桂西地區產前篩查人群珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布*

陳麗坤，韋國凱，陳湘壬，黃麗梅，廖珍藝，王俊利，韋貴將(.右江民族醫學院，廣西百色533000；2.右江民族醫學院附屬醫院檢驗科，廣西百色 533000)

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桂西地區產前篩查人群珠蛋白生成障礙性貧血基因型分布*

陳麗坤1，韋國凱1，陳湘壬1，黃麗梅1，廖珍藝1，王俊利2△，韋貴將(1.右江民族醫學院，廣西百色533000；2.右江民族醫學院附屬醫院檢驗科，廣西百色 533000)

目的 調查桂西地區產前篩查人群珠蛋白生成障礙性貧血 (簡稱地貧)的基因攜帶率、基因型及其分布特征。方法 回顧性分析2012～2013年桂西地區的右江民族醫學院附屬醫院、百色市人民醫院、百色市婦幼保健院共三家醫院的以產前篩查為目的的育齡人群地貧檢查相關數據，包括血常規、血紅蛋白電泳、地貧基因檢查等。結果 收集到1 718例(即859對)夫婦的地貧篩查的相關數據，得出育齡人群中地貧基因攜帶者651例，地貧總發生率為37.90%，其中 α-地貧347例，發生率為20.20%，β-地貧304例，發生率為17.70%，α-地貧復合β-地貧54例，發生率為3.14%。共檢出攜帶有相同α 或 β-地貧基因型的高風險夫婦 53對，占參檢夫婦對數的6.17 %。結論 桂西地區產前篩查育齡人群地貧基因攜帶率近40%，其中α-地貧基因型以αα/--SEA 和αα/-α3.7為主；β-地貧基因型以β17M/N和β41-42M/N為主；此數據可為該地區育齡人群的地貧防控提供支持。

桂西地區； 育齡人群； 珠蛋白生成障礙性貧血； 基因型分布

珠蛋白生成障礙性貧血(簡稱地貧)，是由于常染色體遺傳性缺陷，引起珠蛋白肽鏈合成障礙，使一種或幾種珠蛋白肽鏈數量不足或完全缺乏，導致的一種危害嚴重的溶血性貧血遺傳性疾病[1]。地貧常見于在我國長江以南省區，特別是廣西、廣東和海南三省[2-3]。地貧的高發病率，已使各種血紅蛋白病成為這些地區嚴重的社會公共衛生問題。此外，重型地貧可導致死亡，且目前尚缺乏對重型地貧的根治方法，因此在廣西地區對人口質量構成了嚴重的威脅[4]。目前，在人群中實施遺傳篩查預防，對妊娠婦女實施產前診斷是最有效的降低地貧發生率的措施。本研究以廣西桂西地區產前篩查育齡人群為對象，旨在初步掌握該地區育齡人群中地貧的基因攜帶率、基因型及其分布特征，為當地政府和醫療單位制定有效的地貧控制策略，避免重型地貧患兒的出生奠定基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2012～2013年桂西地區右江民族醫學院附屬醫院、百色市人民醫院、百色市婦幼保健院共三家醫院以產前篩查為目的育齡人群地貧檢查相關數據，包括血常規、血紅蛋白電泳、地貧基因檢查等，調查對象年齡20～46歲。

1.2 方法

1.2.1 血標本采集 用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝真空管分別采集外周血各2 mL進行地貧基因型分布研究。

1.2.2 紅細胞參數分析及血紅蛋白(Hb)電泳 采用日本東亞Sysmex XE-5000全自動血細胞分析儀進行各項紅細胞參數分析；按照《全國檢驗操作規程》第3版，制備血紅蛋白液，然后將其加樣于已浸透Tris緩沖液的醋酸纖維薄膜條上，置pH 8.5 的緩沖液中電泳30 min，各區帶剪下直接洗脫于蒸餾水中比色測定(721分光光度計)，對HbA2及Hb F水平進行定量。最后，以紅細胞平均體積(MCV)小于82 fL作為α和β地貧陽性表型的篩查指標，以Hb F>5%為δβ地貧及HPFH的陽性表型篩查指標。

1.2.3 DNA提取 采用商品化全血基因組提取試劑盒(QIAamp DSP DNA Blood Mini Kit)提取標本DNA，提取后的標本DNA用紫外分光光度計UV-2000(美國Unico 公司)檢測DNA的濃度。

1.2.4 地貧基因檢測 采用深圳亞能公司生產的α地貧檢測試劑盒[國食藥監械(準)2008第3401251號]提取 EDTA-K2抗凝真空管(廣州陽普醫療公司)抽取 2 mL靜脈血DNA，用Gap-PCR和PCR-RDB檢測中國人常見8種α地貧和18種β地貧基因型；對Hb A2>3.5%且18種β地貧檢測陰性的標本，進行β珠蛋白基因全測序；用MLPA技術分析Hb F>5%標本，根據其結果設計Gap-PCR或普通PCR引物，擴增后測序，確認δβ地貧或HPFH基因型。

1.3 統計學處理 所有數據均采用SPSS13.0統計軟件分析，并對數據進行完全隨機設計資料的相關分析。

2 結 果

2.1 α和β-地貧的基因攜帶率 收集到1 718例(即859對)夫婦地貧篩查的相關數據，檢出地貧基因攜帶者651例，總發生率為37.90%，其中α-地貧347例，發生率為20.20%，β-地貧304例，發生率為17.70%，α-地貧復合β-地貧54例，發生率為3.14%。未發現δβ地貧及胎兒血紅蛋白持續增多癥(HPFH)。共檢出攜帶有相同α或β-地貧基因型的高風險夫婦53對，占參檢夫婦對數的6.17%。

2.2 α-地貧基因型及其構成比 在檢出的347例α-地貧中，缺失型α-地貧基因型及所占比例分別為：東南亞缺失型雜合子(--SEA/αα)占53.03%，左、右缺失型雜合子(αα/-α4.2和 αα/-α3.7)分別占5.48%和15.27%，左、右缺失型純合子(-α4.2/-α4.2和-α3.7/-α3.7)分別占0.29%和0.86%，血紅蛋白H病-α3.7/--SEA、-α4.2/--SEA分布占3.46%、0.86%，α3.7/α4.2占1.15%。另外檢出突變型 α-地貧68例，其基因型見表1。本地區與廣西內其他市區產前篩查人群α-地貧的調查結果的比較見表2。

表1 桂西地區產前篩查人群中68例突變型α-地貧基因型及構成比

表2 不同市區產前篩查人群中α-地貧的基因缺失型及其構成比

表3 桂西地區產前篩查人群中 11種β-地貧的基因型及其構成比

續表3 桂西地區產前篩查人群中 11種β-地貧的基因型及其構成比

2.3 β-地貧基因型及其構成比 在檢出的304例β-地貧中，共檢出11種β-地貧雜合子，未檢出β-地貧純合子，其構成比見表3，其中，最常見的5種突變類型依次為β17M/N(45.39%)、β41-42M/N(30.26%)、β71-72M/N(5.92%)、β-28M/N(3.95%)、β654M/N(1.97%)，共占β突變基因的87.49 %，與廣西內其他市區產前篩查人群的β-地貧基因型調查結果的比較見表4。

表4 不同市區產前篩查人群中β-地貧的基因型及其構成比

續表4 不同市區產前篩查人群中β-地貧的基因型及其構成比

3 討 論

分子遺傳流行病學資料顯示，地貧基因突變類型和頻率具有明顯的地理和種族特異性，其廣泛地分布于地中海沿岸地區和東南亞，我國的廣東、廣西、海南、云南、貴州、四川及香港區比較常見。據以往的文獻報道顯示，我國廣西α-地貧發生率為10%～15%，β-地貧的發生率為4%～7%[7]。

根據缺乏的珠蛋白鏈種類及缺乏程度，地貧可分為α、β、δ、γ、δβγδβ等不同類型，其中分布最廣和最嚴重的是α和β-地貧。α-地貧有缺失型和突變型兩類，在我國大多數是由于α珠蛋白基因的缺失所致，少數由基因點突變造成。α珠蛋白基因簇定位于16號染色體上，每條染色體有2個串聯的α珠蛋白基因，正常的二倍體細胞有4個α珠蛋白基因。缺失型就是α珠蛋白基因簇大片段的丟失致使全部或部分缺失了兩個α基因，α基因缺失的數量越多，病情越嚴重。我國南方最常見的α-地貧缺失類型為東南亞型(即--SEA型)。β珠蛋白基因的突變以點突變為主，迄今發現100余種，缺失型突變則很少見。

本研究發現，在1 718例育齡人群的地貧篩查中，共檢出地貧基因攜帶者651例，檢出率為37.90%，低于廣西欽州市70.19%(3 033/4 304)[3]和南寧市66.44%(895/1 347)[8]，高于玉林市21.97%(359/1 634)[9]。導致這種差異的原因一是與研究方法有關，如蒲斌[3]對來欽州市醫院就診的2 152對夫婦一方或雙方均為α-地貧攜帶者行產前基因診斷，大大提高了地貧的檢出率；盧秋維[8]研究方法是首先基因診斷1 347例可疑地貧者(MCV篩檢陽性)，然后進行地貧基因診斷，最終確診地貧895例，實際上參檢的育齡夫婦3 219對(即6 438例)，地貧基因攜帶率應為13.90%。其次原因可能與不同地區間地貧宣教、育齡人群地貧知曉程度等有關。

與廣西內其他市區相比，桂西地區育齡人群α、β-地貧的基因型和構成比基本相似。在α-地貧缺失型突變基因中，東南亞缺失型雜合子(--SEA/αα)和右缺失型雜合子αα/-α3.7所占比例最高，即這些地區α-地貧以這兩種基因型為主；在β-地貧基因類型中，桂西地區以β17 M/N所占比例最高，β41-42 M/N次之，而柳州市、玉林市以β41-42 M/N所占比例最高，β17 M/N次之，梧州市以β41-42 M/N所占比例最高，β-28 M/N次之，差異原因可能與不同區域人類遺傳學遷徙差異有關。

眾所周知，地貧是一種常見的單基因遺傳性溶血性疾病，目前尚無良好的根治方法。目前最有效的預防方法是防止重癥地貧患兒的出生，一旦新生兒出現重癥地貧，就需要通過定期輸血、去鐵胺除鐵，甚至造血干細胞移植治療。在中國，輸血和用去鐵胺治療地貧患者的費用是極其昂貴的。雖然現代醫學提出造血干細胞移植可能治愈地貧，但是這項技術要求高，費用驚人，一般家庭難以承受。因此，地貧患兒的出生，對家庭、社會都會產生巨大的負擔，而在這些地區宣傳和開展遺傳咨詢以及產前診斷來進行預防是絕對必要的。桂西地區為地貧的廣西高發區，本研究的地貧分子流行病學數據初步明晰了桂西地區育齡人群常見基因型情況，有助于政府和醫療單位制定有效的地貧控制策略，有效避免重型地貧患兒的出生。

[1]Zheng CG，Liu M，Du J，et al.Molecular spectrum of α-and β-globin gene mutations detected in the population of Guangxi Zhuang Autonomous Region，People′s Republic of China[J].Hemoglobin，2011，35(1):28-39.

[2]鄧國生，羅宇迪，張寧．玉林地區地貧基因缺失和點突變分布的探討[J]．中華全科醫學，2011，9(1)：122-123．

[3]蒲濱．欽州市α-地貧基因診斷結果回顧性分析[J]．社區醫學雜志，2013，11(12)：57-58．

[4]余永雄，黃麗，陳唯．梧州婚配群體的α地貧攜帶者篩查與基因診斷分析[J]．重慶醫學，2012，41(10)：1002-1003．

[5]唐寧．廣西柳州市常住人口β-地貧的基因型及其分布[J]．實驗與檢驗醫學，2009，27(4)：371-372．

[6]蔡稔，李莉艷，梁昕，等．柳州市城鎮人群α和β地貧的發生率調查和基因型鑒定[J]．中華流行病學雜志，2002，23(4)：44-48．

[7]Pan HF，Long GF，Li Q，et al.Current status of thalassemia in minority populations in Guangxi，China[J].Clin Genet，2007，71(5):419-426.

[8]盧秋維．南寧市育齡人群地貧篩查與產前診斷研究[J]．廣西醫學，2010，32(7)：869-870．

[9]鄧國生，羅宇迪，張炬光．玉林市1634例孕婦產前地貧篩查分析[J]．中外醫療，2009，28(36)：137．

Genotype distribution of population screening for thalassemia prenatal in western area of Guangxi*

CHENLi-kun1，WEIGuo-kai1，CHENXiang-ren1，HUANGLi-mei1，LIAOZhen-yi1，WANGJun-li2△,WEIGui-jiang2

(1.YoujiangMedicalUniversityforNationalities,Baise,Guangxi533000,China；2.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofYoujiangMedicalUniversityforNationalities,Baise,Guangxi533000,China)

Objective To investigate gene carrying rate,genotype and distribution characteristics of population screening for thalassemia prenatal in western area of Guangxi.Methods Relevant data of population screening for thalassemmia from 2012 to 2013 in Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities,People′s Hospital of Baise City and Maternity and Child Care Hospital of Baise City were analyzed retrospectively,including blood routine examination，hemoglobin electrophoresis,thalassemia gene inspection.Results Data of 1 718 cases (859 couples) screening thalassemia were collected，there were 651 persons carrying thalassemia gene，the total incidence rate was 37.90%，including α-thalassemia 347 cases(20.20%)，β-thalassemia 304 cases(17.70%)，α-thalassemia complex β-thalassemia 54 cases(3.14%).A total of 53 couples with high risk who were found to carry the same α or β-thalassemia gene，with the incidence rate as 6.17%.Conclusion Thalassemmia gene carrier rate of persons accepted prenatal screen in western area of Guangxi is nearly 40%，most of α-thalassemia genotypes are αα / -- SEA and αα/-α3.7，the proportion was 53.03% and 15.27%,most of β-thalassemia genotypes are β17N/N and β41-42M/N.

western area of Guangxi； childbearing age of persons; thalassemia； genotypes

國家自然科學基金資助項目(81160212)；廣西醫療衛生重點科研課題(2012085)；2014年自治區級大學生創新創業訓練計劃立項項目(201410599012)。

陳麗坤，女，本科在讀，主要從事珠蛋白生成障礙性貧血分子流行病學研究。

△通訊作者，E-mail:13907768146@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.10.002

A

1672-9455(2015)10-1342-03

2014-09-19

2015-01-24)