復方中草藥肉雞飼料添加劑的藥效學研究

范廣璞+楊猛

摘要：為了給復方中草藥肉雞飼料添加劑的研制奠定藥效學基礎，依據單味中草藥對肉雞規模化養殖常見病原菌的抑菌和飼喂效果，結合中醫藥理論，配制出3劑中草藥復方制劑，研究了3劑中草藥復方制劑的免疫學試驗，結果顯示配制的3劑中草藥復方制劑都能夠明顯提高肉雞機體的免疫機能。免疫學綜合試驗結果表明，復方制劑Ⅲ效果最佳，最終確定中草藥復方Ⅲ進行飼喂試驗。

關鍵詞：中草藥；飼料添加劑；藥效學

中圖分類號： S816.75文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2015）02-0198-03

收稿日期：2014-04-17

基金項目：江蘇省高校科研成果產業化推進項目（編號：JHZD08-47）。

作者簡介：范廣璞（1968—），江蘇淮安人，副教授，主要研究方向為藥物微生物技術。E-mail：spxyym80@163.com。

隨著肉雞飼養方式從散養型向規模化轉變，養殖密度增加1倍，發病率會增加4倍以上。為保障肉雞的存活率，飼料添加劑的使用量逐漸增加，在為肉雞養殖業的健康發展作出巨大貢獻的同時，也衍生了不少問題。飼料添加劑含有抗生素類藥物，可以提高肉雞的存活率和產量，但雞肉中藥物殘留的提高，直接危害了人類健康[1-3]。隨著生活水平的提高，人們健康保健意識顯著增強，消費者對雞肉的品質和安全性等方面的要求顯著提高，低脂藥殘少的雞肉成為消費者的首選。

開發一種既能提高肉雞存活率和產量，又能改善雞肉品質的飼料添加劑迫在眉睫，中草藥無毒副作用、無抗藥性、無污染、無殘留，多為常見藥物，價格低廉，優于抗生素，因而成為人們研究開發的首選對象[4-8]。本研究在單味中草藥對肉雞養殖常見菌抑菌和飼喂研究的基礎上，依據中藥配伍的原理，配制3劑中草藥復方制劑，并對其進行免疫學試驗，篩選出藥效最好的中草藥復方制劑，進行飼喂試驗，旨在為研制應用于肉雞養殖業的復方中草藥肉雞飼料添加劑奠定基礎。

1材料與方法

1.1試驗中草藥復方

根據單味中草藥的抑菌效果和病原菌種類，結合中醫藥理論，配制出3劑中草藥復方制劑，分別為制劑Ⅰ、制劑Ⅱ、制劑Ⅲ[9]。

1.2試驗動物

昆明種小白鼠、家兔、雞。

1.3試劑與儀器

牛津杯、瓊脂培養基、鮮血瓊脂培養基、無菌營養肉湯、抗雞紅細胞抗體、蒸餾水、無菌生理鹽水、小牛血清淋巴細胞分層液、0.8%戊二醛溶液、蘇木精和伊紅染色液、培養皿 TDL-40B 低速臺式水平離心機、低溫冰箱、電熱恒溫水浴箱、OLYMPUS顯微鏡等。

1.4方法

1.4.1抗雞紅細胞抗體的制備選擇體重量2～3 kg的健康雄性家兔，用Hanks液洗過的壓積雞紅細胞進行免疫。每日背部皮下注射50%雞壓積紅細胞1次，連續5次，注射量分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL；7 d后耳靜脈注射50%的壓積雞紅細胞懸液1 mL，連續3 d，用96孔反應板測定抗體效價，當抗體效價開始下降時，耳靜脈注射50%的壓積紅細胞懸液2 mL加強免疫1次，3 d后開始測定抗體效價，當效價達1 ∶4 096時捕殺，采血、分離血清，-20 ℃保存備用[10]。

1.4.2中草藥飼料添加劑飼喂試驗試驗組小白鼠飼喂含1%中草藥飼料添加劑的飼料，對照組小白鼠飼喂正常的飼料，連續飼喂7 d，分別對試驗組和對照組小白鼠Ea花環形成率、EAC花環形成率、淋巴細胞轉化率、紅細胞C3b受體花環形成率和IC花環形成率等免疫指標進行測定[10]。

1.4.3測定方法Ea花環形成率的測定：按林清華的方法[11]；EAC花環形成率的測定、淋巴細胞轉化率的測定、中性粒細胞功能的測定，按何昭陽等的方法[12]；紅細胞免疫功能的測定：按朱立平等的方法[13]測定紅細胞C3b受體花環形成率和紅細胞IC花環形成率。

1.5統計與分析

試驗值以平均數±標準差（x±s）表示，并采用SPSS 17.0進行單因素方差分析。

2結果與分析

2.1中草藥飼料添加劑對小白鼠Ea花環率的影響

2.2中草藥飼料添加劑對小白鼠EAC花環形成率的影響

從表2可以看出，飼喂后10 d，制劑Ⅰ、制劑Ⅱ試驗組小白鼠EAC玫瑰花環形成率與對照差異顯著，制劑Ⅲ試驗組與對照比較差異極顯著，制劑Ⅲ試驗組與制劑Ⅰ、制劑Ⅱ組比較差異顯著；20 d時，制劑Ⅰ、制劑Ⅱ和制劑Ⅲ試驗組小白鼠EAC玫瑰花環形成率與對照差異顯著，各制劑試驗組間差異不顯著。30 d時，各處理間差異不顯著。表2中藥飼料添加劑對小白鼠EAC玫瑰花環形成率的影響

處理EAC玫瑰花環率（%）10 d20 d30 d對照 12.050±1.682aA12.450±1.763bA 12.320±1.780a 制劑Ⅰ15.050±1.528bAB 14.785±1.248aA 13.617±1.491a 制劑Ⅱ15.796±1.426aAB14.869±1.236aA13.627±1.483a制劑Ⅲ18.326±2.236cB15.896±2.432aA13.323±1.681a

2.3淋巴細胞轉化率測定

從表3可以看出，飼喂10 d，制劑Ⅰ、制劑Ⅱ試驗組小白鼠的淋巴細胞轉化率與對照差異顯著，制劑Ⅲ試驗組與對照差異極顯著，與制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組差異顯著；20 d時，制劑Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組與對照差異顯著。30 d時，各處理間差異不顯著。表3中草藥飼料添加劑對小白鼠淋巴細胞轉化率的影響

處理淋巴細胞轉化率（%）10 d20 d30 d對照 52.520±3.543aA52.785±3.203bA57.785±2.858a制劑Ⅰ56.735±3.595bAB55.520±3.355aA53.570±3.508a制劑Ⅱ56.265±3.240bAB55.785±2.548aA53.858±2.580a制劑Ⅲ60.582±3.430cB56.510±2.436aA53.695±2.230aendprint

2.4中性粒細胞功能測定

由表4可知，飼喂10 d，制劑Ⅰ、Ⅱ試驗組小白鼠中性白細胞吞噬活性與對照差異顯著，制劑Ⅲ組與對照差異極顯著，與制劑Ⅰ、Ⅱ組差異顯著；20 d時，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠中性白細胞吞噬活性與對照差異顯著。30 d時，各處理間差異不顯著。

2.5紅細胞C3b受體花環率的測定

從表5可以看出，飼喂10 d，制劑Ⅰ試驗組、制劑Ⅱ試驗組小白鼠C3b受體花環形成率與對照差異顯著，制劑Ⅲ組與對照差異極顯著，與制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組比較差異顯著；20 d 時，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠C3b受體花環形成率與對照差異顯著。30 d時，各處理間差異不顯著。表5中藥復方對小白鼠紅細胞C3b受體花環形成率

處理C3b花環形成率（%）10 d20 d30 d對照 8.735±1.798aA8.653±1.899bA8.893±1.471a制劑Ⅰ11.653±2.423bAB 11.520±2.630aA8.328±1.680a制劑Ⅱ11.381±1.932bAB11.450±1.652aA8.130±1.864a 制劑Ⅲ14.910±1.796cB 11.553±1.657aA9.800±1.675a

2.6紅細胞IC花環率的測定

從表6可以看出，飼喂10 d時，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠IC花環形成率與對照差異顯著，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組與制劑Ⅲ組差異顯著；20 d時，制劑Ⅰ組、制劑Ⅱ組和制劑Ⅲ組小白鼠IC花環形成率與對照差異顯著。30 d時，各處理間差異不顯著。

3結論

通過Ea花環形成率、EAC花環形成率、淋巴細胞轉化率、紅細胞C3b受體花環形成率和IC花環形成率等免疫指標分析，結果表明，由金銀花等中草藥制成的小白鼠中草藥飼料添加劑能夠明顯促進小白鼠機體的免疫機能，復方制劑Ⅲ效果最佳。

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