細胞凋亡抑制蛋白Livin和Survivin檢測在胃癌診斷中的價值

楊少蓉，馬國衛(wèi)

(湖北省天門市第一人民醫(yī)院普外科2區(qū) 431700)

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·論 著·

細胞凋亡抑制蛋白Livin和Survivin檢測在胃癌診斷中的價值

楊少蓉，馬國衛(wèi)

(湖北省天門市第一人民醫(yī)院普外科2區(qū) 431700)

目的 探討細胞凋亡抑制蛋白Livin和Survivin檢測在胃癌診斷中的作用。方法 選擇170例天門市第一人民醫(yī)院手術或內鏡病檢標本作為研究對象，其中胃癌組織標本45例，萎縮性胃炎37例，淺表性胃炎29例，異型增生胃黏膜33例，26例正常胃部組織。比較各組組織中Livin、Survivin表達陽性率，并分析胃癌組織中Livin與Survivin表達的相關性。結果 胃癌組織Livin、Survivin陽性率顯著高于其他組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其中萎縮性胃炎、異型增生胃黏膜Livin陽性率顯著高于正常組織，萎縮性胃炎、淺表性胃炎、異型增生胃黏膜Survivin陽性率顯著高于正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Livin陽性表達與組織分化程度和TNM分期有關(P<0.05)；Survivin陽性表達與組織浸潤程度和TNM分期有關(P<0.05)。Livin陽性率為57.78%，Survivin陽性率為64.44%，二者均為陽性21例，二者表達無明顯相關性(χ2=1.076,P>0.05)。結論 細胞凋亡抑制蛋白Livin和Survivin在胃癌組織中表達顯著上升，兩種蛋白因子檢測可作為胃癌輔助診斷的指標之一。

細胞凋亡抑制蛋白； 胃癌； 診斷； Livin； Survivin

胃癌是常見消化道惡性腫瘤，調查顯示，全球每年新發(fā)胃癌患者約50萬人，其中我國占40%以上[1]。由于我國胃癌發(fā)病率高，且胃癌早期癥狀不明顯，檢出率較低，大多數(shù)患者一旦確診即為中、晚期。現(xiàn)代細胞生物學和分子生物學證實，腫瘤的形成與細胞凋亡調控異常有關[2]。目前研究較多的Bax、Bcl-2等均為作用于上游級聯(lián)反應的蛋白，而關于直接作用于級聯(lián)反應的蛋白目前報道較少。Livin是最新發(fā)現(xiàn)的一種細胞凋亡抑制蛋白，在腫瘤組織中呈高表達，它可能是通過刺激Caspas蛋白來發(fā)揮抗凋亡作用。Survivin是已知作用較強的細胞凋亡抑制蛋白，與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切關系。本研究通過檢測細胞凋亡抑制蛋白Caspas和Survivin在胃癌組織中的表達，探討二者在胃癌診斷中的作用，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇170例來自2012年3月至2014年3月在本院手術或內鏡病檢標本，男97例，女73例，年齡22～67歲，平均(45.6±13.2)歲。其中胃癌組織標本45例，萎縮性胃炎37例，淺表性胃炎29例，異型增生胃黏膜33例，26例正常胃部組織。胃癌患者在病理檢查前均未進行放射或化學治療。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 采用免疫組化SP法對Livin、Survivin進行檢測，Livin多克隆抗體購至美國Imgenex公司，鼠抗人Survivin單克隆抗體購至北京中山生物技術有限公司，免疫組化試劑盒由上海澤邁生物技術有限公司提供。

1.2.2 實驗步驟[3](1)烤片，68 ℃ 20 min。(2)常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水。(3)滅活內源性過氧化物酶：3%H2O237 ℃孵育10 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3×5 min。(4)抗原修復:在枸櫞酸緩沖液(pH6.0)中煮沸(95 ℃，15～20 min)，自然冷卻20 min 以上，再用冷水沖洗，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3×5 min。(5)正常羊血清工作液封閉，37 ℃10 min。(6)滴加一抗4 ℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗3×5 min(用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照)。(7)滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液，37 ℃孵育30 min,PBS沖洗3×5 min。(8)DAB/H2O2反應染色，自來水充分沖洗后，蘇木素復染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。

1.3 判定標準[4]按照染色強度進行評分，0分無染色；1分輕微染色；2分中度染色；3分強染色。按照染色面積評分，0分無染色；1分細胞染色面積少于25%；2分細胞染色面積25%～50%；3分細胞染色面積大于50%。綜合兩種標準結果，采用兩種判定結果的乘積，參考標準：0分為-；1～2分為+；3～4分為+ +；5～6分為+ + +。按照半定量判定，≥++作為陽性結果；-、+作為陰性結果。

1.4 統(tǒng)計學處理 所有研究數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析，組間率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組Livin、Survivin表達情況 見表1。胃癌組織Livin、Survivin陽性率顯著高于其他組織，組間相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；其中萎縮性胃炎、異型增生胃黏膜Livin陽性率顯著高于正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，萎縮性胃炎、淺表性胃炎、異型增生胃黏膜Survivin陽性率顯著高于正常組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表1 各組Livin、Survivin表達情況[n(%)]

注：與正常組織相比，*P<0.05；與萎縮性胃炎相比，△P<0.05；與淺表性胃炎相比，▲P<0.05；與異型增生胃黏膜相比，#P<0.05。

2.2 胃癌組織Livin、Survivin表達與臨床指標的關系 見表2。Livin陽性表達與組織分化程度和TNM分期有關(P<0.05)，組織分化程度越高，Livin陽性表達率越高，Ⅲ～Ⅳ期胃癌Livin陽性表達率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期。Survivin陽性表達與組織浸潤程度和TNM分期有關(P<0.05)，T1～T2期胃癌Survivin陽性表達率顯著高于T3～T4期，Ⅲ～Ⅳ期胃癌Survivin陽性表達率顯著高于Ⅰ～Ⅱ期。

表2 胃癌組織Livin、Survivin表達與臨床指標的關系[n(%)]

2.3 胃癌組織Livin與Survivin表達相關性分析 見表3。在胃癌檢測樣本中，Livin陽性率為57.78%，Survivin陽性率為64.44%，二者均為陽性為21例，二者表達無明顯相關性(χ2=1.076,P>0.05)。

表3 胃癌組織Livin與Survivin表達相關性分析

3 討 論

Survivin蛋白因子是20世紀末發(fā)現(xiàn)的細胞凋亡抑制因子，它主要在腫瘤組織和胚胎中表達。腫瘤細胞存在分化、增殖和凋亡異常，Survivin在腫瘤細胞呈高表達[5]。呂元景等[6]研究發(fā)現(xiàn)，Survivin在腫瘤組織中表達是一個漸進的過程，隨著細胞的惡化，Survivin蛋白逐漸上升。Livin最初從人類胚胎中獲得，屬于IAP家族成員。研究發(fā)現(xiàn)，Livin抑制細胞凋亡的主要途徑是通過拮抗死亡受體[7]。陳力等[8]研究發(fā)現(xiàn)，Livin抑制凋亡的作用要強于Survivin。因此也有學者認為，Livin是迄今為止發(fā)現(xiàn)作用最強的凋亡抑制因子。由于這兩種因子主要存在于胚胎組織中，在其他組織表達明顯下調甚至不表達；特別是兩種蛋白均在腫瘤組織中高表達，因此有研究者提出，兩種蛋白免疫組化檢測可以作為腫瘤診斷的指標之一。黃玉鈿等[9]研究發(fā)現(xiàn)，Livin與Survivin在乳腺癌組織中陽性表達率分別為57.8%和64.0%，而正常組織無表達，因此該研究認為凋亡抑制因子Livin和Survivin可能在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。但是關于胃癌組織中兩種因子的表達目前還少見相關報道，因此本研究通過分析胃癌組織中Livin和Survivin的陽性表達率，以探討其在胃癌診斷中的作用。

本研究胃癌組織中Livin和Survivin表達陽性率顯著高于其他組織，萎縮性胃炎、淺表性胃炎、異型增生胃黏膜Survivin陽性率高于正常組織。由于Survivin的表達是一個漸進過程，因此推測非腫瘤性胃部疾病，如胃炎、增生性胃黏膜等可能是胃癌的癌前病變，這與王華和王志紅[10]報道的結論一致。因此在臨床中遇到諸如上述胃部疾病的患者應及時治療，避免疾病進一步惡化導致腫瘤發(fā)生。Crnkovic-Mertens等[11]報道稱Livin與腫瘤的預后呈正相關，本研究也發(fā)現(xiàn)Livin陽性表達與組織分化程度和TNM分期有關；Survivin陽性表達與組織浸潤程度和TNM分期有關，這提示可以將Livin和Survivin檢測作為患者療效、預后的評估指標之一，這也是接下來研究的主要方向。

綜上所述，胃癌組織中Livin和Survivin表達顯著上升，因此通過兩種蛋白檢測可以對胃癌進行早期診斷，同時也為進一步研發(fā)胃癌治療藥物提供了新的作用靶點。

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Diagnosis value of apoptosis inhibition protein Livin and Survivin in gastric cancer

YANGShao-rong，MAGuo-wei

(SecondDepartmentofGeneralSurgery,TianmenFirstPeople′sHospital,Tianmen,Hubei431700,China)

Objective To explore the diagnosis value of apoptosis inhibition protein Livin and Survivin in gastric cancer.Methods Totally 170 cases of operation or endoscopic biopsy specimens in our hospital were selected as the object,including 45 cases of gastric cancer tissues,37 cases of atrophic gastritis,29 cases of superficial gastritis,33 cases of gastric mucosa dysplasia,26 cases of normal gastric tissue.Compared the expression positive rate of Livin,Survivin of each group,and analysised the relationship between the Livin and Survivin in gastric cancer.Results The positive rate of Livin and Survivin of gastric carcinoma tissues was significantly higher than other groups (P<0.05);wherein the atrophic gastritis,gastric mucosa dysplasia,Livin positive rate was significantly higher than that of normal tissue,atrophic gastritis,superficial gastritis with dysplasia of gastric mucosa,positive rate of Survivin was significantly higher than that in normal tissue (P<0.05).The positive expression of Livin related with tissue differentiation,TNM stage (P<0.05);the positive expression of Survivin related with the degree of tissue infiltration,TNM stage (P<0.05).The positive rate of Livin was 57.78%,the positive rate of Survivin was 64.44%,both were positive in 21 cases,the expression had no obvious correlation (χ2=1.076,P<0.05).Conclusion Apoptosis inhibition protein Livin and Survivin expression in gastric cancer tissue increased significantly,two kinds of genetic testing can be used as one of indexes of gastric cancer screening.

apoptosis inhibition of protein; gastric neoplasm; diagnosis; Livin; Survivin

楊少蓉，女，本科，主管護師，主要從事普外科臨床護理工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.03.027

A

1672-9455(2015)03-0355-03

2014-08-28

2014-10-05)