兒茶酚胺氧位甲基轉移酶基因Val158Met多態性與阿立哌唑治療精神分裂癥患者療效的相關性研究

周 鑫，李康智，秦群生

(1. 廣西桂林市精神衛生中心/桂林市社會福利醫院，廣西 桂林 541001；2. 桂林醫學院，廣西 桂林 541004)

兒茶酚胺氧位甲基轉移酶基因Val158Met多態性與阿立哌唑治療精神分裂癥患者療效的相關性研究

周 鑫1，李康智2，秦群生1

(1. 廣西桂林市精神衛生中心/桂林市社會福利醫院，廣西 桂林 541001；2. 桂林醫學院，廣西 桂林 541004)

目的 探討兒茶酚胺氧位甲基轉移酶(COMT)基因Val158Met多態性與阿立哌唑治療精神分裂癥患者療效的相關性。方法 選取接受阿立哌唑治療的精神分裂癥患者80例作為治療組，選取同期愿意充當精神疾病志愿者的健康人70例作為對照組。應用即聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態分析(PCR-RFLP)與即陽性、陰性癥狀評定表(PANSS)進行基因分型與精神癥狀評定，同時觀察應用阿立哌唑治療的臨床效果。結果 2組的基因型及等位基因頻率比較差異有統計學意義(P均<0.05)。經阿立哌唑治療后，患者PANSS評分明顯降低(P<0.05)。3種基因型應用阿立哌唑治療后療效比較差異無統計學意義(P均>0.05)。結論 COMT基因Val158Met多態性并不關聯于臨床癥狀的改善，阿立哌唑治療精神分裂，能夠有效改善患者精神狀況及部分認知狀況。

精神分裂癥；兒茶酚胺氧位甲基轉移酶基因Val158Met多態性；阿立哌唑

兒茶酚胺氧位甲基轉移酶(COMT)是導致精神分裂癥的候選基因之一，這類型基因處于22q11.2，即22號染色體，其長臂11區2亞帶上[1]。COMT基因的cDNA已經可被全長克隆，克隆大小在6 210 bp左右[2]。對患者認知功能研究發現，精神分裂癥患者在工作記憶、注意力、智商、信息加工等方面會受到COMT基因多態性影響，且在Met基因型認知功能上遠遠優于另2種類型[3]。據調查，全世界約有1%的人口受到精神分裂癥的影響，由此可見，該病是全球主要的公共衛生疾病。多數學者認為，COMT基因會引發精神分裂癥，同時影響患者的認知功能與治療效果[4]。本研究分析了80例精神分裂癥患者COMT基因Val158Met多態性，阿立哌唑治療精神分裂癥的療效，報道如下。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2012年5月—2014年6月在桂林市精神衛生中心接受治療的精神分裂癥患者80例作為治療組，均符合美國精神障礙與行為問題診斷標準第4版(DSM-Ⅳ)相關標準，患者未患有嚴重內臟器官疾病，無較強烈的自殺企圖，無嚴重藥物依賴現象，未濫用過精神活性物質，在入組前14 d未服用過抗抑郁、抗癲癇、抗精神病等藥物，患者均簽署知情同意書。80例患者中，男49例，女31例；年齡17～60(38.4±2.7)歲；病程(16.3±4.1)年(4個月～29年)。選取同期自愿作為精神疾病志愿者的健康人70例為對照組，男44例，女26例；年齡16～60(38.2±2.9)歲。2組性別、年齡比較差異無統計學意義(P均>0.05)，具有可比性。

1.3檢測指標與方法

1.3.1采集血液，提取DNA基因組 取外周靜脈血5 mL置于0.5 mL的EDTA試管中，即刻放入-80 ℃低溫冰箱中保存。7 d后按照如下步驟對白細胞中的DNA進行提取：①取500 μL的靜脈全血，在其中混入TBP裂解液，將二者搖勻后放置3 min，而后應用高速冷凍離心機行離心處理1 min，而后棄掉上清。②上述步驟需重復3次左右，一直到形成沉淀，且顏色為淡紅色或者無色即可停止。③在離心管中加入20 μL的RNase/蛋白酶K液，而后即刻振蕩搖晃，待其均勻后放入溫度55 ℃左右的水槽中行衡溫浴處理，時間45 min左右，在溫浴期間數次對離心管行來回顛倒處理。④加入3 mol/L NaAc 10 μL，至pH值為4.8，而后再加入結合緩沖液1 250 μL，行振蕩搖晃處理，待其均勻后行3 min的轉動處理，而后在離心吸附柱中應用TIP加入上清液，放置1 min后行3 min離心轉動處理。⑤將廢液倒掉，加入漂洗緩沖液約600 μL，離心30 s，將此步驟重復2次后，最后一次將廢液倒掉，再行3 min的離心處理，這樣能夠保證漂洗緩沖液被充分去除。⑥在容量為1.5 mL的EP管中套上已經被取出的離心柱，將洗脫緩沖液50 μL加入其中，放置1 min后行1 min的離心處理，而后所提取到的DNA就會出現在EP管中。

1.3.2COMT基因型分析 ①主要應用PCR-RFLP法，P1為正向引物，序列號為5’-TCGTGGACGCCGTGATTCAGG-3’；P2為反向引物，序列號為5’-AGGTCTGACAACGGGT CAGGC-3’。PCR具體反應條件為：94 ℃預變性8 min，94 ℃變性1 min，57 ℃退火45 s，72 ℃延伸1 min，上述步驟循環35次后。在72 ℃條件下逐漸延伸8 min，而后保存于4 ℃條件下。②對PCR產物行純化處理。將DB緩沖液150 μL放入PCR反應液中，振蕩搖勻。而后在Collection上將Spin Column放置好，行1 min離心處理，將濾液棄掉。再在Spin Column中先后放入Rinse A和Rinse B，離心處理30 s后將濾液棄掉；在容量為1.5 mL的新型EP管中放好Spin Column，在中央位置混入Elution Buffer液30 μL，放置1 min。而后再行1 min的離心處理，以對DNA行洗脫處理。③對產物行酶切處理。將20 μL的酶切體系、7 μL的ddH2O、2 μL的10×buffer、10 μL的PCR產物以及1 μL的NlaⅢ酶放入容量為0.5 mL的EP管中，振蕩搖晃處理后放入溫度37 ℃的水浴中，時間控制在2.5 h。而后再應用濃度為3%的瓊脂糖凝膠行20 min的電泳處理，基因分型如下：V/V基因型為136 bp、81 bp；M/M基因型為96 bp、81 bp以及40 bp；V/M基因型為136 bp、96 bp、81 bp以及40 bp。由于40 bp擁有較小的條帶且已經擴散開，故而成像較模糊。

1.3.3精神癥狀評定 主要應用PANSS與臨床療效總評量表(CGI)進行精神癥狀評定。①PANSS量表：主要包括一般精神病理、陽性以及陰性量表。每個癥狀按照0～7分評分，7分為最嚴重，0分為最輕。②CGI量表：主要包括療效指數(EI)、病情嚴重程度(SI)以及療效總評(GI)3項。SI用于評定病情程度，0分代表沒有病，7分代表極其嚴重；GI用于評定患者治療前后的情況，0分代表未評，7分代表病變嚴重；EI是結合患者治療效果以及不良反應進行評定，EI=療效分/不良反應分，療效主要有4個級別，1分代表惡化或者未出現變化，4分代表療效顯著；不良反應也有4個級別，1分代表未出現不良反應，4代表不良反應已經對患者安危有所威脅。

2 結 果

2.12組COMT基因Val158Met多態性分布情況 2組基因型及等位基因頻率比較差異均有統計學意義(P均<0.05)。見表1。

表1 2組COMT基因Val158Met多態性分布情況

2.2治療組治療前后PANSS與CGI評分比較 治療后各評分均明顯降低(P均<0.05)。見表2。

2.3COMT基因多態性與阿立哌唑治療前后PANSS之間的相關性 3種基因型患者經阿立哌唑治療后療效比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

3 討 論

精神分裂癥主要是指個性、情感、行為以及思維上的分裂，發病機制至今尚未明確，可能與內分泌、遺傳或者環境有關[5]。諸多研究認為，家庭中若有近親出現精神分裂者，則與患者血緣愈加濃厚，患上精神分裂癥的概率也越高，由此可見，遺傳是主要原因[6]。COMT基因屬于多巴胺的主要降解酶[7]，其具有多態性，且不同基因型有不同活性，主要有3型，V/V型為高活性，V/M型為中等活性，M/M型為低活性。該基因中的堿基G會被A替換，而后使得COMT結構出現變化，使得纈氨酸逐漸轉變為蛋氨酸，這一突變致使COMT酶活性大幅度降低，致使位于大腦前額的多巴胺(DA)出現代謝紊亂現象，從而致使精神分裂癥的發病率增加[8]。此外，COMT基因Val158Met多態性與精神分裂癥患病率上升存在某種關聯。本研究結果顯示，治療組的M/M基因型頻率要比對照組高，表明M等位基因可能是精神分裂癥的易感因素。同時，Val158Met多態性在極大程度上決定著COMT活性，其多態性也關聯于COMT酶活性，V/V與M/M基因型患者會致使DA水平缺乏平衡性，導致大腦前額葉、扣帶回以及海馬等位置的DA信號出現異常，從而增加精神分裂癥的風險[9-11]。筆者認為V/M基因型精神分裂癥的發病概率低。

表2 治療組治療前后PANSS與CGI評分比較，分)

表3 COMT基因多態性與阿立哌唑治療后PANSS與CGI評分相關性±s，分)

目前，阿立哌唑作為臨床主要抗精神病藥，與D2、D3、5-HT1A、5-HT2A受體具有高親和力，與D4、5-HT2 c、5-HT7、α1、H1受體及5-HT重吸收位點具有中度親和力。阿立哌唑是D2和5-HT1A受體的部分激動劑，也是5-HT2A受體的拮抗劑，與其他具有抗精神分裂癥作用的藥物一樣，阿立哌唑的作用機制尚不清楚，但認為是通過對D2和5-HT1A受體的部分激動作用及對5-HT2A受體的拮抗作用介導產生的，與其他受體的作用可能產生了阿立哌唑臨床上某些其他的作用，如對α1受體的拮抗作用可以闡釋其體位性低血壓的現象，能夠穩定多巴胺系統，同時對5-HT2A受體起阻斷作用[12-14]，亦有部分激動功能，故而可有效治療精神分裂癥患者的情感以及精神障礙。且臨床研究后證實，該藥對陰性癥狀改善情況比陽性癥狀好，尤其體現在認知功能方面[15-16]。而M/M基因型患者本來就比其他2種基因型患者有更好的認知能力，故而阿立哌唑對M/M基因型精神分裂患者認知功能改善效果最優[17]。

本研究結果顯示，阿立哌唑治療后精神分裂癥患者PANSS評分明顯降低，且不同基因型患者的各項評分均明顯下降，各型間評分比較差異無統計學意義。

綜上所述，COMT基因Val158Met具有多態性，且M等位基因以及M/M基因型在很大程度上屬于精神分裂癥的易感因素，然而該多態性并不關聯于臨床癥狀的改善。阿立哌唑治療精神分裂能夠有效改善患者精神狀況，亦可改善部分患者的認知狀況。

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Study on the correlation between COMT gene Val158Met polymorphism and clinical efficacy of aripiprazole in the treatment of schizophrenic patients

ZHOU Xin1, LI Kangzhi2, QIN Qunsheng1

(1.The Mental Health Cente of Guilin/Guilin City Social Welfare Hospital, Guilin 541001, Guangxi, China; 2.Guilin Medical University, Guilin 541004, Guangxi, China)

Objective It is to approach the correlation of COMT gene Val158Met polymorphism and clinical effect of aripiprazole in treatment of schizophrenic patients. Methods 80 cases of schizophrenia patients received aripiprazole were selected as treatment group, 70 cases of healthy people who willing to volunteer spirit disease were selected as control group. The clinical data were retrospectively analyzed, as the treatment group. The genotyping were detected by Polymerase Chain Reaction restriction fragment length polymorphism analysis (PCR-RFLP), the symptoms were evaluated by Positive and Negative Symptom Scale (PANSS). At the same time, the curative effects were observed. Results There was significant differences in the genotypes and allele frequency between both groups (allP<0.05). After treatment by aripiprazole, the PANSS scores were significantly reduced in treatment group (P<0.05), but there was no significant difference between the three genotypes after treatment by aripiprazole (allP>0.05). Conclusion COMT gene Val158Met polymorphism is not associated with the improvement of clinical symptom, aripiprazole in treatment of schizophrenia patients to mental health, can effectively improve the patient's mental health and part of cognitive status.

schizophrenia; COMT gene Val158Met polymorphism; aripiprazole

周鑫,男，主治醫師，研究方向為精神分裂癥及雙向情感障礙的診療。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.06.004

R749.3

A

1008-8849(2015)06-0580-04

2014-08-30