CD68+、CD163+巨噬細胞對食管癌浸潤及預后的影響

張志斌,朱 艷,席俊峰

(陜西省榆林市第一醫院,陜西 榆林 719000)

CD68+、CD163+巨噬細胞對食管癌浸潤及預后的影響

張志斌,朱 艷,席俊峰

(陜西省榆林市第一醫院,陜西 榆林 719000)

目的 探討CD68+、CD163+巨噬細胞對食管癌浸潤及預后的影響。方法 收集手術切除的食管癌組織標本84例、食管癌旁組織標本49例，采用免疫組化法檢測組織標本中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度，并對患者預后進行分析。結果 食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度每視野(35.69±14.50)個和(29.78±12.36)個，中位數分別為32.8個和27.1個；癌旁正常組織中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度每視野(4.26±2.30)個和(2.33±1.71)個，中位數分別為3.4個和2.2個。 食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度明顯高于癌旁正常組織(P均<0.05)。 TNMⅢ期者、有淋巴結轉移者、低分化程度者CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度明顯高于TNM Ⅰ～Ⅱ期者、無淋巴結轉移者、高中分化程度者(P均<0.05)；患者術后1年、3年、5年生存率分別為83%，67%，46%，中位生存時間為44.21個月。Spearman相關分析顯示，CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度與患者生存時間呈現負相關性(P<0.05)；多因素Cox回歸分析TNM分期、淋巴結轉移、分化程度、CD163+巨噬細胞浸潤密度是影響患者預后的獨立危險因素(P均<0.05)。結論 食管癌患者局部病灶組織中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度明顯增高，CD163+巨噬細胞浸潤密度增高是影響患者預后的獨立因素。

食管癌；CD68+巨噬細胞；CD163+巨噬細胞；浸潤；預后

在腫瘤組織及其周圍浸潤的巨噬細胞被稱為腫瘤相關巨噬細胞(tumor-associated macrophages，TAMs)，此類巨噬細胞的浸潤多少與胃癌等腫瘤的預后關系密切[1-2]，可能是通過影響淋巴管生成及血管生成等環節影響腫瘤的預后[3]。目前研究顯示CD68+、CD163+巨噬細胞在胃癌、乳腺癌、平滑肌肉瘤等惡性腫瘤中浸潤密度對患者預后存在一定影響，可作為預測以上惡性腫瘤疾病進展、轉移及復發的預測因子[4-5]，但是關于CD68+、CD163+巨噬細胞對食管癌浸潤及預后影響的研究相對較少。為探討CD68+、CD163+巨噬細胞對食管癌浸潤及預后的影響，筆者對我院近年來收治的食管癌手術患者腫瘤組織標本及癌旁組織標本中CD68+、CD163+巨噬細胞的浸潤情況進行了檢測，并對患者預后進行了追蹤隨訪，現將結果報道如下。

1 臨床資料

1.1一般資料 收集我院2008年1月—2011年12月手術切除的食管癌組織標本84例，食管癌旁組織標本49例?；颊呔±碜C實為原發性食管癌，在術前未接受過任何化療、放療等治療，未合并有甲狀腺功能亢進、類風濕、糖尿病等疾病，有隨訪條件且依從性較好。排除妊娠期及哺乳期婦女。入選食管癌組織標本病例中男53例，女31例；年齡42～91(63.49±8.33)歲；TNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期54例,Ⅲ期24例；鱗癌82例,腺癌2例；高分化20例,中分化25例,低分化39例；有淋巴結轉移36例,無淋巴結轉移48例。

1.2所用試劑 檢測試劑包括DAB顯色試劑盒、PV-9000試劑盒、鼠抗人CD68單克隆抗體、鼠抗人CD163單克隆抗體，均購自北京中杉金橋生物技術公司。

1.3實驗方法 在術中取得食管癌病灶組織標本、癌旁組織標本，立即采用10%甲醛溶液進行固定，送病理實驗室進行常規石蠟包埋，切片機連續切片，切片厚度為4 μm。CD68+、CD163+表達檢測方法采用免疫組化染色法，檢測操作流程嚴格按照試劑盒說明進行，所用陽性對照為已知的食管癌陽性組織切片，PBS取代一抗作為陰性對照。

1.4結果判讀標準 由2位主治醫生資格病理醫生進行讀片，在細胞質內出現黃褐色或棕褐色顆粒即為CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤，對5個不重疊的間質及癌巢在高倍視野下進行觀察，并對陽性細胞進行計數。

1.5隨訪 從患者術后出院起開始隨訪，主要采用為門診及電話隨訪，隨訪截止時間為2013年12月或死亡，生存時間為患者手術之日起到最后隨訪時間或死亡時間，死亡不包括意外死亡者。

1.6統計學方法 采用SPSS 17.0統計學軟件進行統計分析，計數資料采用卡方檢驗，計量資料采用t檢驗，進行Spearman相關分析及多因素Cox回歸分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度 食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度明顯高于癌旁正常組織中浸潤密度，食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度每視野為(35.69±14.50)個和(29.78±12.36)個，中位數分別為32.8個和27.1個；癌旁正常組織中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度每視野為(4.26±2.30)個和(2.33±1.71)個，中位數分別為3.4個和2.2個。食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度明顯高于癌旁正常組織中浸潤密度(t=15.04，t=15.44，P均<0.05)。

2.2不同臨床病理特征時CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度 TNM Ⅲ期者、有淋巴結轉移者、低分化程度者CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度明顯高于TNM Ⅰ～Ⅱ期者、無淋巴結轉移者、高中分化程度者(P均<0.05)，不同性別、年齡、分型、分化程度患者CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見表1。

表1 不同臨床病理特征時CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度比較±s，個)

2.3患者隨訪時間及生存率 84例患者隨訪時間最長58個月，最短22個月，平均48.23個月?；颊呱鏁r間3～58個月，中位生存時間44.21個月。患者1年、3年、5年失訪人數分別為2例、6例、11例，死亡人數分別為12例、22例、34例;1年、3年、5年生存率分別為83%(70/84)、67%(56/84)和46%(39/84)。

2.4CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度與生存時間的相關性 Spearman相關分析結果顯示，CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度與患者生存時間呈負相關(r=-0.30，r=-0.35，P均<0.05)。

2.5患者預后的多因素影響因素分析 以患者TNM分期、淋巴結轉移、分化程度及CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度為自變量，以患者死亡為因變量，多因素Cox回歸分析結果顯示TNM分期、淋巴結轉移、分化程度、CD163+巨噬細胞浸潤密度是影響患者預后的獨立危險因素(P<0.05)。見表2。

表2 食管癌患者預后的多因素影響因素分析

3 討 論

腫瘤在發展過程中有炎細胞浸潤現象存在，巨噬細胞是主要浸潤炎性細胞，腫瘤相關巨噬細胞的浸潤被認為與抗腫瘤免疫反應有關，胃癌、口腔癌等惡性腫瘤組織中高水平的巨噬細胞浸潤均影響到患者預后[2-3，6]，因而近年來各種腫瘤組織中腫瘤相關巨噬細胞浸潤的研究成為臨床研究熱點。

巨噬細胞包括經典活化巨噬細胞與替代性活化巨噬細胞。研究發現在不同的微環境下巨噬細胞會發生不同變化，如果微環境中細菌產物或腫瘤壞死因子γ等物質刺激會誘導巨噬細胞向經典活化巨噬細胞分化，從而引起白細胞介素-12等物質釋放，參與Th1型免疫應答；如果微環境中白細胞介素-10、白細胞介素-4等物質刺激會導致巨噬細胞向替代性活化巨噬細胞分化，此時會誘導白細胞介素-10等釋放，參與Th2型免疫應答，無論是經典活化巨噬細胞還是替代性活化巨噬細胞均會影響到腫瘤的浸潤及轉移過程[7-10]。CD68+、CD163+巨噬細胞分別屬于經典活化巨噬細胞、替代性活化巨噬細胞，本研究結果顯示在食管癌組織中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度均明顯高于癌旁正常組織，證實食管癌組織中存在腫瘤相關巨噬細胞的浸潤；將患者不同病理特征時CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度進行分析，結果顯示TNM Ⅲ期者、有淋巴結轉移者、低分化程度者CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度明顯高于TNM Ⅰ～Ⅱ期者、無淋巴結轉移者、高中分化程度者，并且多因素分析結果顯示TNM分期、淋巴結轉移、分化程度、CD163+巨噬細胞浸潤密度是影響患者預后的獨立危險因素，Spearman相關分析結果也顯示CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度與患者生存時間呈負相關，表明CD163+巨噬細胞浸潤密度對食管癌患者預后有影響，與文獻[11-12]研究結果一致。CD68+巨噬細胞浸潤密度對患者的預后的影響尚不能完全肯定，但是臨床大多數研究認為CD68+巨噬細胞浸潤對實體腫瘤預后有影響[13-15]，因而CD68+巨噬細胞浸潤對預后的影響尚需要進一步研究。

綜上所述，食管癌患者局部病灶組織中CD68+、CD163+巨噬細胞浸潤密度明顯增高，CD163+巨噬細胞浸潤密度增高是影響患者預后的獨立因素。

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Influence of CD68+and CD163+macrophages on the infiltration of esophageal carcinoma and its prognosis

ZHANG Zhibin, ZHU Yan, XI Junfeng

(The First Hospital of Yulin City, Yulin 719000, Shaanxi, China)

Objective It is to approach the influence of CD68+, CD163+macrophage on the infiltration of esophageal cancer and its prognosis. Methods 84 cases of specimens of esophageal carcinoma in resection operation and 49 cases of esophageal paracancerous tissues were collected, the infiltration density of CD68+, CD163+macrophage in the specimens were detected by immunohistochemistry method, and the prognosis of the patients were analyzed. Results The every field mean density of CD68+, CD163+macrophages infiltrating in esophageal cancer tissue was 35.69±14.50 and 29.78±12.36 respectively, the median was 32.8 and 27.1. The results in paracancerous tissues was 4.26±2.30 and 2.33±1.71, the median was 3.4 and 2.2 respectively, the median was 32.8 and 27.1. The infiltration density of CD68+and CD163+macrophage in esophageal cancer tissue was significantly higher than that in paracancerous tissues (allP<0.05). The infiltration density of CD68+, CD163+macrophage with TNM Ⅲ stages, lymph node metastasis, or low differentiation degree, was significantly higher than that with TNM stage Ⅰ to Ⅱ, without lymph node metastasis, and high differentiation degree (allP<0.05). The survival rates after operation of 1 year, 3 years, 5 years were 83%, 67% and 46%, the median survival time was 44.21 months. Spearman correlation analysis showed that there was negative correlation between the infiltration density of CD68+, CD163+macrophage and the survival time of patients (P<0.05); multivariate Cox regression analysis showed that the TNM stage, lymph node metastasis, differentiation, CD163+macrophage infiltration density affects the prognosis of patients with independent risk factors ( allP<0.05). Conclusion The CD68+, CD163+macrophage infiltration density in local lesion tissue of patients with esophageal cancer are increased significantly, the increase of CD163+macrophages infiltration density is an independent factor to influence the prognostic.

macrophages; infiltration; prognosis; esophageal carcinoma

張志斌，男，主治醫師，研究方向為食管癌綜合治療。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.06.007

R735.1

A

1008-8849(2015)06-0590-03

2013-05-10