冷凝集試驗和酶聯免疫吸附試驗對呼吸道肺炎支原體IgM抗體檢測的評價

季艷艷+楊正貴

[摘要] 目的 評價冷凝集試驗和酶聯免疫吸附試驗對診斷呼吸道肺炎支原體IgM抗體感染的臨床價值。 方法 收集我院呼吸內科2012年12月～2013年10月共計100份診斷為呼吸道肺炎支原體感染患者的痰液標本。比較①酶聯免疫吸附試驗與冷凝集試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性。②酶聯免疫吸附試驗與冷凝集試驗敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值、陽性擬然比和陰性擬然比。 結果 酶聯免疫吸附試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性分別為95%、3%、97%、5%，冷凝集試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性分別為43%、39%、61%、57%，差異有統計學意義（P<0.05）。 酶聯免疫吸附試驗和冷凝集試驗敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值、陽性擬然比和陰性擬然比分別為95%、97%、96%、96.9%、95.1%、31.7%、0.05%及43%、61%、52%、52.4%、51.7%、1.1%、0.93%，差異有統計學意義（P<0.05）。 結論 本研究認為酶聯免疫吸附試驗對呼吸道肺炎支原體IgM抗體敏感性、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值、陽性擬然比均明顯高于冷凝集試驗。

[關鍵詞] 冷凝集試驗；酶聯免疫吸附試驗；呼吸道肺炎支原體；IgM抗體

[中圖分類號] R446.6 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2015）04-0107-03

[Abstract] Objective To evaluate the clinical value of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay in the diagnosis of respiratory tract mycoplasma pneumoniae IgM antibody infection. Methods A total of 100 sputum samples of the patients diagnosed with respiratory tract mycoplasma pneumoniae infection in the respiratory medicine department of our hospital were collected. ①The true positive，false positive，true negative and false negative rates of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay were compared. ②The sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， negative predictive value， positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of cold agglutination test and enzyme-linked immunosorbent assay were compared. Results The true positive，false positive，true negative and false negative rates of enzyme-linked immunosorbent assay were 95%， 3%， 97% and 5% respectively and those of the cold agglutination test were 43%， 39%， 61% and 57% respectively， with statistically significant differences （P<0.05）. The sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， negative predictive value， positive likelihood ratio and negative likelihood ratio of enzyme-linked immunosorbent assay and cold agglutination test were 95%， 97%， 96%， 96.9%， 95.1%， 31.7%， 0.05% and 43%， 61%， 52%， 52.4%， 51.7%， 1.1%， 0.93%， respectively， with statistically significant differences（P<0.05）. Conclusion This study suggests that enzyme-linked immunosorbent assay has obviously higher sensitivity， specificity， accuracy， positive predictive value， negative predictive value and positive likelihood ratio to respiratory tract mycoplasma pneumoniae IgM antibody than cold agglutination test.

[Key words] Cold agglutination test； Enzyme-linked immunosorbent assay； Respiratory tract mycoplasma pneumoniae； IgM antibody

支原體是一類介于細菌與病毒之間、無細胞壁的微生物，易受環境變化而破壞，有研究統計[1]在確診的肺炎病例中，由肺炎支原體引起的肺炎占15%～20%，支原體通過飛沫傳入呼吸道，粘附上皮細胞表面神經氨酸受體上，但支原體還可通過血行感染全身任何器官組織。支原體好發于晚秋，但無明顯的季節性[2]。人群對支原體普遍易感，學齡兒童由于呼吸系統發育不全，非常容易感染支原體，但近幾年疾病譜變化，成人感染支原體的比例逐步增高，因此，快速檢測支原體對臨床診斷有重要意義[3]。目前支原體感染的常用實驗室檢查手段為冷凝集試驗、酶聯免疫吸附試驗、PCR技術。但是由于PCR技術設備昂貴，且需要專業的技術人才，因此PCR法在臨床中使用較少，均可呈陽性反應，對治療無指導意義。因此本研究的目的為評價冷凝集試驗和酶聯免疫吸附試驗對診斷呼吸道肺炎支原體IgM抗體感染的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

收集我院呼吸內科2012年12月～2013年10月共計100份診斷為呼吸道肺炎支原體感染患者的痰液標本，肺炎支原體感染患者中男57例和女43例，年齡17～67歲，平均（39.8±25.7）歲。所有研究對象均簽定知情同意書、保密知情書，研究通過醫院倫理道德委員會的批準、核實。

1.2 入選標準

①就診時臨床資料、治療經過完整。②呼吸道支原體感染的診斷符合中華醫學會呼吸內科學分會關于呼吸道支原體感染的診斷與鑒別診斷[4]。③每個研究對象能配合護理人員，自愿參與本次研究。

1.3 排除標準

①入院時生命體征不平穩的患者。②入院有嚴重肝腎功能不全、惡性腫瘤、自身免疫性疾病者，藥物有過敏、惡性心律失常者。

1.4 冷凝集試驗

在室溫下，配人紅細胞懸液（患者自身紅細胞與5倍生理鹽水進行配比），然后取試管10支，各加生理鹽水0.1 mL，血清0.1 mL加第1管，混勻后吸出0.1 mL至第2管，按上述的配比方法一直加至第9管，第10管作對照；每管加入人紅細胞懸液0.1 mL，在4℃的冰箱中放置1 h，陽性為出現紅細胞凝集，若加入37℃水浴后凝集消失則判定真陽性。當滴度大于1∶32有參考意義。

1.5 酶聯免疫吸附試驗

采用福建三明博峰生物科技有限公司提供的肺炎支原體IgM抗體試劑盒，操作及結果判斷按說明書進行。

1.6觀察指標

真陽性、假陽性、真陰性及假陰性敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值、陽性擬然比和陰性擬然比。

1.7 評價指標

比較①酶聯免疫吸附試驗與冷凝集試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性。②酶聯免疫吸附試驗與冷凝集試驗敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值、陽性擬然比和陰性擬然比。

1.8 統計學方法

將資料錄入SPSS18.0軟件。所有計量資料符合正態分布，采用均數±標準差（x±s）描述，兩組均數的比較使用t檢驗。計數資料采用頻數描述，用χ2檢驗法。三組間比較采用ANOVA單因素方差分析，方差齊者用LSD法檢驗，方差不齊者用Games-Howenll法。多因素分析：將單因素分析中P<0.05的變量納入Logistic回歸分析，計算優勢比及95%可信區間。P<0.05為差異有統計學意義。

3 討論

肺炎支原體（M.Pneumonia）是人類支原體肺炎的病原體。支原體肺炎的病理改變以間質性肺炎為主，有時并發支氣管肺炎，稱為原發性非典型性肺炎。主要經飛沫傳染，潛伏期2～3周，發病率以青少年最高。臨床癥狀較輕，甚至根本無癥狀，若有也只是頭痛、咽痛、發熱、咳嗽等一般的呼吸道癥狀，但也有個別死亡報道。一年四季均可發生，但多在秋冬時節。肺炎支原體也是誘發哮喘的重要病原體，可引起肺外器官病變，如腦炎、血液病、關節炎或多器官功能衰竭。支原體肺炎的病理變化主要為急性氣管-支氣管炎和間質性肺炎，支氣管黏膜有中性粒細胞浸潤，肺泡內可含少量滲出液，肺泡壁和間隔中有中性粒細胞浸潤[5-8]。肺炎支原體的致病首先通過其頂端結構粘附在宿主細胞表面，并伸出微管插入胞內吸取營養、損傷細胞膜，繼而釋放出核酸酶、過氧化氫等代謝產生引起細胞的溶解、上皮細胞的腫脹與壞死。誘發機體產生的抗體也可能參與了上述病理損傷。肺炎支原體感染后癥狀較輕，發病初期有乏力、咽痛、肌肉酸痛、惡心等，熱度不一，2～3 d后出現明顯的呼吸道癥狀，發熱可持續2～3周，可有肺膿腫、支氣管擴張、閉塞性細支氣管炎，可聞及干性或濕性啰音。支原體肺炎可并發各種肺外并發癥，如自身免疫性溶血性貧血、腦脊膜炎、心包炎、結節性紅斑等皮膚黏膜損害。X線上肺部可表現斑點片狀模糊影，可侵犯至多葉，伴肺門淋巴結腫大。MP感染呈散在發病，一年四季均可發病。研究指出肺炎支原體感染臨床癥狀不明顯，隱性感染較多，癥狀不典型，僅靠臨床癥狀難以診斷[9]。因此，診斷須依據實驗室檢查。

本研究發現酶聯免疫吸附試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性分別為95%、3%、97%、5%，冷凝集試驗的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性分別為43%、39%、61%、57%，差異有統計學意義（P<0.05）。酶聯免疫吸附試驗敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值、陽性擬然比和陰性擬然比分別為95%、97%、96%、96.9%、95.1%、31.7%、0.05%；冷凝集試驗敏感度、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值、陽性擬然比和陰性擬然比分別為43%、61%、52%、52.4%、51.7%、1.1%、0.93%，差異有統計學意義（P<0.05）。即本次研究認為酶聯免疫吸附試驗對呼吸道肺炎支原體IgM抗體敏感性、特異度、準確度、陽性預測值、陰性預測值、陽性擬然比均明顯高于冷凝集試驗。

首先，我們考慮冷凝集試驗雖然方法簡單，但其敏感性和特異性差。研究發現[10-13]它是一種非特異性血清學反應，腺病毒感染、流感、肝硬化、自身免疫性溶血性貧血、螺旋體病均可產生假陽性。所以冷凝集試驗檢測抗體確診較困難[14]。而酶聯免疫吸附試驗應用吸附于載體表面的抗原，與相應抗體結合后形成免疫復合物，與酶標記的第二抗體結合后形成免疫反應，借助酶對底物發生降解作用后顯現的顏色反應進行判斷。在本研究中表現很高的特異性和敏感性。有學者對肺炎支原體感染患者進行酶聯免疫吸附試驗，結果發現在發病后4～7周依靠此方法即可檢出肺炎支原體感染。而且有學者還指出該抗體還可作為亞急性感染的補充診斷，陽性率與病情呈正比。但是我們要注意到肺炎支原體感染早期（1～3 d）患者體內還未產生足夠被檢測出的抗體，所以酶聯免疫吸附試驗不能做到早期診斷。

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（收稿日期：2014-11-13）