安徽白山羊超數排卵技術

摘要：為了探索安徽白山羊超數排卵方法，比較不同超數排卵（簡稱超排）方案和促卵泡素（FSH）給藥方案對安徽白山羊超數排卵效果的影響。結果表明：以8次遞減法注射FSH超排安徽白山羊，在撤栓時注射PG，平均回收卵（12.36±667）枚/只；而在撤栓時、撤栓后12 h注射PMSG，分別平均回收卵（14.83±5.88）、（16.13±6.24）枚/只，可見撤栓后12 h注射PMSG的超排效果優于撤栓時注射PG（P<0.05）；用200 IU FSH分別按8次遞減注射、8次等量注射、6次遞減注射法使安徽白山羊超排，平均回收卵數分別為（22.3±10.74）、（24.0±4.16）、（16.0±2.65）枚/只，且各組間差異不顯著；用Day0方案、傳統方案超排，平均排卵數分別為（16.50±0.96）、（13.33±3.32）枚/只，胚胎回收數分別為（13.83±2.54）、（12.00±2.89）枚/只，2組間差異不顯著。

關鍵詞：安徽白山羊；超數排卵；胚胎；促卵泡素；撤栓

中圖分類號：S814.6；S826.8+93 文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2015）02-0214-02

收稿日期：2014-03-14

基金項目：安徽省自主創新專項（編號：12z010244）。

作者簡介：詹年（1988—），男，安徽明光人，碩士研究生，主要從事哺乳動物胚胎工程研究。E-mail：zhanian@126.com。

通信作者：劉亞，博士，副教授，主要從事動物繁殖生物技術研究。Tel：（0551）65785492；E-mail：liuya@ahau.edu.cn。安徽白山羊是優良的地方品種，具有耐粗飼、適應性強、繁殖率高、肉和板皮質量好的優點[1]，但也存在體型較小、生長發育速度較慢等缺點[2]。轉基因技術可在較短時間內培育出常規方法不能或需要較長時期才能育成的品種或種群[3]，原核期胚胎顯微注射及體細胞核移植是生產轉基因動物的重要手段，而這2種技術都需要獲得足夠數量的待轉動物的卵/胚。因此，研究安徽白山羊超數排卵（簡稱超排）方法是對其進行轉基因育種的必要前提。

1材料與方法

1.1試驗材料

1.1.1試驗動物從合肥博大牧業科技開發有限公司種羊場及碭山田豐牧業科技有限公司選取體況良好、無繁殖疾病史的健康經產育齡安徽白山羊。在試驗前2～3個月單獨分群飼養，并對所有供體肌肉注射0.2 mg氯前列烯醇（PG）以確保其處于未孕狀態。

1.1.2主要藥品注射用垂體促卵泡素（FSH），羊超數排卵專用，購自浙江省寧波市三生藥業有限公司；注射用血促性素（HCG），購自寧波第二激素廠；注射用垂體促黃體素（LH）和注射用促性腺激素釋放激素（GnRH），均購自寧波三生藥業有限公司；氯前列烯醇，購自遼寧省丹東市綠丹和華動物藥業有限公司；鹽酸賽拉嗪注射液和鹽酸苯唑注射液，均購自吉林省華牧動物保健品有限公司；羊炔諾酮陰道緩釋裝置（孕酮陰道栓），購自西北農林科技大學。

1.2試驗設計

1.2.13種傳統超排方案效果的比較將51只供體山羊隨機分成3組：第1組22只，第2組6只，第3組23只。分別采用以下3種不同的方案進行超排處理，比較其超排效果。

超排方案1：于周期的任意早晨放置孕酮陰道栓（記為0 d），從開始后10 d的早晨開始遞減法肌肉注射FSH，2次/d，間隔12 h，連用4 d，劑量分別為32、30、28、26、24、22、20、18 IU/只；在注射FSH的最后1 d（開始后13 d）上午撤栓，同時肌肉注射0.3 mg/只 PG；開始后14 d晚上肌肉注射 100 IU/只 LH；母羊發情12 h后配種，間隔12 h復配1～2次。配種結束后3 d從輸卵管回收胚胎。

超排方案2：在撤栓時注射250 IU/只 孕馬血清促性腺激素（PMSG），其余同“超排方案1”。

超排方案3：與“超排方案2”相似，但PMSG的注射時間改在撤栓后12 h。

1.2.2不同FSH給藥方案超排效果的比較將18只供體母羊隨機分成3組，每組6只，分別采用如下3種不同的FSH注射方案進行超排，比較其超排效果。

FSH給藥方案1：與“1.2.1”節超排試驗設計1中的方案3完全相同。

FSH給藥方案2：與“FSH給藥方案1”基本相同，將FSH遞減注射改為等量注射，即注射FSH 25 IU/（只·次），連續注射8次。

FSH給藥方案3：與“FSH給藥方案1”相似，將FSH遞減注射由8次改為6次，劑量分別為50、50、30、30、20、20 IU/只。

1.2.3Day0超排方案與傳統超排方案效果的比較Day0超排方案。供體山羊在任意日放置孕酮陰道栓（記為-9 d），6 d 后撤栓（-3 d），同時注射250 IU/只 PMSG和0.2 mg/只 PG進行同期發情處理。撤栓后1 d注射25 μg/只 GnRH，約2 d后母羊排卵（此時記為0 d）。自0 d早晨開始，按遞減法間隔12 h每天早、晚2次注射FSH，連續3 d，劑量分別為40、38、36、34、32、30 IU/只，第5、第6次注射FSH的同時注射02 mg/只 PG。周期第3天下午再次注射25 μg/只 GnRH，第11天回收胚胎。

傳統超排方案。與“1.2.1”節中超排方案3相同。

1.3胚胎回收

在最后一次配種后3 d通過腹腔鏡檢查卵巢反應，并采用手術法從輸卵管回收胚胎。

1.4統計分析

試驗數據采用SPSS 17.0軟件進行方差分析。

2結果與分析

2.1不同傳統超排方案超排效果的比較endprint

如表1所示，在撤栓后12 h注射PMSG組的平均回收卵數最多，達（16.13±6.24）枚/只，顯著高于撤栓時注射PG組（P<0.05）；其次為撤栓時注射PMSG組，平均回收卵（1483±5.88）枚/頭，與其余2組之間的差異均不顯著。

2.2不同FSH給藥方案超排效果的比較

3種FSH給藥方案的平均回收胚胎數分別為 22.3、24.0、16.0枚/只，說明同劑量FSH分4 d進行8次注射優于分 3 d 進行6次注射，但進行8次遞減注射與等量注射間超排效果差異不顯著（表2）。

3結論

3.1不同常規超排方案對超排效果的影響

岳奎忠等發現，在第1次注射FSH時加注PMSG 200 IU/只可顯著提高供體母羊平均排卵數及胚胎回收數[4]。本研究發現，在撤栓后12 h注射PMSG的平均排卵數最高（16.13枚/只），顯著高于撤栓時注射PG組（12.36枚/只）（P<005），而在撤栓時注射PMSG的平均回收胚胎數為1483枚/只，與其余2組間差異均不顯著，這可能與試驗樣本量較少有關。但也有研究表明，在撤栓時注射PMSG減少了排卵數，并降低了A、B級胚胎比例[5]，與本試驗結果截然相反。因此，有關注射PMSG的時機及其對超排效果的影響還有待進一步擴大試驗進行驗證。

3.2不同FSH給藥方案對山羊超排效果的影響

在應用FSH進行超數排卵時一般都是采用遞減注射法，有分為8次注射（2次/d，間隔12 h，連注4 d）的，也有分為6次的（2次/d，間隔12 h，連注3 d）[6-7]。本試驗結果顯示，同等FSH劑量下，分為8次的遞減注射法及等量注射法平均獲卵數高于分為6次的遞減注射法（三者排卵數分別為22.3、24.0、16.0枚/只），但各組間差異并不顯著，這可能是由于樣本數過少。

3.3Day0超排方案與傳統超排方案效果的比較

Day0方案是近年來出現的一種新的超數排卵方案，即在排卵當日進行超排處理，使周期的第1波卵泡成熟排卵。此時無優勢卵泡存在，也就不存在優勢卵泡對卵泡募集的抑制作用，從而增加了排卵數及胚胎回收數。本試驗中Day0方案與傳統方案在黃體數和胚胎數上差異并不顯著，驗證了Day0方案在安徽白山羊超排上的可行性，進一步可測定安徽白山羊的卵泡波曲線，找到更準確的第1次卵泡波時間，改進超排方案。考慮到Day0方案可減少排卵后異常情況（如未排的大卵泡及早期黃體退化等）的發生[8]，今后可使用此方案。

參考文獻：

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