小細胞和非小細胞肺癌晚期患者CD3 + CD4 + 及CD3 + CD8 + T 淋巴細胞亞群的差異

吳姍姍 嚴 峰 鄧玉玲 于臘梅 (遼寧中醫藥大學附屬醫院臨床檢驗中心，沈陽 110032)

肺癌是當今惡性腫瘤所致死亡的高風險因素之一，因為早期階段并無顯著的臨床特點和癥狀，也沒有特異性強的檢查手段［1］。所以大多數肺癌患者在確定診斷時已處于進展階段，進而嚴重影響了患者治療的效果和預后。機體抗腫瘤以細胞免疫為主，T 細胞是機體抗腫瘤免疫的重要效應細胞，并通過功能各異的淋巴細胞亞群來完成免疫調控機能。成熟的T 淋巴細胞根據其表面表達不同的CD 分子分為CD3+CD4+T 細胞和的CD3+CD8+T 細胞。T細胞亞群可反映機體細胞免疫的水平［2］。肺癌根據病理類型不同分為小細胞肺癌(Small cell lung cancer，SCLC)和非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer，NSCLC)，非小細胞肺癌包括鱗癌和腺癌。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象 65 例患者為我院2013 年1 月至2013 年9 月收治的肺癌晚期患者，其中男性33 例，女性32 例;年齡45～82 歲，平均年齡為(56.2±3.6)歲，小細胞癌14 例，非小細胞癌51 例(鱗癌20 例，腺癌31 例);Ⅲ期49 例，Ⅳ期16 例。入選標準:患者無其他腫瘤史;患者不伴發自身免疫性疾病，如系統性紅斑狼瘡、風濕性骨關節病等;患者未服用激素類藥物或接受免疫抑制劑的治療［3］。選擇與患者性別年齡相匹配的健康人20 例即健康對照組，其中男女各10 例;年齡38～70 歲，平均(55.3±2.9)歲。

1.1.2 主要試劑和儀器 BD 公司的FACSCalibur流式細胞儀、Tritest CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP 試劑、10 ×免洗溶血素。

1.2 方法

1.2.1 T 細胞亞群的檢測 具體步驟如下:患者清晨空腹抽取2 ml 外周靜脈全血選擇EDTA 抗凝，將5 μl CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP 試劑加入流式管中，加入20 μl EDTA 抗凝血，渦旋振蕩混合均勻，室溫避光15 min，加入經10 倍稀釋的免洗溶血素(BD公司)450 μl，室溫避光15 min，樣本溶血充分后流式細胞儀FACSCalibur(BD 公司)檢測，MULTISET軟件進行分析。

1.3 統計學分析 所有數據采用SPSS17.0 軟件包進行分析，差異比較采用t 檢驗，以P ＜0.05 具有統計學意義。

2 結果

2.1 肺癌晚期患者CD4+T 細胞的水平 應用流式方法對健康對照組(NC 組)、小細胞肺癌組(SCLC組)和非小細胞肺癌組(NSCLC 組)進行了CD3+CD4+T 細胞表達水平的測定，見圖1。與NC 組相比SCLC 組和NSCLC 組均顯著下降，P ＜0.01，詳細結果見表1 和圖2A。

2.2 肺癌晚期患者CD8+T 細胞的水平及CD4+/CD8+比值 與NC 組相比SCLC 組和NSCLC組CD3+CD8+T細胞表達水平并無顯著差異。但是與NC 組相比SCLC 組CD4+/CD8+比值顯著下降，P ＜0.05，詳細結果見表1 和圖2B、C。

圖1 NC 組、SCLC 組和NSCLC 組CD3 +CD4 +T 細胞和CD3 +CD8 +T 細胞表達的代表性流式細胞圖Fig.1 Representative flow cytometric graphs of CD3 +CD4 + T cells and CD3 + CD8 + T cells in NC group，SCLC group and NSCLC group

表1 小細胞肺癌與非小細胞肺癌晚期患者外周血T 細胞亞群檢測結果比較(%，±s)Tab.1 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between patients with advanced small cell lung cancer and non-small cell lung cancer(%，±s)

表1 小細胞肺癌與非小細胞肺癌晚期患者外周血T 細胞亞群檢測結果比較(%，±s)Tab.1 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between patients with advanced small cell lung cancer and non-small cell lung cancer(%，±s)

Note:Compared with NC group，1)P ＜0.05，2)P ＜0.01.

圖2 NC、NSCLC 和SCLC 三組CD3 +CD4 +、CD3 +CD8 +T 淋巴細胞及CD4 +/CD8 +比值的比較Fig.2 Comparison of percentage of CD3 +CD4 +T cells，CD3 +CD8 +T cells and CD4 +/CD8 + among NC，NSCLC and SCLC three groups

表2 非小細胞肺癌晚期男女患者外周血T 細胞亞群檢測結果比較(%，±s)Tab.2 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between males and females with advanced nonsmall cell lung cancer(%，±s)

表2 非小細胞肺癌晚期男女患者外周血T 細胞亞群檢測結果比較(%，±s)Tab.2 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between males and females with advanced nonsmall cell lung cancer(%，±s)

Note:Female group compared with male group，1)P ＜0.05.

表3 小細胞肺癌晚期男女患者外周血T 細胞亞群檢測結果比較(%，±s)Tab.3 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between males and females with advanced small cell lung cancer(%，±s)

表3 小細胞肺癌晚期男女患者外周血T 細胞亞群檢測結果比較(%，±s)Tab.3 Difference of peripheral blood T lymphocyte subset between males and females with advanced small cell lung cancer(%，±s)

2.3 不同性別肺癌晚期患者外周血CD3+CD4+T細胞和CD3+CD8+T 細胞水平以及CD4+T/CD8+T比值的比較 無論是NSCLC 還是SCLC 晚期患者，外周血CD3+CD4+T 細胞和CD3+CD8+T 細胞水平男女并無差異，見表2。CD4+T/CD8+T 比值SCLC晚期患者男女并無差異，而NSCLC 晚期患者女性顯著低于男性，見表3。

3 討論

隨著對腫瘤免疫機制的探索，我們發現惡性腫瘤的發生發展與機體的免疫功能密切相關，抗腫瘤免疫尤以細胞免疫最為重要，T 細胞亞群之間的平衡是維持免疫系統內部穩定的重要環節，目前T 細胞亞群的測定被廣泛應用于監測腫瘤的發展、判斷療效以及預后［4-6］。CD3+CD4+T 細胞能夠通過分泌細胞因子活化單核細胞、巨噬細胞和NK 細胞，并誘導單核細胞、巨噬細胞和NK 細胞發生免疫應答進而發揮抗腫瘤功能。CD4+T 細胞還可以分泌IL-2 作為第二信號活化CD8+T 細胞然后參與對抗腫瘤的免疫應答［3，7］。CD3+CD8+T 細胞為抑制性T細胞發揮免疫抑制功能，二者處于平衡狀態機體才能發揮正常的免疫功能。有研究發現由于多重免疫抑制因素的作用肺癌患者通常處于免疫抑制狀態［8］。這些抑制因素能夠抑制CD3+CD4+T 細胞的成熟和分化，進而減少了CD3+CD4+T 細胞的數量，并且削弱了對機體腫瘤細胞的免疫監督功能。與此同時CD3+CD8+T 細胞顯著增多進一步削弱識別殺傷腫瘤細胞的功能［3］。本次研究發現肺癌晚期患者無論是NSCLC 還是SCLC 較健康人其CD3+CD4+T 細胞的比例都顯著下降這與Da-Ping Yu等［3］的研究結果是一致的，而且NSCLC 和SCLC 晚期的患者其CD3+CD4+T 細胞的比例無顯著性差異，也不存在男女性別不同引起的差異這與Da-Ping Yu 等［3］的研究結果是一致的。說明肺癌晚期患者的細胞免疫功能嚴重受損，嚴重影響對腫瘤細胞的識別和殺傷，導致腫瘤細胞在機體內廣泛擴散。

本次研究發現肺癌晚期患者無論是NSCLC 還是SCLC 較健康人其CD3+CD8+T 細胞的比例都無顯著差異這與Da-Ping Yu 等［3］的研究結果不同，Da-Ping Yu 等［3］的研究發現NSCLC 患者CD3+CD8+T 細胞的比例較健康人顯著升高，分析之所以結果會有差異與我們選擇的研究對象不同有關，本研究選擇的患者是處于Ⅲ期和Ⅳ期的NSCLC 和SCLC 患者即肺癌晚期患者，而Da-Ping Yu 等人的研究選擇的研究對象為Ⅰ期-Ⅳ期的NSCLC 患者。本次研究發現肺癌晚期患者無論是NSCLC 還是SCLC 其CD3+CD8+T 細胞的比例不存在性別差異這與Da-Ping Yu 等人的得出的NSCLC 患者CD3+CD8+T 細胞的比例不存在性別差異的結論是一致的。本次研究還發現NSCLC 晚期女性患者較男性患者CD4+/CD8+比值顯著降低，而SCLC 患者則無性別引起的差異，具體原因尚不清楚有待深入研究。

綜上所述，無論是小細胞還是非小細胞肺癌晚期患者機體的細胞免疫都遭受重創CD3+CD4+T 細胞的比例較健康人顯著降低，而CD3+CD8+T 細胞的比例較健康人并無顯著差異。簡言之肺癌晚期患者由于細胞免疫功能嚴重受損，削弱了識別和殺傷腫瘤細胞的功能，使腫瘤細胞進一步廣泛擴散疾病進展，據此情況我們在今后的臨床治療應著重考慮采取針對提高機體細胞免疫功能的治療方案，并將檢測患者T 淋巴細胞亞群的變化作為評價療效和預后的參考指標。

［1］Kim JL，Cho KH，Park EC，et al.A single measure of cancer burden combining incidence with mortality rates for worldwide application［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2014，15:433-439.

［2］齊 紅，石 虹，劉玉俠，等.253 例惡性腫瘤患者外周血T 細胞亞群的檢測及其臨床意義分析［J］.中國實驗診斷學，2009，13(11):1589-1602.

［3］Da-Ping Yu，Yi Han，Qiu-Yue Zhao，et al.CD3+CD4+and CD3+CD8+lymphocyte subgroups and their surface receptors NKG2D and NKG2A in patients with non-small cell lung cancer［J］.Asian Pacific J Cancer Prevention，2014，15:2685-2688.

［4］劉秀紅，劉 莉，劉平平，等.惡性腫瘤患者T 細胞亞群變化及其與腫瘤分期的關系［J］.第三軍醫大學學報，2006，28(18):1906-1908.

［5］Saito T，Shimoda K，Kinoshita T，et al.Prediction of operative mortality based on impairment of host defense systems in patients with esophageal cancer［J］.J Surg Oncol，1993，52(1):1-8.

［6］Tsutsui S，Morita M，KuwanoH，et al.Influence of preoperative treatment and surgical operation immunefunction of patients with esophageal carcinoma［J］.J Surg Oncol，1992，49(3):176-181.

［7］Xia YH，Wang ZM，Chen RX，et al.T-cell apoptosis induced by intratumoral activated hepatic stellate cells is associated with lung metastasis in hepatocellular carcinoma［J］.Oncol Rep，2013，30:1175-1184.

［8］Ganesan AP，Johansson M，Ruffell B，et al.Tumor-infiltrating regulatory T cells inhibit endogenous cytotoxic T cell responses to lung adenocarcinoma［J］.J Immunol，2013，191:2009-2017.