TACE和RFA治療肝細胞肝癌對機體細胞免疫功能的影響

王 艷,田榮華

(湖北省孝感市中心醫院磁共振室 432000)

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·論 著·

TACE和RFA治療肝細胞肝癌對機體細胞免疫功能的影響

王 艷,田榮華△

(湖北省孝感市中心醫院磁共振室 432000)

目的 探討肝動脈栓塞化療(TACE)和經皮肝臟射頻消融術(RFA)治療肝細胞肝癌對機體細胞免疫功能的影響。方法 選取84例乙肝相關肝細胞肝癌患者，根據介入治療方式分為TACE組(n=52)和RFA組(n=32)，其中TACE組大肝癌患者18例(直徑大于5 cm)，小肝癌患者34例(直徑小于或等于5 cm)；RFA組大肝癌患者15例，小肝癌患者17例。分別于患者術前、術后24 h及術后7 d采用FACS Calibur流式細胞儀對免疫細胞亞群進行檢測。結果 TACE組小肝癌患者術后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術前減少，差異有統計學意義(P<0.05)，RFA組小肝癌患者術后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術前升高，但CD8+降低，差異均有統計學意義(P<0.05)；TACE組大肝癌患者術后24 h時和術后7 d時CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均較術前降低，且術后7 d時CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均較術后24 h時升高，差異均有統計學意義(P<0.05)，RFA組大肝癌患者術后24 h時CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均較術前降低，術后7 d時CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均較術前升高，差異均有統計學意義(P<0.05)；術后7 d時RFA組大小肝癌患者CD4+/CD8+高于TACE組，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 無論是TACE還是RFA，均會對肝癌患者免疫功能產生影響，RFA對患者術后肝功影響較小，且有利于免疫功能恢復。

肝細胞肝癌； 肝動脈栓塞化療； 經皮肝臟射頻消融術； 細胞免疫

肝細胞肝癌是位于世界常見腫瘤第5位的惡性腫瘤，我國患者約占全世界的55%，屬于高發國家，對于早期肝癌手術治療最有效[1]。肝動脈栓塞化療(TACE)和經皮肝臟射頻消融術(RFA)是對于無法進行手術治療患者的兩種首選非手術介入治療方法，并取得了一定臨床效果[2-3]。然而，有研究指出，對于乙肝病毒所致肝細胞肝癌患者在行介入治療后會出現病毒感染反彈[4]。亦有研究指出，介入微創治療術后機體免疫功能會發生改變[5]。目前對于介入治療是否會對機體免疫產生影響尚無統一結論。因此，本研究進一步探討TACE和RFA治療對肝細胞肝癌患者術后機體免疫功能的影響，以期為臨床實踐提供基礎資料。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年3月至2013年4月在本院進行介入治療的乙肝相關肝細胞肝癌患者84例，其中男71例，女13例，年齡31～73歲，平均(56.8±9.4)歲，所有患者均經肝穿刺病理確證為肝細胞肝癌。Child-Pugh分級：A級69例，B級15例。治療前65例患者接受規范服用核苷類抗病毒治療3個月以上，19例未進行治療。根據患者介入治療方式分為TACE組和RFA組，其中TACE組52例，男45例，女7例；平均年齡(57.3±9.0)歲；Child-Pugh分級：A級44例，B級8例；腫瘤直徑大于5 cm者18例，作為大肝癌組，腫瘤直徑小于或等于5 cm者 34例，作為小肝癌組；甲胎蛋白(AFP)水平(367.6±49.7)ng/mL；包膜完整37例(71.2%)，不完整15例(28.8%)；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期32例(61.5%)，Ⅲ～Ⅳ期20例(38.5%)；病理學分級：低分化17例(32.7%)，中分化18例(34.6%)，高分化17例(32.7%)。RFA組32例，男26例，女6例；平均年齡(56.2±10.2)歲；Child-Pugh分級：A級25例，B級7例；腫瘤直徑大于5 cm者15例，作為大肝癌組，腫瘤直徑小于或等于5 cm者17例，作為小肝癌組；AFP水平(373.2±53.4)ng/mL；包膜完整21例(65.6%)，不完整11例(34.4%)；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期21例(65.6%)，Ⅲ～Ⅳ期11例(34.4%)；病理學分級：低分化9例(28.1%)，中分化12例(37.5%)，高分化11例(34.4%)。TACE組和RFA組患者在年齡、性別、Child-Pugh分級、AFP水平、包膜完整性、TNM分期、病理學分級等一般情況方面差異均無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 TACE組 所有患者均采取Seldinger技術，將導管經皮股動脈選擇性置入肝總動脈，注入造影劑，對腫瘤部位、大小和血供情況進行觀察，明確腫瘤血供后，將微導管超選擇性置入腫瘤靶供血動脈，將化療藥物(5-氟尿嘧啶500～1 000 mg+表阿霉素20～40 mg)和栓塞劑(明膠海綿1～2 mm+超液態碘油5～15 mL)經導管進行灌注，對靶動脈進行封閉。

1.2.2 RFA組 所有患者術前禁飲禁食，采用Cool-tip冷循環射頻治療系統(購自美國Radionics公司)對患者進行冷循環射頻消融，參數設置：電極針17 G、針尖長度3 cm，電流1～2 A，功率100～200 W，頻率480 kHz。在超聲引導下進行定位，根據腫瘤形狀對電極針布放方式進行設計，使消融覆蓋整個腫瘤，并超過腫瘤邊緣0.6～1.0 cm，每針消融12 min，術后針尖溫度超過70 ℃。治療后24～48 h進行增強CT復查，對消融范圍進行觀察，對于消融不徹底的患者，7 d后再行RFA。

1.2.3 實驗室檢測 分別于患者術前、術后24 h及術后7 d時抽取患者外周靜脈血10 mL，抗凝，采取密度梯度離心法用淋巴細胞分離液對外周血有核細胞進行分離，并進行標記染色25 min，加入細胞裂解液10 mL搖晃均勻，室溫條件下孵育15 min，在233 g離心力下離心10 min，棄上清液，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗2次。采用FACS Calibur流式細胞儀(購自美國BD公司)對免疫細胞亞群進行檢測，采用Cell Quest軟件獲取細胞并進行分析。分別于術前和術后7 d時采用日立7180型全自動生化分析儀(購自日本日立公司)對患者肝功能指標丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、清蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)進行檢測。

2 結 果

2.1 4項肝功能指標在TACE患者術前和術后結果比較 見表1。TACE組患者中小肝癌組患者ALT、AST、ALB和TBIL 術前和術后差異均無統計學意義(P>0.05)；大肝癌組患者ALT、AST和TBIL術后均高于術前，而ALB低于術前，差異均有統計學意義(P<0.05)。

表1 4項肝功能指標在TACE患者術前和術后結果比較

注：與術前相比，*P<0.05。

2.2 4項肝功能指標在RFA患者術前和術后結果比較 見表2。RFA組患者中小肝癌組患者ALT、AST、ALB和TBIL 術前和術后差異均無統計學意義(P>0.05)；大肝癌組患者術后ALT高于術前，而AST低于術前，差異均有統計學意義(P<0.05)。

表2 4項肝功能指標在RFA患者術前和術后結果比較

注：與術前相比，*P<0.05。

2.3 4項免疫細胞在TACE患者術前和術后變化情況 見表3。TACE組患者小肝癌組患者術后24 h時CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+差異均無統計學意義(P>0.05)，術后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術前減少，差異均有統計學意義(P<0.05)；大肝癌組患者術后24 h時和術后7 d時CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均較術前降低，差異均有統計學意義(P<0.05)，且術后7 d時CD3+、CD4+和CD4+/CD8+均較術后24 h時升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。

表3 4項免疫細胞在TACE患者術前和術后變化情況

注：與術前相比，*P<0.05；與術后24 h相比，#P<0.05。

表4 4項免疫細胞在RFA患者術前和術后變化情況

注：與術前相比，*P<0.05；與術后24 h相比，#P<0.05。

2.4 4項免疫細胞在RFA患者術前和術后變化情況 見表4。RFA患者小肝癌組術后24 h時CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+與術前差異均無統計學意義(P>0.05)，術后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術前升高，但CD8+降低，差異均有統計學意義(P<0.05)；大肝癌組患者術后24 h時CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均較術前降低，術后7 d時CD4+、CD8+和CD4+/CD8+均較術前升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。

2.5 TACE組和RFA組患者不同時間點CD4+/CD8+變化情況比較 TACE組小肝癌患者術后CD4+/CD8+呈下降趨勢，RFA組小肝癌患者術后CD4+/CD8+呈上升趨勢，術后7 d時RFA組高于TACE組，差異有統計學意義(P<0.05)，見圖1；TACE組和RFA組大肝癌患者術后CD4+/CD8+均呈先下降后上升趨勢，術后7 d時RFA組高于TACE組，差異有統計學意義(P<0.05)，見圖2。

圖1 TACE組和RFA組患者小肝癌組不同時間點CD4+/CD8+變化情況

圖2 TACE組和RFA組患者大肝癌組不同時間點CD4+/CD8+變化情況

3 討 論

近年來，隨著微創治療技術的普及和發展，介入治療逐漸被應用于肝細胞肝癌的治療，其中TACE和RFA是比較常用的介入治療方式。有研究指出，在早期肝癌和小肝癌治療中TACE和RFA均可獲得較好的臨床效果[6]。肝臟作為機體最大的免疫器官，在機體免疫中發揮重要作用[7]。在肝癌發生、進展過程中會釋放大量的腫瘤移植因子，對機體免疫功能產生抑制作用[8]。TACE和RFA治療方式是否會對機體免疫功能產生影響尚無定論。有研究指出，TACE治療中栓塞了癌組織供血動脈，導致癌細胞壞死，從而有效減少對免疫功能的影響[9]。也有研究指出，行介入治療的患者大多已處于中、晚期，在行栓塞治療過程中會對正常肝組織造成損傷，進而導致免疫功能進一步下降[10]。亦有研究指出，RFA有利于增強機體免疫功能[11]。本研究中對TACE和RFA治療后患者免疫細胞變化情況進行了分析，并比較了兩種方法對免疫功能的影響。

本研究中TACE組和RFA組患者一般情況差異均無統計學意義(P>0.05)，從而排除了一般情況對研究結果的影響。同時，本研究中，根據腫瘤直徑情況進行分組分析，結果顯示，無論TACE組還是RFA組患者，小肝癌組患者ALT、AST、ALB和TBIL 手術前、后差異均無統計學意義(P>0.05)，說明對于直徑小于或等于5 cm的小肝癌，TACE和RFA治療對肝功能影響較小，效果相當[12]。對于大肝癌患者，TACE組ALT、AST和TBIL術后均高于術前，而ALB低于術前，差異有統計學意義(P<0.05)；RFA組患者術后ALT高于術前，而AST低于術前，差異均有統計學意義(P<0.05)，說明對于大肝癌患者的介入治療，TACE組和RFA組治療后都會對患者肝功能產生一定的影響，整體上RFA的影響要小于TACE。在腫瘤的發生、進展及預后中，機體免疫功能發揮重要作用，尤其是T細胞在抗腫瘤免疫中意義重大[13]。CD3+、CD4+和CD8+是比較重要的T細胞亞群，對維持細胞免疫穩態具有重要作用，CD3+水平主要反映外周血成熟T細胞水平，CD4+在輔助免疫中發揮重要作用，CD8+主要發揮免疫抑制作用，CD4+/ CD8+可反映細胞免疫穩定狀態，在判別疾病嚴重程度及預后中具有重要意義[14]。本研究結果顯示，對于小肝癌患者，無論是TACE組還是RFA組，術后24 h時CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+差異均無統計學意義(P>0.05)，而術后7 d時，TACE組患者CD4+和CD4+/CD8+均較術前減少，差異有統計學意義(P<0.05)，RFA組患者CD4+和CD4+/CD8+均較術前升高，但CD8+降低，差異有統計學意義(P<0.05)，說明對于小肝癌患者，RFA對患者T細胞亞群影響較小。對于大肝癌患者，TACE組患者術后24 h時和術后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術前降低，差異均有統計學意義(P<0.05)，且術后7 d時CD4+和CD4+/CD8+均較術后24 h時升高，差異有統計學意義(P<0.05)，說明TACE和RFA治療對大肝癌患者T細胞亞群影響較大，同時，無論大肝癌還是小肝癌組，術后7 d時RFA組均高于TACE組，差異有統計學意義(P<0.05)，提示RFA對肝癌患者T細胞亞群的影響整體小于TACE。分析原因：RFA治療會引發腫瘤變性壞死，有利于消除腫瘤免疫抑制因子釋放，從而緩解免疫抑制；壞死的腫瘤細胞有利于增強免疫源性，刺激機體免疫功能；同時，加熱的過程會導致非特異性炎性反應，而高溫熱療又能夠刺激熱休克蛋白產生及增加P53穩定性，從而在加強特異性免疫的同時，促進了腫瘤細胞的凋亡[15]。

綜上所述，在單純進行TACE或RFA治療肝癌時，RFA相對對患者肝功能的影響較小，無論是TACE還是RFA均會對患者免疫功能產生影響。RFA更有利于患者術后免疫功能恢復，在諸多影響因素中，腫瘤大小在介入治療對肝功能及細胞免疫的影響中意義重大。由于本研究是初步的觀察性研究，且標本量相對較少，下一步將針對介入治療對細胞免疫影響的可能機制進行研究，以進一步完善介入治療方案。

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Influence of TACE and RFA on immune function in treatment of hepatocellular carcinoma

WANGYan，TIANRong-hua△

(DepartmentofMRI,XiaoganCentralHospital,Xiaogan,Hubei432000,China)

Objective To investigate the influence of transcatheter arterial chemoembolization (TACE) and radiofrequency ablation (RFA) on immune function in treatment of hepatocellular carcinoma (HCC).Methods 84 cases of patients with HBV-related HCC were divided into TACE group (n=52) and RFA group (n=32) according to interventional treatment.In TACE group,there were 18 cases of large size HCC (tumor diameter >5 cm) and 34 cases of small size HCC (tumor diameter ≤5 cm).In RFA group,there were 15 cases of large size HCC and 17 cases of small size HCC.The immune cell subsets were detected by using FACS Calibur flow cytometer respectively before surgery,24 h and 7 d after surgery.Results 7 d after surgery,CD4+and CD4+/CD8+of patients with small size HCC in TACE group significantly reduced comparing with their preoperative data (P<0.05),while CD4+and CD4+/CD8+of patiens with small size HCC in RFA group were elevated comparing with their preoperative data,but CD8+reduced,with statistical differences (P<0.05).24 h and 7 d after surgery,CD3+,CD4+and CD4+/CD8+of patients with large size HCC in TACE group significantly reduced comparing with their preoperative data,and those were significantly higher at 7 d after surgery than 24 h after surgery,with statistical differences (P<0.05).In RFA group,CD3+,CD4+and CD4+/CD8+of patients with large size HCC reduced at 24 h after surgery,and increased at 7 d after surgery,comparing with the preoperative data (P<0.05).7 d after surgery,CD4+/CD8+of large and small size HCC patients in RFA group were significantly higher than TACE group (P<0.05).Conclusion Whether TACE or RFA would affect the immune function in HCC patients.RFA had less impact on postoperative liver function and was conducive to the recovery of immune function.

hepatocellular carcinoma; TACE; RFA; cellular immunity

王艷，女，本科，主管技師，主要從事普通放射、乳腺鉬靶、介入、CT、MRI研究。△

，E-mail：tianrh9999@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.24.036

A

1672-9455(2015)24-3705-04

2015-05-25

2015-08-26)