牛羊血吸蟲病抗體檢測試紙條的推廣應用

陽愛國 ，周 煜，董國棟，鄧永強，田慧云，郭 莉，馬 坤，侯 巍，吳云飛，陳 冬，文 豪，吳 宣，朱銀寶

（1.四川省動物疫病預防控制中心，四川 成都610041 ；2.湖北省動物疫病預防控制中心，湖北 武漢430000 ；3.云南省動物疫病預防控制中心，云南 昆明650051 ；4.四川省廣漢市動物疫病預防控制中心，四川 德陽618000 ；5.南京路寶生物科技有限公司，江蘇 南京 210000）

血吸蟲病是嚴重危害人類和家畜健康的人畜共患寄生蟲病。為了解決適用于基層的快速診斷方法，本研究應用乳膠微球免疫層析法研制的牛羊血吸蟲病抗體檢測試紙條在四川、湖北和云南省部分疫區縣、市進行推廣應用，共計檢測116 萬份血紙樣品，并與傳統方法進行符合率和檢測效率對比試驗，取得了顯著地試驗效果和社會經濟效益。試驗結果表明，試紙條法適用于基層牛羊血吸蟲病的檢測、普查及檢疫，具有廣闊的市場應用前景。

1 材料與方法

1.1 材料 牛血吸蟲病抗體檢測試紙條由南京路寶生物科技有限公司提供；待檢血紙來自四川、湖北和云南疫區縣（市）2012 年至2014 年采集的血紙樣品116 萬頭份。

1.2 方法

1.2.1 試紙條操作步驟 將試紙條從冰箱取出置室溫平衡1 h；將各血紙進行編號，裁剪血紙圓片0.24 cm2放在0.4 mL 血紙浸泡液中，室溫浸泡30 min；取試紙條，將帶箭頭端的試紙條插入已搖勻的血紙浸出液中，待液體在NC膜上滲出0.5 cm 左右時，將試紙條平放在桌面上，5～30 min 內觀察結果；若T、C線均出現紅色帶，判為陽性；僅C線出現紅色帶，則判為陰性；T、C線均不出現紅色帶，判為無效。

1.2.2 對照檢測方法操作步驟 糞孵毛蚴法參照相關標準[1]操作，Dot-ELISA法參照試劑盒使用說明書操作。

1.2.3 符合率試驗 對試紙條檢測血吸蟲病呈陽性的牛，再采集糞便用糞孵法進行病原檢查，根據檢測結果計算兩種方法的陽性符合率。

1.2.4 檢測效率比較 分別統計試紙條、Dot-ELISA法和糞孵法3 種方法每人每天的樣品檢測數，比較3 種方法的檢測效率高低。

2 結果

2.1 試紙條的應用結果 在2012 年至2014 年之間，用試紙條對四川、湖北及云南省相關血吸蟲病流行區普查、監測或檢疫血紙樣品總計116 萬份，其中四川28 萬份、湖北71 萬份、云南17 萬份；檢出血吸蟲抗體陽性牛血樣分別為268 份、217 份和100 份，陽性率分別為0.0957%、0.0306%和0.0588%（見表1）。

表1 四川、湖北和云南血吸蟲抗體陽性分布情況

2.2 試紙條法與糞孵法的符合率 試紙條測出四川、湖北和云南陽性血紙數分別為268 份、217份和100 份，用糞孵法檢測呈陽性血吸蟲毛蚴的樣品數分別是265 頭、214 頭和98 頭，其試紙條與糞孵法的陽性符合率分別為98.88%、98.62%和98.0%（見表2）。

表2 試紙條與糞孵法血吸蟲病陽性符合率比較

2.3 效率性比較 不同方法的效率性比較結果顯示，試紙條每人每天可檢測900份牛血紙樣品，而Dot-ELISA法每人每天只能檢測90 份牛血清，糞孵毛蚴法檢測20 份牛糞便；試紙條比Dot-ELISA提高效率10 倍，比糞孵毛蚴法提高效率45 倍（見表3）。

表3 試紙條與Dot-ELISA、糞孵毛蚴法效率比較

3 討論

我國血吸蟲病主要流行于長江流域及其以南的部分區域[2]，在最易滋生釘螺的湖沼、山區、丘陵地帶流行，經濟條件落后地區尤其嚴重。為了控制血吸蟲病的流行，使流行地區逐步達到血吸蟲病傳播阻斷和控制標準，我國投入了大量的人力、物力、財力，并取得了初步成效。本試驗選擇四川、湖北和云南疫區縣市進行試紙條的推廣應用，各具有地區代表性，能很好的驗證該方法的適用性。試紙條在3 個省份的大面積應用、普查，從近3 年血吸蟲陽性率看出3 個省份疫區縣市均達到國家血吸蟲病傳播阻斷標準，有效地阻斷了血吸蟲病的傳播。

糞孵毛蚴法[3]是目前基層常用的血吸蟲病確診法，試紙條與糞孵法在四川、湖北和云南3 個省份的血吸蟲病陽性符合率分別達到了98.88%、98.62%和98.0%，說明試紙條檢測方法具有很高的準確性。效率性試驗表明，試紙條很高的效率，且操作簡單，結果直觀，非常適合疫區縣市牛、羊的大面積的普查，確保血吸蟲病查治的全面性和徹底性；另外Dot-ELISA法[4]以血清為檢測樣品，在采樣、保存和運輸比較困難，糞孵法耗時、人為誤差大，不利于快速準確判斷，而試紙條以血紙為樣品，采集和保存都方便，無需特定實驗環境就能進行快速準確診斷。由于試紙條的高效性和準確性，在血吸蟲病防治中可進行先查后治，比普治法既節約了大批醫藥費的開支，又節省了大量的勞動力的支出，大大降低了防治成本和疫病帶來的經濟損失，及時阻斷血吸蟲病的流行，加快了消滅血吸蟲的步伐，促進和保障畜牧業健康、穩定、可持續發展，確保了公共衛生的安全和社會的穩定。

試紙條具有準確性高、穩定性好、效率高、經濟實用及顯著的社會經濟效益，解決了基層家畜血吸蟲病防治工作的檢測手段需求，試紙條的推廣應用及時掌握了牛羊血吸蟲病的流行情況，為有效制訂血吸蟲病的綜合防制措施提供了科學依據。

[1]農業部血吸蟲病防治辦公室.動物血吸蟲病防治手冊[M].北京：中國農業科技出版社，1998：83-87.

[2]張雪娟，盧福莊，劉恩勇，等.斑點金標免疫滲濾法診斷家畜血吸蟲病的敏感性和特異性[J].浙江農業學報，2006，18（6）：453-457.

[3]林矯矯，胡述光，劉金明.中國家畜血吸蟲病防治[J].中國動物傳染病學報，2011，19（3）：75-81.

[4]陳年高，林丹丹，謝曙英，等.日本血吸蟲病間接血凝試驗診斷試劑盒臨床診斷效能[J].中國血吸蟲病防治雜志，2011，23（4）：377-380.