖信號產生干擾，進而影響個別結果的準確性[9]。

考慮到國際血液標準化委員會(ICSH)推薦用EDTA-K2作為血沉檢測的抗凝劑，標本穩定性評價和參考區間驗證時均用EDTA-K2抗凝全血完成。ALI FAX TEST 1儀器經校準、性能評價后，40例樣本分別用儀器法和westergren法檢測，經證實兩種方法檢測結果無顯著差異，相關性也很好，而儀器法實驗溫度為37℃，westergren法為室溫，可見對于儀器法和westergren法兩種方法來講，不同的實驗溫度對檢驗結果影響不大。而檢測需在樣本采集后4 h內完成。

由于儀器法與westergren法檢測血沉的方法學不同，而目前國內較權威的參考資料[3]和醫學實驗室一直采用NCCLS C28-A2[10]推薦可以引用權威書刊、其他實驗室或制造商提供的生物參考區間，采用適用性驗證的方法建立參考區間，在2008年ALI FAX TEST 1應用之初進行了參考區間調查，認為wesIergren法的參考區間適用于儀器法檢測。根據ISO15189：2012《醫學實驗室質量和能力的專用要求》[11]規定，實驗室必須慎重建立自己的生物參考區間并定期評審。對于現用的參考區間，本檢驗科每年進行一次參考區間驗證，并召開一次臨床聯席會評審參考區間，以確保參考區間適用。

隨著檢驗自動化的發展，ALI FAX TEST 1血沉儀檢測血沉比westergren法更容易被醫學實驗室尤其是樣本量大的實驗室采納，但儀器法檢測要求重視儀器的維護和保養，以保證儀器性能。因此定期的性能驗證有利于保證結果的準確性和重復性，還能及時提示儀器異常，為血沉檢測準確性和重復性提供保障。

參考文獻：

[1]朱喜丹,田剛,王南華.ROC曲線評價紅細胞沉降率在14種疾病中的診斷價值[J]．《國際檢驗醫學雜志，2013，3:276.

[2]ICSH recommendations for measurement of erythrocyte sedimentation rate.International Council for Standardization in Haematology[J].J Clin Pathol，1993，46(3):198.

[3]葉應嫵，王毓三.全國臨床檢驗操作規程[M]．第3版.南京:東南大學出版社，2007.

[4]Proficiency testing requirements under CLIA '88.American Society of Internal Medicine.

[5]ISO 15189:2007《Medical laboratories -- Particular requirements for quality and competence》.

[6]EP10 A:1998《Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Laboratory Methods》

[7]Cha CHI,Cha YJ,Park CJ,et al.Evaluation of the TEST 1 erythrocyte sedimentation rate system and intra- and inter-laboratory quality control using new latex control materials[J].Clin Chem Lab Med，2010，48(7):1043.

[8]張智慧，湯菲，王憲靈，等．全自動生化分析儀攜帶污染的原因及對策[J]．臨床誤診誤治，2009，22(12)：18．

[9]Hardeman MRI,Levitus M,Pelliccia A,et al.Test analyser for determination of ESR Practical evaluation and comparison with the Westergren technique[J].Scand J Clin Lab Invest，2010，70(1):21.

[10]NccLS C28-A2 How to Define and Reference Intervals in the Clinical Laboratory．NCCLS．2000．

[11]ISO 15189:2012《Medical laboratories-Particular requirements for quality and competence》.

(收稿日期：2015-01-17)

文章編號：1007-4287(2015)12-2105-04

*通訊作者