慢性乙型肝炎患者IL-1RN(T+8006C)位點基因多態性分析

萬鴻君，彭 芳(武漢大學人民醫院檢驗科，武漢 430060)

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慢性乙型肝炎患者IL-1RN(T+8006C)位點基因多態性分析

萬鴻君，彭 芳(武漢大學人民醫院檢驗科，武漢 430060)

目的 探討白細胞介素-1受體拮抗劑基因(IL-1RN)第2號外顯子+8006T/C位點基因多態性在慢性乙型肝炎患者中的分布及其相關性。方法 采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性的分析方法，對450例慢性乙型肝炎患者和420例對照者IL-1RN(T+8006C)位點基因多態性進行檢測，計算并分析其等位基因和基因型頻率。結果 觀察組和對照組IL-1RN(T+8006C)位點基因型的分布最常見為TT型，TC型次之，CC型則較為罕見；在不同年齡組、不同性別間其分布比較，差異無統計學意義(P>0.05)；觀察組C型等位基因及TC基因型頻率明顯低于正常對照組，差異有統計學意義(P<0.01)。結論 IL-1RN(T+8006C)位點等位基因及基因型的分布不存在年齡和性別間的區別，但與慢性乙型肝炎存在相關性，在乙型肝炎病毒感染中，C型等位基因可能具有保護作用。

白細胞介素-1受體拮抗劑； 基因； 多態性； 慢性乙型肝炎

白細胞介素-1受體拮抗劑(IL-1Ra)基因(IL-1RN)2號外顯子存在一個+8006T/C位點基因多態性，由T→C轉換所引起，與IL-1Ra的表達相關，而IL-1Ra可特異性地抑制IL-1引起的炎性反應，是一種重要的內源抗炎因子，因此，該多態性可能與疾病的發生發展密切相關[1-2]，但與慢性乙型肝炎是否相關目前尚不清楚。本文觀察和分析了IL-1RN(T+8006C)位點基因多態性在慢性乙型肝炎患者中的分布，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本院門診與住院部慢性乙型肝炎患者共450例為觀察組，其中男250例，女200例，年齡18～82歲，平均年齡(43.1±13.5)歲，所有病例均根據相關標準進行診斷[3]。選擇同期420例健康體檢者為對照組，其中男230例，女190例，年齡18～83歲，平均年齡(44.6±14.2)歲。所有研究對象均為無血緣關系的漢族人群，排除其他病毒性肝炎，并排除內分泌、肝臟、腎臟和心腦血管疾病，血常規及生化指標均在參考范圍內。

1.2 儀器與試劑 主要儀器為美國PE公司 GeneAmp PCR System 2700 擴增儀，法國VL自動凝膠成像及分析系統，PCR試劑及Alu 1內切酶為Promega產品，引物由大連寶生物工程有限公司合成。

1.3 方法 采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性的分析方法進行。根據相關文獻[4]設計一對引物，P1：5′-TTC TAT CTG AGG AAC AAC CAA CTA GTA GC-3′，P2：5′-AGG ATT AGG ACA TTG CAC CTA G-3′，擴增IL-1RN第2號外顯子區(7 977～8 150)的片段。模板DNA的制備及IL-1RN(T+8006C)位點基因多態性的檢測與分析參照相關文獻[5]進行。

1.4 統計學處理 研究對象IL-1RN(T+8006C)位點等位基因及基因型頻率用頻率計數法計算，并用Hardy-Weinberg定律進行遺傳平衡分析。研究對象等位基因及基因型頻率用χ2檢驗進行比較，以α=0.05為檢驗水準，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 IL-1RN(T+8006C)位點基因型檢測結果 用限制性內切酶Alu 1酶切擴增產物，經電泳后根據特異性電泳條帶可檢測出三種基因型：即TT基因型有1條帶(146 bp)，TC基因型有2條帶(174 bp和146 bp)，而CC基因型有1條帶(174 bp)，見圖1。

注:1為CC基因型；2為TC基因型；3為TT基因型；M為pGEM3Zf(+)DNA/Hae分子量標志物。

2.2 不同性別間IL-1RN(T+8006C)位點基因多態性分析 研究對象IL-1RN(T+8006C)位點等位基因及基因型頻率經χ2檢驗發現符合Hardy-Weinberg遺傳平衡，表明具有群體代表性。研究人群中，IL-1RN(T+8006C)位點等位基因的分布以等位基因T為最常見，而等位基因C次之；IL-1RN(T+8006C)位點基因型以TT型最為多見，其次為TC型，CC型較罕見。觀察組TC基因型及C等位基因頻率明顯低于對照組，差異有統計學意義(χ2=13.20，χ2=11.98，P<0.01)；觀察組及對照組在本組不同性別間基因型和等位基因頻率比較，差異無統計學意義(χ2=0.07，χ2=0.04；χ2=0.02，χ2=0.02；P>0.05)，見表1。

2.3 不同年齡間IL-1RN(T+8006C)位點多態性的分布 IL-1RN(T+8006C)位點等位基因及基因型分布在本組不同年齡組間比較，差異無統計學意義(χ2=1.56，χ2=1.17，χ2=0.64，χ2=0.58；P>0.05)。但觀察組TC基因型及C等位基因頻率明顯低于對照組，差異有統計學意義(χ2=11.31，χ2=10.26，P<0.01)，見表2。

表1 IL-1RN(T+8006C)位點多態性在不同性別間的比[n(%)]

注：與對照組比較，aP<0.01。

表2 IL-1RN(T+8006C)位點多態性在不同年齡組間的比較[n(%)]

注：與對照組比較，aP<0.01。

3 討 論

IL-1家族中唯一的內源性拮抗劑為IL-1Ra，在疾病的發生發展過程中可能起著重要作用，其機理可能是與IL-1競爭結合IL-1受體而有效地拮抗IL-1所引起的炎性反應[6]。IL-1RN(+8006T/C)位點基因多態性目前在IL-1家族中研究較少。有研究表明，IL-1RN第2號內含子可變數串聯重復多態性的等位基因Ⅱ(IL-1RN*Ⅱ)與IL-1RN(+8006T/C)位點的等位基因C存在緊密連鎖[4]，而前者與IL-1Ra的表達緊密相關[7]，因此，IL-1RN(+8006T/C)位點的等位基因C可能與疾病的發生發展密切相關，其機理是通過與IL-1RN*Ⅱ的緊密連鎖或直接調控IL-1Ra的表達。

慢性乙型肝炎是最主要的慢性病毒性疾病之一，在該病的病程中，遺傳因素可能起著重要作用。近年來，乙型肝炎病毒易感性、治療及預后等與細胞因子及其基因多態性已受到廣泛關注[8-11]。有研究發現，乙型肝炎病毒感染后果與腫瘤壞死因子基因多態性有關[8]。然而，目前關于慢性乙型肝炎病程與IL-1RN(T+8006C)位點基因多態性是否相關尚不清楚。

本研究發現，在慢性乙型肝炎患者和對照人群中，IL-1RN(+8006T/C)位點可檢測出TT、TC和CC三種基因型，其中等位基因T發生頻率最高，而等位基因C發生頻率較低。在不同性別和不同年齡組之間，IL-1RN(+8006T/C)位點基因型和等位基因型的分布比較，差異無統計學意義(P>0.05)，表明該位點堿基突變不存在性別和年齡之間的區別。觀察組C等位基因及TC基因型頻率明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.01)，表明慢性乙型肝炎病程與該位點基因多態性存在相關性。據此推測，攜帶等位基因C的個體體內IL-1的活性可能較不攜帶等位基因C者強，原因是其產生IL-1Ra的能力較低所致，而IL-1活性增強可進而導致IL-1β的分泌增強，刺激機體產生腫瘤壞死因子、IL-2和IL-6，這些細胞因子可使中性粒細胞的吞噬作用得到進一步激活，促使機體清除感染病毒和其形成的免疫復合物。

總之，IL-1RN(+8006T/C)位點等位基因及基因型的分布不存在年齡、性別間的區別，但與慢性乙型肝炎密切相關，C型等位基因可能在個體預防乙型肝炎病毒感染中具有保護作用，其確切機制尚待進一步研究。

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Analysis of gene polymorphism at the position IL-1RN(T+8006C) in patients with chronic hepatitis B

WANHong-jun，PENGFang

(DepartmentofClinicalLaboratory，RenminHospitalofWuhanUniversity，Wuhan，Hubei430060,China)

Objective To investigate the distribution and correlation of gene polymorphism in the second exon of interleukin-1 receptor antagonist gene at position +8006[IL-1RN(T+8006C)] in patients with chronic hepatitis B.Methods The IL-1RN(T+8006C) polymorphism was detected by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphisms methods in 450 patients with chronic hepatitis B(observation group) and 420 healthy persons(control group)，then the genotype and allele frequencies were calculated and analyzed.Results In the observation group and control group，the TT genotype was the most frequent，then the TC genotype，and CC genotype was rare.The distribution of genotypes and allele was no different among different gender and age groups(P>0.05).The frequencies of TC genotype and C allele were lower in patients with chronic hepatitis B than that of the control group(P<0.01).Conclusion The distribution of IL-1RN(T+8006C) genotypes and allele were no difference among different gender and age groups，but it has correlation with chronic hepatitis B.Allele C might be a protect factor against hepatitis B virus infection.

interleukin-1 receptor antagonist; gene; polymorphism; chronic hepatitis B

萬鴻君，男，博士，副主任技師，主要從事免疫學研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.10.021

A

1672-9455(2015)10-1389-02

2014-11-05

2015-01-15)