血漿內毒素檢測在快速診斷革蘭陰性菌引起全身性感染的應用

蔡志軍， 韋 群， 周鷹豪， 陳 瑜

(1.廣東醫學院第二附屬醫院檢驗科， 廣東 湛江 524000 2.廣東省湛江市湛工安度斯生物有限公司， 廣東 湛江 524003)

血漿內毒素檢測在快速診斷革蘭陰性菌引起全身性感染的應用

蔡志軍1， 韋 群2， 周鷹豪1， 陳 瑜2

(1.廣東醫學院第二附屬醫院檢驗科， 廣東 湛江 524000 2.廣東省湛江市湛工安度斯生物有限公司， 廣東 湛江 524003)

目的:探討血漿內毒素檢測與傳統血培養之間的關系，方法:應用LKM－02－32動態試管檢測儀檢測血漿中內毒素的含量，并與血培養結果進行比較。結果:337例患者中內毒素檢測陽性35例，占10.39%，內毒素檢測陰性302例，占89.61%;內毒素檢測陽性組血培養出革蘭陰性菌19例，占54.29%，內毒素檢測陰性組血培養出革蘭陰性菌2例，占0.66%。內毒素檢測陽性組血培養出革蘭陰性菌顯著高于內毒素檢測陰性組，兩組差異有統計學意義(P＞0.05)，在內毒素檢測陽性的35例患者中，19例血培養陽性的內毒素含量也顯著高于16例血培養陰性的內毒素含量(P＞0.05)。以血培養為標準，內毒素檢測的敏感度為90.48%，特異度為94.94%，陽性預測值為54.29%，陰性預測值為99.34%，結論:內毒素檢測較傳統的血培養法快速，陽性率高，可用于全身性感染的早期輔助診斷。

內毒素; 革蘭陰性菌; 感 染

全身性感染主要見于敗血癥，革蘭陰性菌感染尤常并發內毒素血癥，常見的致病菌如大腸埃希氏菌、克雷伯氏菌、腸桿菌屬、銅綠假單胞菌、變形桿菌等等，多通過泌尿道、腸道、膽道和呼吸道引起感染，亦可通過外傷、手術、導管以及器械操作等途徑而進入血液，并大量繁殖引起敗血癥，從而造成內毒素血癥［1］。通過血漿內毒素的快速檢測，以判斷由革蘭陰性菌引起的全身性感染是近年來對感染性疾病病原學檢查的一種新的輔助診斷方法，本文就血漿內毒素檢測對革蘭陰性菌引起的全身性感染的快速診斷進行探討，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象:收集樣本標準:根據廣東省2008年7月頒布的血培養指導原則以及《嚴重感染與感染性休克國際診治指南(2008)》診斷要求［2］:有以下體征之一均采血做血培養(需氧+厭氧)，同時抽取2mL靜脈置于肝素鋰抗凝管中進行血漿內毒素檢測，①體溫＞38℃或＜36℃;②心率＞90次/min;③呼吸頻率＞20次/ min或PCO2＜32mmHg;白細胞數＞12×109L－1或＜4× 109L－1。從2013年10月至2014年7月收集到符合上述條件的樣本337份，年齡21d至89歲，男192例，女145例，患者主要來自兒科、ICU、呼吸內科、腎內科、血液內科及感染科。

1.2 方 法

1.2.1 儀器與試劑:血培養及細菌鑒定:血培養儀: BACTEC－9120;全自動細菌分析儀:PhoenixTM－100，以及配套試劑均來自美國BD公司產品，每批次產品均嚴格按照常規做室內質控，質控菌株采用大腸埃希氏菌ATCC25922以及金黃色葡萄球菌ATCC25923。血漿內毒素檢測:動態試管檢測儀LKM－02－32、TAL－80試管恒溫儀及內毒素檢測試劑盒、質控品均由廣東湛江安度斯生物有限公司提供。

1.2.2 血漿內毒素檢測:①采集好的抗凝血進行2000r/min離心10min，取上層富含血小板的血漿0.1mL加入裝有0.9mL樣品處理液中，混勻后75℃保溫10min取出后放置冷凍槽5min，為待測血漿樣品;②取0.25mL試劑復溶液加入反應試劑中，輕輕搖勻靜置2min得試劑溶液;③取反應管，每樣本平行2管分別加入0.1mL處理后的待測血漿樣品及50μg試劑溶液，混勻后插入 LKM－02－32動態試管檢測儀中，75min反應結束后自動計算血漿中內毒素的含量。大于0.109EU/mL為陽性。

1.2.3 血培養陽性樣本轉種血平板后使用PhoenixTM－100全自動細菌分析儀進行鑒定。

1.3 統計學處理:應用SPSS17.0軟件統計分析，計量資料組間比較采用t檢驗，以±s表示;計數資料組間比較采用χ2檢驗，P＞0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 內毒素檢測與血培養結果:337例患者中內毒素陽性35例，占10.39%，內毒素含量:0.272±0.246EU/mL，內毒素陽性組血培養出革蘭陰性菌19例，占54.09%，內毒素陰性組302例，占89.61%，內毒素正常組血培養出革蘭陰性菌2例，占0.66%;血培養陽性21例組，內毒素含量:0.298±0.314EU/mL，血培養陰性316例組，內毒素含量:0.04±0.045EU/mL，兩者比較差異有統計學意義(P＞0.05);在內毒素陽性35例中，19例血培養出革蘭陰性菌的內毒素平均含量為 0.325EU/mL，16例血培養陰性的內毒素平均含量為:0.208EU/mL，兩者比較P＞0.05，差異有統計學意義。

2.2 內毒素檢測的敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值。以培養出革蘭陰性菌為標準，內毒素檢測的敏感度為90.48%，特異度為94.94%，陽性預測值為54.29%，陰性預測值為99.34%，檢測結果見表1。

表1 內毒素檢測和血培養陽性生結果比較

3 討 論

內毒素的主要成分為脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)，是革蘭陰性菌細胞壁的主要成分，LPS是炎癥反應的關鍵遞質，其化學成分主要是由O－特異性鏈、核心多糖、類脂A三部分組成［3］，LPS一般在細菌死后細胞壁崩解時釋出，活菌亦可以發皰形式將內毒素釋出。革蘭陰性菌感染是院內感染的主要致病菌，尤其是其所致的敗血癥更為嚴重。董玉梅［4］、馮穎［5］、邵敏偉［6］等分別在血培養陽性病原體分析中，革蘭陰性菌分別占:59.95%、52.3%、65.2%，本院2013年度統計158份血培養陽性標本中，革蘭陰性菌占61.4%，基本一致。因此，及時判斷革蘭陰性菌引起的全身性感染對治療及預后起到重要作用。

細菌培養是循征感染醫學中細菌性感染性疾病病原學檢查的“金標準”。細菌培養在臨床疾病診斷及使用抗生素治療的過程中具有重要的意義，具有一定的不可替代性，由于細菌種類繁多，進行培養時不同的菌種所需要的條件(營養、溫度、酸堿度、氣體等)各異，這就難以確保在普通培養時對菌種培養鑒定的全面性，還有受臨床用藥、標本采集等因素影響了培養的準確性，同時培養時間過長也可能延誤臨床診斷病情，間接導致病人的病情加重，出現不良后果。

內毒素檢測的方法有凝膠法、濁度法、比色法、酶聯免疫吸附測定法、流式細胞術、化學化光測定法等。我們現在使用由湛江安度斯生物有限公司提供的配套儀器及試劑，根據內毒素與鱟試劑的C因子發生反應，由內毒素引發激活的凝固酶，切斷凝固蛋白原中的精氨酸肽鏈，形成凝固蛋白從而產生凝膠過程中的濁度變化，是用濁度儀定量的方法，本方法廣泛應用于藥物檢測及臨床。在本次研究中，血培養出革蘭陰性菌組內毒素含量明顯高于血培養陰性組(P＞0.05)，說明內毒素測定與由革蘭陰性菌引起的全身性感染有良好的相關性，血漿內毒素檢測的陽性率高于血培養法且檢測時間僅僅為75min，其敏感度及特異度均達90%以上;在35例內毒素陽性標本中僅有19例血培養出陰性菌，陽性預測值為54.29%，這與部分患者患肝臟疾病、胰腺疾病、潰瘍性結腸炎并發內毒素血癥有一定關系。其次假陽性還可由于患者治療過程中使了脂肪乳、白蛋白、香茹多糖類、黃芪注射液、雙黃連注射液等藥物;各種相關的反應條件、操作環境、標準品等等也可干擾試驗的準確性。因些，在實際檢測過程中應嚴格遵守操作規程，盡力排除各種干擾因素，使試驗結果更加準確、真實可信。在21例血培養出革蘭陰性菌的患者中有2例血漿內毒素檢測陰性，假陰性結果與感染早期未經抗生素治療，內毒素尚未釋出有關。我們本次研究的陰性預測值達99.34%。

［1］馬金玲，劉揚，李偉保，李忠信.內毒素檢測與臨床應用現狀［J］.國外醫學臨床生物化學與檢驗學分冊，2003，24 (2):64～65.

［2］Dellinger R P，Levy M M，Carlet J M，et al.Surviving Sepsis Campaign:International guidelines for management of severe sepsis and septic shock:2008［J］.Intensive Care Med，2008，34(1):17～60.

［3］焦炳華，余慶.內毒素的結構及其功能的關系［J］.國外醫學生分子生物學分冊，1987，9(4):168～170.

［4］董玉梅，靳桂明，劉海冰，等.從菌血癥病原體分析觀察醫院感染動向［J］.華南國防醫學雜志，2002，16(2):55～56.

［5］馮穎，黃晶，姚興偉，等.3500份血培養陽性結果分析和病原菌分布［J］.中國實驗診斷學，2009，13(10):1426～1247.

［6］邵敏偉，梁艷，周庭銀.4603例血培養病原菌種類分布與耐藥性分析［J］.中國抗生互雜志，2008，33(12):727～730.

B

10.3969/j.issn.1006－6233.2015.04.059

1006－6233(2015)04－0690－02