肺腺癌組織和血清中半乳糖凝集素-1和-3 的表達(dá)及臨床意義

李 玲

(山東省臨沂市腫瘤醫(yī)院檢驗科 276001)

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·臨床探討·

肺腺癌組織和血清中半乳糖凝集素-1和-3 的表達(dá)及臨床意義

李 玲

(山東省臨沂市腫瘤醫(yī)院檢驗科 276001)

目的 探討人肺腺癌組織和血清中半乳糖凝集素-1(Gal-1)、Gal-3的表達(dá)及臨床意義。方法 收集手術(shù)切除的65例肺腺癌患者的癌組織和20例正常肺組織及相應(yīng)血清，采用Real-time 聚合酶鏈反應(yīng)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測其轉(zhuǎn)錄水平和血清水平表達(dá)變化情況，并結(jié)合相關(guān)臨床病理資料進(jìn)行分析。結(jié)果 肺腺癌組織中Gal-1和Gal-3 mRNA表達(dá)陽性明顯高于正常組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。ELISA結(jié)果顯示，Gal-和Gal-3在肺腺癌患者血清表達(dá)量分別為(230.7±11.3)ng和(65.3±7.8)ng；Gal-和Gal-3在正常組表達(dá)量為(120.4±9.2)ng和(34.0±5.4)ng。血清Gal-1和Gal-3在肺腺癌組織中的表達(dá)與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度密切相關(guān)(P<0.05),與患者的性別、年齡無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論 Gal-1與Gal-3可能參與肺腺癌的TNM分期、發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移，其聯(lián)合檢測有助于提高診斷率，提示患者預(yù)后。

肺腺癌組織； 半乳糖凝集素-1； 半乳糖凝集素-3； 侵襲

目前，肺癌在我國乃至世界上發(fā)病率和病死率已位居惡性腫瘤首位，肺腺癌作為最常見的原發(fā)性肺癌之一，幾乎占了原發(fā)性肺癌發(fā)病率的一半[1-2]。由于肺腺癌早期缺乏明顯臨床癥狀，在早期已發(fā)生血行轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重危害人類健康[3]。腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移往往與細(xì)胞之間的黏附密切相關(guān)，因此，研究肺腺癌發(fā)生與轉(zhuǎn)移的機(jī)制具有重要意義。半乳糖凝集素家族(Galectins)是一類廣泛存在于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的，相對分子質(zhì)量為30×103的蛋白質(zhì)，目前研究認(rèn)為,半乳糖凝集素在細(xì)胞之間相互作用，在細(xì)胞黏附、增殖、凋亡和血管新生中發(fā)揮重要作用[4]。然而，關(guān)于半乳糖凝集素家族在肺腺癌中的表達(dá)和研究較少。本研究檢測肺腺癌組織和血清中半乳糖凝集素-1(Gal-1)和Gal-3的表達(dá)，探討其對肺腺癌的診斷價值和意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 組織標(biāo)本均取自臨沂市腫瘤醫(yī)院胸外科，經(jīng)手術(shù)及病理證實為肺腺癌的患者65例，男40例，女25例；平均年齡(54.40±8.2)歲；病理分期采用UICC/AJCC TNM分期第7版為標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期7例，Ⅱ期21例，Ⅲ期29例，Ⅳ期8例；無淋巴轉(zhuǎn)移20例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45例。另收集健康人標(biāo)本20例。所有血清標(biāo)本以1 000 r/min，離心10 min，取上清液保存于-80 ℃冰箱中。

1.2 試劑與方法 人Gal-1 ELISA Kit和人 Gal-3 ELISA Kit為Elabscience公司產(chǎn)品；TRIZOL RNA提取試劑為美國Invitrogen產(chǎn)品；cDNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒和qPCR SuperMIX試劑盒均為北京全式金產(chǎn)品；PCR 8 STRIP TUBES，PCR 7500為美國ABI公司產(chǎn)品，MODEL-450酶標(biāo)儀為BIO-RAD公司。

1.2.1 Real-time PCR 將組織液氮研磨，用TRIZOL法提取細(xì)胞總RNA，并進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以cDNA為模板進(jìn)行相對定量實時PCR。反應(yīng)參數(shù)為：第1步50 ℃ 2 min；第2步95 ℃ 10 min；第3步95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，45個循環(huán)。目的基因引物,Gal-1上游：5′-CAA ACC TGG AGA GTG CCT TC-3′,下游5′-GAT GCA CAC CTC TGC AAC AC-3′；Gal-3上游5′-TGT GCC TTA TAA CCT GCC TTT GCC C-3′,下游5′-TTC TGT TTG CAT TGG GCT TCA CCG-3′；GAPDH 上游5′-CGG ATT TGG TCG TAT TGG GC-3′，下游 5′-CTT CCC GTT CTC AGC CTT G-3′。

1.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) -80 ℃凍存樣品復(fù)溫，以試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，每批檢測設(shè)立空白、陰性對照孔各一個，每個標(biāo)本設(shè)立3個復(fù)孔。嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。MODEL-450酶標(biāo)比色儀450 nm獲得吸光度(A)值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析處理，兩組間采用t檢驗，血清Gal-1和Gal-3測定值用中位數(shù)表示，各組差異采用秩和檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Gal-1和Gal-3 mRNA 在肺腺癌組織中的表達(dá)變化 見圖1。Gal-1和Gal-3正常肺組織與肺腺癌組織中均有表達(dá)，與正常肺組織相比，Gal-1和Gal-3在肺腺癌組織中均明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

注：N代表正常肺組織，T代表肺腺癌組織。

圖1 Gal-1和Gal-3在正常肺組織和肺腺癌組織中mRNA表達(dá)水平

注：N代表正常肺組織，T代表肺腺癌組織。

圖2 健康人和肺腺癌患者血清中Gal-1和Gal-3表達(dá)情況

項目nGal-1(ng/mL)PGal-3(ng/mL)P性別 男40221.9±16.890.21263.7±12.340.207 女25243.6±13.4567.3±13.12年齡(歲) <6034224.4±14.010.30162.9±12.120.212

續(xù)表1 肺腺癌患者血清Gal-1和Gal-3表達(dá)與臨床病理的關(guān)系

2.2 Gal-1和Gal-3在肺腺癌血清中的表達(dá) Gal-1和Gal-3在正常血清的陽性表達(dá)率為(120.4±9.2)ng和(34.0±5.4)ng，在肺腺癌血清中表達(dá)(230.7±11.3 )ng和(65.3±7.8)ng。Gal-1和Gal-3在肺腺癌中明顯高表達(dá)，與健康人血清相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見圖2。肺腺癌血清Gal-1和Gal-3水平與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分化程度密切相關(guān)(P<0.05)，與患者性別、年齡無明顯關(guān)系(P>0.05)，見表1。

3 討 論

Gal為半乳糖結(jié)合家族蛋白，能夠與含有β-半乳糖苷的糖復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合，在哺乳動物中，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)16個該家族成員[5-6]。迄今已有大量研究證實Gal系通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)/高基體非依賴性途徑進(jìn)行分泌，Gal在組織和細(xì)胞中的分布十分廣泛，提示其功能具有多樣性。研究發(fā)現(xiàn),Gal參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞黏附、增殖、凋亡、mRNA剪接、免疫應(yīng)答調(diào)控等多種生物學(xué)過程[7-8]。同時Gal還在自身免疫性疾病、變態(tài)反應(yīng)、炎性反應(yīng)、動脈硬化、糖尿病并發(fā)癥及腫瘤的發(fā)生和發(fā)展等多種病理過程中有重要作用[9]。

Gal-1和Gal-3作為Galectins家族中2個重要亞型，通過外分泌作用在生理及病理狀態(tài)下發(fā)揮重要的生物學(xué)作用，主要參與細(xì)胞的生長分化，與腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移及血管新生密切相關(guān)[10]。目前研究顯示，Gal-1和Gal-3可在胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、黑色素瘤及淋巴瘤等各種惡性腫瘤中高表達(dá)，并且參與了腫瘤發(fā)生與發(fā)展[11-13]。本研究通過聯(lián)合檢測Gal-1和Gal-3在肺腺癌中組織和血清的表達(dá)，結(jié)果顯示，在mRNA表達(dá)水平上，與健康人肺組織相比，肺腺癌組織明顯高表達(dá)Gal-1和Gal-3，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。血清Gal-1和Gal-3結(jié)果顯示，健康人血清Gal-1表達(dá)為(65.3±7.8)ng，而肺腺癌患者血清表達(dá)量為(230.7±11.3)ng，明顯高于健康人分泌水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；健康人血清Gal-3表達(dá)量為(34.0±5.4)ng，肺腺癌患者血清Gal-3表達(dá)量為(120.4±9.2)ng，明顯高于健康人分泌水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與此同時，本研究還發(fā)現(xiàn)血清中Gal-1和Gal-3水平與肺腺癌TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分化有密切關(guān)系。

綜上所述，Gal-1和Gal-3在肺腺癌組織中和血清中均高表達(dá)，二者的高表達(dá)與肺腺癌的侵襲能力和腫瘤轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。血清Gal-1和Gal-3對于肺腺癌的診斷具有較好的敏感性和特異性。因此，Gal-1和Gal-3有可能成為肺腺癌的重要血清標(biāo)記之一。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.24.063

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