44 例犬乳腺腫瘤的病理學分析及p53 和HER-2 的蛋白表達

姚 薇，楊 超，梁偉峰，劉 云

（東北農業大學動物醫學學院，黑龍江 哈爾濱 150030）

犬乳腺腫瘤的發病率僅次于皮膚腫瘤[1]，其中良性腫瘤占50%以上，但惡性腫瘤的發病率逐年上升，是造成病犬死亡的重要原因。乳腺腫瘤多發生于母犬，是母犬全部腫瘤性疾病的50%，占母犬生殖系統疾病的82%[2]。有文獻報道，表皮生長因子受體-2（HER-2）在腫瘤的形成及生長過程中起著重要的調控作用，其超表達能阻止腫瘤細胞凋亡并促進其生長[3]。抑癌基因p53 與人類的半數腫瘤相關，當該基因受到刺激后可發揮細胞周期阻滯、細胞凋亡、維持基因組穩定等功能[4]。這兩種基因在正常情況下表達量極低，不易檢測，而在腫瘤發生的時候有明顯的蛋白過表達，在惡性腫瘤中表達量更高。雖然這兩種基因的蛋白檢測在臨床上已經有所應用，卻并沒有資料顯示腫瘤類型與兩種基因的過表達的關系。本文通過觀察44 例犬乳腺腫瘤的組織學形態，將其分類，并用免疫組化法檢測HER-2 與p53 的蛋白表達，分析兩種基因的表達與犬乳腺腫瘤的病理學關系，旨在分析腫瘤類型與兩種基因的表達量及表達強度的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 本材料來源于東北農業大學附屬動物醫院。一抗：RAB-0156 即用型C-erbB-2 兔抗人多克隆抗體，購自Maixin 公司；BS6437 p53 多克隆抗體，購自Bioword 公司。

SA1022 兔IGg-免疫組化試劑盒（SABC即用型），購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 組織學形態的觀察 將腫瘤組織分割成大小約1 cm 左右的小塊，用4%多聚甲醛溶液固定24 h后，進行修塊、脫水處理，石蠟包埋，備用。蠟塊作4 μm 連續切片。H.E.染色，常規病理學觀察。

1.2.2 HER-2、p53 蛋白表達的檢測 免疫組化法檢測HER-2、p53 蛋白的表達，按試劑盒說明書操作。

1.3 試驗結果判讀標準 病理分類：腫瘤的病理分類根據WHO分類標準[5]。

免疫組化：p53 以細胞核出現棕黃色顆粒為陽性；HER-2 以細胞膜出現棕黃色顆粒為陽性。高倍視野下隨意計數100 個腫瘤細胞，（-）完全沒有著色或少于10%腫瘤細胞有細胞膜著色；（+）大于10%的腫瘤細胞呈現微弱、不完整的細胞膜著色；（++）大于10%的腫瘤細胞呈現弱至中度完整的細胞膜著色；（+++）大于10%的腫瘤細胞呈現強的、完整的細胞膜著色[6]。

2 試驗結果

2.1 組織形態學觀察 44 例犬乳腺腫瘤病理組織切片中，通過H.E.染色共觀察到9 種類型腫瘤，其分類及所占比例如表1 所示。

2.2 HER-2、p53 蛋白表達 42 例犬乳腺腫瘤中HER-2、p53 蛋白的表達情況如圖2 所示，從表2中可以發現HER-2 在良性腫瘤中無表達，在惡性腫瘤中的表達率為38.9%；p53 在犬乳腺腫瘤中的表達可達78.6%，而在惡性腫瘤中的表達更是高達100%。從表達強度來看，p53 在18 例惡性腫瘤中15 例為（+++），3 例（++）；在24 例良性腫瘤中，有20 例為（+）。HER-2 在18 例惡性腫瘤中，3 例（+），4 例（++）。

表1 44例犬乳腺腫瘤分類情況

表2 HER-2與p53在犬乳腺腫瘤中的表達情況

3 討論

姚華等曾在試驗中發現惡性腫瘤的發病率遠遠高于良性[7]。本試驗所收集的44 例乳腺腫瘤中，良性腫瘤占54.5%，惡性達45.5%，兩者比例相接近。腫瘤的分類及惡性程度對預后有一定影響。患良性腫瘤的犬在切除后基本無復發，惡性腫瘤的犬則有不同程度的復發。腫瘤的大小對其是否復發有很大影響，如腫瘤大于5 cm，其復發較快且復發率高；對于有淋巴轉移的患犬，往往在手術后很快復發，且1-2年內死亡；浸潤性癌在預后方面效果不佳。

研究表明，30%的人類腫瘤中存在HER-2 基因的擴增/過表達，乳腺癌中HER-2 的擴增和過表達，對于評價預后、預測化療與內分泌治療反應及是否選擇Herceptin 治療意義重大[8]。臨床經驗表明，HER-2 的表達較低且全部出現于惡性腫瘤中，對臨床診斷有相當的價值。本試驗結果顯示，HER-2 在良性腫瘤中無表達，在惡性腫瘤的陽性表達為38.9%。這一結果與Dutra AP[9]和Gama A[10]報道的結果相似。在惡性腫瘤的表達中，浸潤性癌、黏液癌及混合樣癌中均有HER-2 的表達，但在髓樣癌中無表達；在表達強度上，浸潤性癌和混合樣癌中表達量較高且強，HER-2 的檢測可在這兩種類型的腫瘤的診斷上有指導意義。

Helal 等（2000）研究發現，p53 的表達與腫瘤組織的惡性程度有關，王坤等[11]測得正常乳腺組織中p53 蛋白呈陰性，而在乳腺癌中p53 蛋白的陽性表達率為65.63%。本試驗結果顯示，p53 在各類型的惡性腫瘤中均有表達，其表達量可達100%；強陽性（+++）結果出現在小葉癌、導管癌和髓樣癌中，占全部惡性腫瘤中的83.3%。，可見p53 的表達強度與乳腺腫瘤的惡性度及腫瘤類型有關，可用作乳腺腫瘤診斷與分級的參考指標，對臨床預后判斷有一定意義。

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