酶抑制法蔬菜農藥殘留快速檢測影響因素的分析探討

宋利學

當前，蔬菜生產過程中農藥被廣泛應用、提高產量的同時，也存在一些不規范用藥現象，特別是農藥殘留的超標問題，越來越引起社會各界關注。與此同時，酶抑制法蔬菜農藥殘留快速檢測，以其檢測速度快、成本低、操作簡便等特點，已成為現行最普遍的蔬菜農殘快速檢測方法，在各類檢測機構、大型農貿市場、大型超市、農產品配貨中心等得到廣泛使用。本文著重分析探討人員、環境、試劑、樣品等多種因素對檢測的影響，以及如何通過對各因素有效控制，提高實驗效率和檢測準確性。

一、酶抑制法檢測原理

酶抑制法是基于有機磷和氨基甲酸酯類農藥的昆蟲毒學原理實施檢測的，即這兩類農藥能夠抑制昆蟲中樞和周圍神經系統中乙酰膽堿酶的活性，造成神經傳導介質乙酰膽堿酶的積累，影響正常傳導，使昆蟲中毒致死。經過一系列特定的前處理方法，使酶催化乙酰膽堿水解，其水解產物與顯色劑反應，產生黃色物質，用分光光度計測定吸光度隨時間變化值，計算出抑制率，抑制率與農藥的濃度呈正相關，從而判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥的存在。

二、農殘速測的特點

酶抑制法檢測蔬菜農藥殘留具有簡便、快捷、范圍廣、經濟實用等諸多優點。如檢測方法操作簡單易行，對檢測人員的能力水平要求低；分析時間短，樣品處理省去繁雜步驟；檢測范圍涵蓋有機磷、氨基甲酸酯類農藥，無需農藥標準品；儀器、試劑價格低廉實用。

同時，也存在一些弊端，該方法只能適用定性檢測，無法做到單一農藥品種的定量檢測，檢測中使用的酶、底物、顯色劑等具有一定的特異性，需要控制的條件比較多，易出現假陽性的現象。

三、影響檢測準確性的主要因素分析

1、人員操作

檢測人員操作的正確性和可靠性是實驗室檢測水平高低的第一重要因素。人員操作因素主要反映在以下3個方面。

一是避免污染。使用移液器進行試劑配置、對照液配置和樣品檢液的提取和配置過程中，必須嚴格按照操作規范進行，避免氣泡產生、槍頭污染、排液不凈等現象；二是熟練程度。在樣品中加入提取液后，需要震蕩搖勻，震蕩力度和時間需要一定的操作技能，如果震蕩過于劇烈，會使樣品中蔬菜色素增多，影響檢測結果；三是時間控制。樣品加入底物后，必須立即檢測，操作延遲對結果影響很大。如黃瓜的測試中，立即放入檢測的抑制率是22.8%，延遲1分鐘后再放入檢測，抑制率為82.4%。酶對底物的水解反應是一個漸進的過程。一般只要有足夠的時間，酶會將底物完全水解，吸光度值達到最大值，根據實驗需要，最好采用反應初期3—5分鐘時的吸光度變化量來計算酶抑制率，提高檢測準確性。

2、環境條件

環境條件的影響主要表現在以下兩個方面。

一是室內溫度。酶抑制法是通過酶被抑制的程度來反映農藥殘留是否超標，酶的活性極易受到環境溫度的影響，酶的正常作用最適溫度為37.5—38.5℃，如果溫度過高或過低，會抑制酶的活性，影響實驗結果。若室溫達不到25℃，必須將酶液和顯色劑放入37℃恒溫水中15分鐘。二是防止交叉污染。實驗室的待測樣品與標準物質、試劑藥品等必須分開隔離存放，提取液、酶液、底物、顯色劑的移液器提取槍頭必須明確分開，防止交叉污染。

3、器具試劑

主要包括檢測試劑、水、刻度器具、器皿等。檢測試劑如酶、底物粉劑等，未配置時必須放置在冰箱0℃以下冷凍保存。實驗用水一定要使用無污染的蒸餾水，專門器皿存放；刻度器具如移液器，需要進行檢定和自校，保證精密度達到相關要求；玻璃器皿，如燒杯、試管要經過充分的沖洗、干燥，做到用后立即清洗，滴干后用干凈紗布蓋好，防止微量殘留部分交叉污染。

4、樣品因素

一是抽樣環節。抽樣時間、抽樣量、抽樣單元、抽樣部位、樣品封存和運輸等環節，都要按照GB/T8855-2008新鮮水果和蔬菜取樣方法的要求，避免抽樣誤差；二是樣品制備。樣品要求切成1厘米大小的碎片，太小太碎會將蔬菜中的色素溶解到提取液中，影響檢測結果。如蔥、蒜、香菜、韭菜等蔬菜含有植物次生物質，容易產生假陽性，可采取整體（株）浸提。

總之，通過對以上因素實施控制，可以最大限度地發揮該方法的效用，提高檢測效率和檢測的準確性，以滿足各相關領域開展蔬菜快速檢測的需求。