尿激酶型纖溶酶原激活劑和糖原合成酶激酶-3β磷酸化在胃癌組織中的表達及臨床意義

浦　勇

江南大學附屬無錫市第四人民醫院,江蘇省無錫市　214000

論著

尿激酶型纖溶酶原激活劑和糖原合成酶激酶-3β磷酸化在胃癌組織中的表達及臨床意義

浦勇

江南大學附屬無錫市第四人民醫院,江蘇省無錫市214000

摘要目的：探討尿激酶型纖溶酶原激活劑(Urokinase-type plasminogen activator，uPA)和糖原合成酶激酶-3β磷酸化(Phosphorylation-glycogen synthase kinase 3β，P-GSK3β)在胃癌組織中的表達及臨床意義。方法：選取39例胃癌組織樣本、31例萎縮性胃炎組織樣本及25例癌旁正常組織樣本。采用免疫組化法檢測組織中uPA與P-GSK3β陽性表達。分析uPA與P-GSK3β表達與胃癌臨床病理特征的關系。結果：胃癌組織中 uPA與P-GSK3β陽性表達率顯著高于癌旁正常胃組織及萎縮性胃炎組織，組間比較差異具有統計學意義(P<0.05)；癌旁正常胃組織及萎縮性胃炎組織的uPA與P-GSK3β陽性表達率比較無統計學差異(P>0.05)。胃癌組織中uPA和P-GSK3β陽性表達與患者性別、年齡無關(P>0.05)，與臨床TNM分期、病理分級及是否伴發淋巴結轉移有關(P<0.05)。Spearman相關分析結果顯示，胃癌組織中uPA和P-GSK3β陽性表達呈正相關(P<0.05)。結論：uPA與P-GSK3β在胃癌組織中呈高表達，并與胃癌臨床分期、病理分級及淋巴結轉移密切相關。

關鍵詞尿激酶型纖溶酶原激活劑糖原合成酶激酶-3β磷酸化胃癌

The Expression and Clinical Significance of Urokinase-type Plasminogen Activator and Phosphorylation-glycogen Synthase Kinase 3β on Gastric Cancer Tissue

PU Yong.AffiliatedWuxiFourthPeople’sHospitalofJiangnanUniversity,WuxiCity，JiangsuProvince214000

ABSTRACT Objective:To evaluate the expression and clinical significance of urokinase-type plasminogen activator and phosphorylation-glycogen synthase kinase 3β on gastric cancer tissue.Methods:Selected 39 tissue samples of gastric cancer, 31 tissue samples of atrophic gastritis, and 25 tissue samples of carcinoma side normal tissue.Immunohistochemistry was used to examine the positive expression of uPA and P-GSK3β.Analyzed the relationship between gastric cancer pathological features and expression of uPA and P-GSK3β.Results:The positive expression of uPA and P-GSK3β of gastric cancer tissue was significantly higher than atrophic gastritis tissue and carcinoma side normal tissue, the difference showed statistically significant(P<0.05).The positive expression of uPA and P-GSK3β of atrophic gastritis tissue and carcinoma side normal tissue were no statistically different(P>0.05).The positive expression of uPA and P-GSK3β of gastric cancer tissue were no correlated with age and gender(P>0.05),but were closely correlated with the TNM,differentiation and lymph nodes metastasis(P<0.05). Spearman analysis showed that, the positive expression of uPA and P-GSK3β of gastric cancer tissue had positive correlation(P<0.05).Conclusion:The uPA and P-GSK3β highly expression in gastric cancer tissues, and closely relat to the clinical stage, pathological grading and lymph node metastasis.

KEY WORDS Urokinase-type plasminogen activator,Phosphorylation-glycogen synthase kinase 3β,Gastric cancer

惡性腫瘤的發生和發展與多種促癌基因和抑癌基因表達異常密切相關。尿激酶型纖溶酶原激活劑(Urokinase-type plasminogen activator，uPA)是一種絲氨酸蛋白酶，其介導的纖維蛋白溶解系統與惡性腫瘤細胞的增殖及侵襲有關[1]。糖原合成酶激酶-3β 磷酸化(Phosphorylation-glycogen synthase kinase 3β，P-GSK3β)是GSK3β經N端或C端磷酸化得到的產物，具有促進惡性腫瘤浸潤、轉移的作用[2]。uPA與P-GSK3β在大腸癌[3]、卵巢癌[4]及子宮內膜癌[5]等多種癌組織中呈強表達陽性已得到證實，但其在胃癌組織中的表達情況尚未明確。本研究通過檢測癌旁正常胃組織、萎縮性胃炎組織及胃癌組織中uPA與P-GSK3β表達情況，分析uPA與P-GSK3β表達與胃癌臨床病理特征的關系，探討二者在胃癌發生、發展中的作用，以期為臨床診療提供科學依據。

1資料與方法

1.1一般資料選取2013年1月-2015年1月我院收治的胃癌患者組織樣本共39例為研究對象。患者取樣前均未接受放化療治療。39例患者中，男24例，女15例；年齡38~77歲，平均年齡(62.8±9.5)歲；病理分級：高分化4例，中分化10例，低分化10例，未分化15例；TNM分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期7例，Ⅲ期13例，Ⅳ期14例；淋巴結轉移：有28例，無11例。取同期經病理確診為萎縮性胃炎的胃組織標本31例。取癌旁(距腫瘤邊緣>5cm)正常組織標本25例為正常對照。

1.2試劑uPA與P-GSK3β抗體購于Santa公司；DAB染色試劑盒與S-P免疫組織化學染色試劑盒購于南京建成生物有限公司。

1.3免疫組化按S-P免疫組織化學染色試劑盒說明書進行免疫組化操作，檢測胃組織中uPA與P-GSK3β陽性表達。組織切片以3%H2O2室溫孵育10min，抗原熱修復，依次加入一抗、二抗及辣根過氧化物酶，DAB顯色，蘇木精染色，梯度乙醇依次脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察陽性表達。取已知切片為陽性對照，PBS緩沖液代替一抗為陰性對照。

1.4結果判定以細胞質內出現棕黃色顆粒定義為uPA和P-GSK3β陽性表達。按細胞質內染色強度計分：0分：細胞質內無顯色；1分：細胞質內出現淺黃色顆粒；2分：細胞質內出現棕黃色顆粒；3分：細胞質內出現棕褐色顆粒。按陽性細胞比例計分(200倍視野下，計數1 000個細胞)：0分：陽性細胞<10%；1分：陽性細胞比例為10%~30%；2分：陽性細胞比例為31%~60%；3分：陽性細胞比例≥61%；染色強度計分乘以陽性細胞比例計分，所得分值為0分判定為陰性，所得分值≥1分判定為陽性。所有切片均由2位資深病理醫師逐一觀察、評分。

1.5統計學方法采用SPSS19.0統計軟件，uPA和P-GSK3β陽性表達率用百分數(%)表示，組間比較用χ2檢驗，uPA與P-GSK3β陽性表達率相關性分析用Spearman相關分析，P<0.05為差異具有統計學意義。

2結果

2.1uPA與P-GSK3β在癌旁正常胃組織、萎縮性胃炎及胃癌組織中的表達胃癌組織中 uPA與P-GSK3β陽性表達率顯著高于癌旁正常胃組織及萎縮性胃炎組織，組間比較差異具有統計學意義(P<0.05)；癌旁正常胃組織及萎縮性胃炎組織的uPA與P-GSK3β陽性表達率比較無統計學差異(P>0.05)，見表1。

表1　uPA與P-GSK3β在正常胃組織、萎縮性胃炎

注：與正常胃組織比較，*P<0.05；與萎縮性胃炎比較，#P<0.05。

2.2uPA和P-GSK3β與胃癌組織病理特征的關系在胃癌組織中，uPA和P-GSK3β陽性表達與患者性別、年齡無關(P>0.05)；與臨床病理分期、病理分級及是否伴發淋巴結轉移有關(P<0.05)，見表2。

表2　uPA和P-GSK3β與胃癌組織病理特征的關系

2.3uPA和P-GSK3β表達的相關性分析Spearman相關分析結果顯示，胃癌組織中uPA和P-GSK3β陽性表達呈正相關(r=0.379,P=0.001)。

3討論

侵襲和轉移是惡性腫瘤最重要的生物學特征，腫瘤細胞所分泌的多種蛋白水解酶可通過水解細胞外基質和基底膜為腫瘤細胞侵襲和轉移提供先決條件[6]。uPA作為絲氨酸蛋白酶，表達定位于細胞胞漿中，可與細胞表面受體相結合，激活纖維蛋白酶，從而參與機體多種生理病理過程[7]。uPA在組織中的過表達，可通過直接或間接作用降解細胞外基質，從而為腫瘤細胞浸潤和轉移提供病理基礎[8]。本研究顯示，胃癌組織中uPA陽性表達率最高，其次為萎縮性胃炎及癌旁正常組織，提示uPA參與胃癌的發生與發展，并對胃組織癌變過程起促進作用。本研究發現uPA陽性表達與臨床病理分期、病理分級及是否伴發淋巴結轉移有關，其結果與左玉如等[9]研究結果一致。病理分期越高、組織分化程度越低的胃癌組織，其uPA陽性表達率越高，提示uPA與腫瘤浸潤能力及分化程度密切相關，分析其原因可能與uPA的酶活性有關。此外，伴發淋巴結轉移者的胃癌組織uPA陽性表達也顯著增高，提示uPA在胃癌細胞侵襲和轉移中發揮了一定作用[10,11]。

GSK3β是多功能絲氨酸/蘇氨酸激酶GSK3的一個亞型，在人體內多數組織、細胞內均有廣泛表達，其活性由不同位點的磷酸化狀態調節，當發生磷酸化時GSK3β活性則大大降低[12]。絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase，MAPK)家族中的p38MAPK可通過使GSK3β的C端或N端磷酸化，使GSK3β失活，導致Wnt通路中的管家基因β-catenin穩定性發生改變，抑制腫瘤細胞間粘附能力，增強腫瘤細胞-基質間粘附能力，進而促進惡性腫瘤細胞增殖與侵襲[13]。故認為，磷酸化后的GSK3β，即P-GSK3β可能對惡性腫瘤的發生與發展起到促進作用[14]。本研究顯示，P-GSK3β在癌旁正常胃組織中并不表達，在萎縮性胃炎中弱表達，在胃癌組織中呈高表達。此外，P-GSK3β陽性表達與胃癌臨床病理分期、病理分級及是否伴發淋巴結轉移有關，提示P-GSK3β與胃癌的浸潤、分化及轉移能力密切相關[15]。

本研究證實，胃癌組織中uPA與P-GSK3β表達呈明顯正相關，其機制可能為MAPK通路中p38活化導致多種轉錄因子磷酸化，引起uPA基因轉錄增強，而uPA與P-GSK3β可能通過p38發生交互作用，共同促進胃癌進展。

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(編輯雅文)

收稿日期2015-07-14

中圖分類號：R735.2

文獻標識碼：A

文章編號：1001-7585(2015)23-3180-03